بيب على رقاقة: دراسة خالية من التسمية من التفاعلات البروتين فسفوانوسيتيد
Summary
هنا نقدم طبقة ثنائية الدهون المدعومة في سياق منصة ميكروفلويديك لدراسة التفاعلات البروتين فسفوانوسيتيد باستخدام طريقة خالية من التسمية على أساس التشكيل الرقم الهيدروجيني.
Abstract
العديد من البروتينات الخلوية تتفاعل مع أسطح الغشاء للتأثير على العمليات الخلوية الأساسية. ويمكن توجيه هذه التفاعلات نحو مكون معين من الدهون داخل غشاء، كما هو الحال في فوسفهوانوسيتيدس (بيبس)، لضمان توطين خلوية محددة و / أو تفعيل. وقد تم دراسة بيبس والنطاقات الخلوية ملزمة بيب على نطاق واسع لفهم أفضل لدورها في علم وظائف الأعضاء الخلوية. طبقنا فحص التشكيل الرقم الهيدروجيني على الطبقات ثنائية الداعم (سلبس) كأداة لدراسة التفاعلات البروتين بيب. في هذه الدراسات، يتم استخدام الرقم الهيدروجيني الحساسة أورثو -Sulforhodamine B مترافق فوسفهاتيديليثانولامين للكشف عن التفاعلات البروتين بيب. عند ربط البروتين إلى سطح غشاء يحتوي على بيب، يتم تشكيل إمكانات بينية ( أي تغيير في درجة الحموضة المحلية)، وتحويل حالة البروتونات من التحقيق. يتم تقديم دراسة حالة من الاستخدام الناجح لفحص التشكيل الرقم الهيدروجيني باستخدام فوسفهوليباس C delta1 بليكسترفي مجال التماثل (بلك-δ1 ف) و فوسفهاتديلينوسيتول 4،5-بيسفوسفهات (بي (4،5) P 2 ) التفاعل كمثال. كان ثابت التفكك الظاهري ( K د، التطبيق ) لهذا التفاعل 0.39 ± 0.05 ميكرومتر، على غرار K د، والقيم التطبيق التي تم الحصول عليها من قبل الآخرين. كما لوحظ سابقا، المجال بلك-δ1 ف هو بي (4،5) P 2 محددة، ويظهر أضعف ملزم نحو فوسفهاتديلينوسيتول 4-فوسفات، وليس ملزمة ل سسبس نقية فوسفاتيديلكولين. المقايسة بيب على رقاقة هو مفيد على المقايسات التقليدية بيب ملزمة، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على انخفاض حجم العينة ولا يجند / مستقبلات وضع العلامات المتطلبات، والقدرة على اختبار التفاعلات غشاء عالية والمنخفضة تقارب مع كل من الصغيرة و جزيئات كبيرة، وتحسين إشارة إلى نسبة الضوضاء. وبناء على ذلك، فإن استخدام نهج بيب على رقاقة أن يسهل توضيح آليات مجموعة واسعة من التفاعلات الغشاء. وعلاوة على ذلك، يمكن أن يكون هذا الأسلوب شسيد في تحديد العلاجات التي تعدل قدرة البروتين على التفاعل مع الأغشية.
Introduction
عدد لا يحصى من التفاعلات والعمليات البيوكيميائية تجري على سطوح غشاء السائل ثنائي الأبعاد. العضيات المغلقة الغشاء في خلايا حقيقيات النواة هي فريدة من نوعها ليس فقط في العمليات البيوكيميائية والبروتيوم المرتبطة بها ولكن أيضا في تكوين الدهون. فئة استثنائية واحدة من الفوسفورية هي فوسفهوانوسيتيدس (بيبس). على الرغم من أنها تشكل 1٪ فقط من الدهون الدهنية الخلوية، فإنها تلعب دورا حاسما في التنبيه إشارة، أوتوفاجي، والغشاء الاتجار، من بين أمور أخرى 1 ، 2 ، 3 ، 4 . يؤدي الفسفرة الديناميكية لمجموعة رأس الإينوسيتول بواسطة كينازات بيب الخلوية إلى ظهور سبعة مجموعات رأسية بيب هي أحادية أو ثنائية أو تريس فوسفهوريلاتد 5 . بالإضافة إلى ذلك، بيبس تحديد الهوية تحت الخلوية من الأغشية وتكون بمثابة مواقع لرسو السفن المتخصصة لالبروتينات / الإنزيمات التي تحتوي على واحد أو أكثر من فوسفهوانوسعلى سبيل المثال، بليكسترين هومولوغي (ف)، فوكس هومولوغي (بس)، و إبسين N- محطة التماثل (إنث) 6 ، 7 . واحدة من أفضل المجالات درس الملزمة بيب هو فوسفهوليباز C (بلك) -δ1 ف المجال الذي يتفاعل على وجه التحديد مع فوسفاتيديلينوسيتول 4،5-بيسفوسفهات (بي (4،5) P 2 ) ضمن نانومولار منخفضة منخفضة تقارب مجموعة ميكرومولار 8 ، 9 ، 10 ، 11 .
وقد تم تطوير مجموعة متنوعة من الطرق الكمية والكمية في المختبر واستخدامها لدراسة آلية، الديناميكا الحرارية، وخصوصية هذه التفاعلات. ومن بين المقايسات الأكثر شيوعا بين بيب الملزمة هي رنين بلاسمون السطحي (سبر)، و كالوريمتري متساوي الحرارة (إيتس)، و التحليل الطيفي بالرنين المغناطيسي النووي (نمر)، و فحص الطفو الليبوسومي / الترسيب، و شحم الدهون (شرائط الدهون / شرائط بيب)12 ، 13 . على الرغم من أن هذه تستخدم على نطاق واسع، لديهم جميعا العديد من العيوب. على سبيل المثال، سير، مركز التجارة الدولية، و نمر تتطلب كميات كبيرة من العينة، وأجهزة مكلفة، و / أو الموظفين المدربين 12 ، 13 . بعض أشكال فحص مثل الأجسام المضادة على أساس الدهون-بلوتس الاستفادة من أشكال قابلة للذوبان في الماء من بيبس وتقديمها بطريقة نفيسيولوجيكال 12 ، 14 ، 15 ، 16 . وبالإضافة إلى ذلك، لا يمكن أن تكون الكميات الدهنية كوانتيتاتد موثوق وأنها كثيرا ما أدت إلى ملاحظات إيجابية / سلبية كاذبة 12 ، 17 ، 18 . للتغلب على هذه التحديات وتحسين مجموعة الأدوات الحالية، تم إنشاء طريقة جديدة خالية من التسمية على أساس طبقة ثنائية الدهن المدعومة (سلب) في سياق آم منصة إيكروفليديك، التي تم تطبيقها بنجاح لدراسة التفاعلات البروتين بيب ( الشكل 1 ) 19 .
وتستند الاستراتيجية المستخدمة للكشف عن التفاعلات البروتين بيب على استشعار الرقم الهيدروجيني التشكيل. وهذا ينطوي على صبغ حساسية الرقم الهيدروجيني التي لديها أورثو -Sulfourhodamine B ( س سرب) مترافق مباشرة إلى فوسفاتيديليثانولامين رئيس مجموعة الدهون 20 . س سرب-بوب التحقيق ( الشكل 2A ) هو الفلورسنت للغاية في درجة الحموضة منخفضة ومطفأ في درجة الحموضة عالية مع يكا حوالي 6.7 ضمن 7.5 مول٪ بي (4،5) P 2 – تحتوي على سلبس ( الشكل 5B ). وقد تم استخدام بلك-δ1 نطاق ف على نطاق واسع للتحقق من صحة البروتين-بيب ملزم المنهجيات نظرا لخصوصيتها العالية بي (4،5) P 2 ( الشكل 5A ) 21 ، 22 ،"> 23 ، 24 ، 25 .Hence، نحن السبب في أن المجال بلك-δ1 ف يمكن أن تستخدم لاختبار ملزم ل بي (4،5) P 2 من خلال فحص بيب على رقاقة.و بناء المجال ف (P4.4)، وبالتالي يجذب أوه – أيونات ( الشكل 5C ) عند ربط بي (4،5) P 2 – تحتوي على سلبس، مجال ف يجلب أوه – أيونات إلى سطح الغشاء، والذي بدوره ينظم إمكانية بينية والتحولات الدولة بروتوناتيون من س SRB-البابا (الشكل 5C) 26. ووظيفة من تركيز نطاق PH، تطفأ مضان (الشكل 6A). وأخيرا، فإن البيانات تطبيع هو يصلح ل إيسوثرم ملزمة لتحديد تقارب من ف المجال بي (4،5) P 2 التفاعل ( الشكل 6B ، 6C ). </ P>
في هذه الدراسة، يتم توفير بروتوكول مفصل لأداء البروتين ملزم ل سلب التي تحتوي على بيب داخل منصة ميكروفلويديك. هذا البروتوكول يأخذ القارئ من تجميع جهاز ميكروفلويديك وإعداد حويصلة لتشكيل سلب والبروتين ملزمة. وبالإضافة إلى ذلك، يتم توفير الاتجاهات لتحليل البيانات لاستخراج المعلومات تقارب ل بلك-δ1 ف المجال بي (4،5) التفاعل P 2 .
Protocol
Representative Results
Discussion
كل البديل بيب، وإن كان في تركيزات منخفضة، موجود على سطح عصاري خلوي من عضيات محددة حيث أنها تسهم في إنشاء تكوين البدني الفريد والخصوصية الوظيفية للغشاء العضوي 1 . واحدة من أهم استخدامات بيبس هو بمثابة منصة لرسو السفن محددة للعديد من البروتينات التي تتطلب ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
دس و سيس، جزئيا، بمنحة AI053531 (نييد، نيه)؛ تم دعم سس و بسك بالمنحة N00014-14-1-0792 (أونر).
Materials
| Coverslip | |||
| Glass Coverslips: Rectangles | Fisher Scientific | 12-544B | 22 x 40 x 0.16 – 0.19 mm, No. 1 1/2; Borosilicate Glass |
| 7X Cleaning Solution | MP Biomedicals | 976670 | Detergent |
| PYREX Crystallizing Dish | Corning | 3140-190 | Borosilicate glass dish with a flat bottom; Diameter x Height (190 x 100 mm); Distributor: VWR (89090-700) |
| Sentry Xpress 2.0 | Paragon Industries | SC-2 | Kiln |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PDMS | |||
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 4019862 | Polydimethylsiloxane (PDMS); Distributor: Ellsworth Adhesives |
| PYREX Desiccator | VWR | 89134-402 | Vacuum Rated |
| Biopsy punch | Harris | 15110-10 | Harris Uni-Core; 1.0 mm diameter; Miltex Biopsy Punch with Plunger (Cat. No. 15110-10) can be used as an alternative |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Device | |||
| Plasma Cleaning System | PlasmaEtch | PE25-JW | 2-stage Direct Drive Oil Vacuum Pump, O2 service (Krytox Charged) |
| Digital Hot Plate | Benchmark | H3760-H | Purchased through Denville Scientific (Cat. No. 1005640) |
| Frosted Micro Slides | VWR | 48312-003 | Frosted, Selected, and Precleaned; Made of Swiss Glass; Thickness: 1 mm; Dimensions: 75 x 25 mm; GR 144 |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mold | |||
| AutoCAD | Autodesk | v.2016 | Drafting software for the photomask design |
| Photomask | CAD/Art Services | N/A | Design with black background and clear features was printed at 20k dpi resolution on a transparent mask (5 x 7 in) by CAD/Art Services |
| Silicone Wafers | University Wafer | 1575 | Prime Grade, Single Side Polished; 100 mm (4 inch) Diameter; 525 um Thickness |
| SU-8 50 | MicroChem Corp. | N/A | Negative Tone Photoresist; Penn State Nanofabrication Facility Property |
| SU-8 Developer | MicroChem Corp. | N/A | Penn State Nanofabrication Facility Property |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| SUV | |||
| 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Avanti Polar Lipids | 850457C | POPC |
| L-α-phosphatidylinositol-4-phosphate | Avanti Polar Lipids | 840045X | PI4P |
| L-α-phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate | Avanti Polar Lipids | 840046X | PI(4,5)P2 |
| 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine | Avanti Polar Lipids | 850757C | POPE; Required for the synthesis of oSRB-POPE |
| Lissamine Rhodamine B Sulfonyl Chloride (mixed isomers) | ThermoFisher Scientific | L-20 | Required for the synthesis of oSRB-POPE |
| pH Sensitive Fluorescent Lipid Probe (oSRB-POPE) | In-house | N/A | In-house Synthesis (Huang D. et al. 2013) |
| Glass Scintillation Vial | VWR | 66022-065 | 20 mL volume capacity |
| Aquasonic 250D | VWR | N/A | Ultrasonic Water Bath |
| Nuclepore Track-Etched Membranes | Whatman | 110605 | Polycarbonate Membrane; Diameter: 25 mm; Pore Size: 0.1 um; Distributor: Sigma-Aldrich |
| Chloroform | VWR | CX1054-6 | HPLC grade |
| LIPEX Extruder | Transferra Nanosciences | T.001 | LIPEX 10 mL Thermobarrel Extruder |
| Viscotek 802 DLS | Malvern Instruments | N/A | Dynamic Light Scattering; Penn State X-Ray Crystallography Facility Property |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Data Analysis | |||
| GraphPad Prism | GraphPad Software | v.6 | Curve-fitting software for data analysis |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope | |||
| Axiovert 200M Epifluorescence Microscope | Carl Zeiss Microscopy | N/A | Microscope |
| AxioCam MRm Camera | Carl Zeiss Microscopy | N/A | Camera |
| X-Cite 120 | Excelitas Technologies | N/A | Light Source |
| Alexa 568 Filter Set | Carl Zeiss Microscopy | N/A | Ex/Em 576/603 nm |
| AxioVision LE64 v.4.9.1.0 Software | Carl Zeiss Microscopy | N/A | Image Processing Software |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Andere | |||
| Tips | VWR | 10034-132 | 200 uL pipette tips; Thin and smooth tip for applying the protein solution into the microfluidic channel |
| Tips | VWR | 53509-070 | 10 uL pipette tips; Thin and smooth tip for applying the vesicle solution into the microfluidic channel |
| Orion Star A321 pH meter | Thermo Scientific | STARA3210 | pH meter |
| Orion micro pH probe | Thermo Scientific | 8220BNWP | micro pH probe |
| N-(2-Hydroxyethyl)-Piperazine-N'-(2-Ethanesulfonic Acid) | VWR | VWRB30487 | HEPES, Free Acid |
| Sodium Chloride | VWR | BDH8014-2.5KGR | NaCl |
| Tubing | Allied Wire & Cable | TFT-200-24 N | Internal Diameter: 0.020-0.026 inches (0.051-0.066 cm); Wall Thickness: 0.010 inches (0.025 cm); Flexible Polytetrafluoroethylene Thin-Wall Tubing; Natural Color |
| Nitrogen Gas – Industrial | Praxair | N/A | Local Provider |
| Oxygen Gas – Industrial | Praxair | N/A | Local Provider |
| Liquid Nitrogen | Praxair | N/A | Local Provider |
Referenzen
- Di Paolo, G., De Camilli, P. Phosphoinositides in cell regulation and membrane dynamics. Nature. 443 (7112), 651-657 (2006).
- Shewan, A., Eastburn, D. J., Mostov, K. Phosphoinositides in cell architecture. Cold Spring Harb Perspect Biol. 3 (8), a004796 (2011).
- Picas, L., Gaits-Iacovoni, F., Goud, B. The emerging role of phosphoinositide clustering in intracellular trafficking and signal transduction. F1000Res. 5, (2016).
- Lystad, A. H., Simonsen, A. Phosphoinositide-binding proteins in autophagy. FEBS Lett. 590 (15), 2454-2468 (2016).
- Balla, T. Phosphoinositides: Tiny lipids with giant impact on cell regulation. Physiol Rev. 93, 1019-1137 (2013).
- Lemmon, M. A. Membrane recognition by phospholipid-binding domains. Nat Rev Mol Cell Biol. 9 (2), 99-111 (2008).
- Kutateladze, T. G. Translation of the phosphoinositide code by PI effectors. Nat Chem Biol. 6 (7), 507-513 (2010).
- Harlan, J. E., Hajduk, P. J., Yoon, H. S., Fesik, S. W. Pleckstrin homology domains bind to phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate. Nature. 371 (6493), 168-170 (1994).
- Garcia, P., et al. The pleckstrin homology domain of phospholipase C-delta 1 binds with high affinity to phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate in bilayer membranes. Biochemie. 34 (49), 16228-16234 (1995).
- Lemmon, M. A., Ferguson, K. M., O’Brien, R., Sigler, P. B., Schlessinger, J. Specific and high-affinity binding of inositol phosphates to an isolated pleckstrin homology domain. Proc Natl Acad Sci U S A. 92 (23), 10472-10476 (1995).
- Flesch, F. M., Yu, J. W., Lemmon, M. A., Burger, K. N. Membrane activity of the phospholipase C-delta1 pleckstrin homology (PH) domain. Biochem J. 389, 435-441 (2005).
- Narayan, K., Lemmon, M. A. Determining selectivity of phosphoinositide-binding domains. Methods. 39 (2), 122-133 (2006).
- Scott, J. L., Musselman, C. A., Adu-Gyamfi, E., Kutateladze, T. G., Stahelin, R. V. Emerging methodologies to investigate lipid-protein interactions. Integr Biol (Camb). 4 (3), 247-258 (2012).
- Dowler, S., Currie, R. A., Downes, C. P., Alessi, D. R. DAPP1: A dual adaptor for phosphotyrosine and 3-phosphoinositides. Biochem J. 342, 7-12 (1999).
- He, J., et al. Molecular basis of phosphatidylinositol 4-phosphate and ARF1 GTPase recognition by the FAPP1 pleckstrin homology (PH) domain. J Biol Chem. 286 (21), 18650-18657 (2011).
- Ceccarelli, D. F., et al. Non-canonical interaction of phosphoinositides with pleckstrin homology domains of Tiam1 and ArhGAP9. J Biol Chem. 282 (18), 13864-13874 (2007).
- Huang, S., Gao, L., Blanchoin, L., Staiger, C. J. Heterodimeric capping protein from Arabidopsis is regulated by phosphatidic acid. Mol Biol Cell. 17 (4), 1946-1958 (2006).
- Yu, J. W., et al. Genome-eide analysis of membrane targeting by S. cerevisiae pleckstrin homology domains. Mol Cell. 13 (5), 677-688 (2004).
- Jung, H., Robison, A. D., Cremer, P. S. Detecting protein-ligand binding on supported bilayers by local pH modulation. J Am Chem Soc. 131 (3), 1006-1014 (2009).
- Huang, D., Zhao, T., Xu, W., Yang, T., Cremer, P. S. Sensing small molecule interactions with lipid membranes by local pH modulation. Anal Chem. 85 (21), 10240-10248 (2013).
- Saxena, A., et al. Phosphoinositide binding by the pleckstrin homology domains of Ipl and Tih1. J Biol Chem. 277 (51), 49935-49944 (2002).
- Knödler, A., Mayinger, P. Analysis of phosphoinositide-binding proteins using liposomes as an affinity matrix. Biotechniques. 38 (6), 858-862 (2005).
- Baumann, M. K., Swann, M. J., Textor, M., Reimhult, E. Pleckstrin homology-phospholipase C-delta1 interaction with phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate containing supported lipid bilayers monitored in situ with dual polarization interferometry. Anal Chem. 83 (16), 6267-6274 (2011).
- Saliba, A. E., et al. A quantitative liposome microarray to systematically characterize protein-lipid interactions. Nat Methods. 11 (1), 47-50 (2014).
- Arauz, E., Aggarwal, V., Jain, A., Ha, T., Chen, J. Single-molecule analysis of lipid-protein interactions in crude cell lysates. Anal Chem. 88 (8), 4269-4276 (2016).
- Best, Q. A., Xu, R., McCarroll, M. E., Wang, L., Dyer, D. J. Design and investigation of a series of rhodamine-based fluorescent probes for optical measurements of pH. Org Lett. 12 (14), 3219-3221 (2010).
- Lee, J., Choi, K. H., Yoo, K. Innovative SU-8 lithography techniques and their applications. Micromachines. 6 (1), 1-18 (2014).
- Poyton, M. F., Sendecki, A. M., Cong, X., Cremer, P. S. Cu(2+) binds to phosphatidylethanolamine and increases oxidation in lipid membranes. J Am Chem Soc. 138 (5), 1584-1590 (2016).
- Karasek, P., Grym, J., Roth, M., Planeta, J., Foret, F. Etching of glass microchips with supercritical water. Lab Chip. 15 (1), 311-318 (2015).
- Thomas, M. S., et al. Print-and-peel fabrication for microfluidics: what’s in it for biomedical applications?. Ann Biomed Eng. 38 (1), 21-32 (2010).
- Waheed, S., et al. 3D printed microfluidic devices: enablers and barriers. Lab Chip. 16 (11), 1993-2013 (2016).
- Axmann, M., Schutz, G. J., Huppa, J. B. Single molecule fluorescence microscopy on planar supported bilayers. J Vis Exp. (105), e53158 (2015).
- Barenholz, Y., et al. A simple method for the preparation of homogeneous phospholipid vesicles. Biochemie. 16 (12), 2806-2810 (1977).
- Castellana, E. T., Cremer, P. S. Solid supported lipid bilayers: From biophysical studies to sensor design. Surface Science Reports. 61 (10), 429-444 (2006).
- Hamai, C., Yang, T., Kataoka, S., Cremer, P. S., Musser, S. M. Effect of average phospholipid curvature on supported bilayer formation on glass by vesicle fusion. Biophys J. 90 (4), 1241-1248 (2006).
- Tero, R. Substrate effects on the formation process, structure and physicochemical properties of supported lipid bilayers. Materials. 5 (12), 2658-2680 (2012).
- Ferguson, K. M., Lemmon, M. A., Schlessinger, J., Sigler, P. B. Structure of the high affinity complex of inositol trisphosphate with a phospholipase C pleckstrin homology domain. Cell. 83 (6), 1037-1046 (1995).
- Simonsson, L., Hook, F. Formation and diffusivity characterization of supported lipid bilayers with complex lipid compositions. Langmuir. 28 (28), 10528-10533 (2012).
- Cong, X., Poyton, M. F., Baxter, A. J., Pullanchery, S., Cremer, P. S. Unquenchable surface potential dramatically enhances Cu(2+) binding to phosphatidylserine lipids. J Am Chem Soc. 137 (24), 7785-7792 (2015).
- Robison, A. D., et al. Polyarginine interacts more strongly and cooperatively than polylysine with phospholipid bilayers. J Phys Chem B. 120 (35), 9287-9296 (2016).
- Robison, A. D., Huang, D., Jung, H., Cremer, P. S. Fluorescence modulation sensing of positively and negatively charged proteins on lipid bilayers. Biointerphases. 8 (1), 1 (2013).
- Tabaei, S. R., et al. Formation of cholesterol-rich supported membranes using solvent-assisted lipid self-assembly. Langmuir. 30 (44), 13345-13352 (2014).
- Johnson, S. J., et al. Structure of an adsorbed dimyristoylphosphatidylcholine bilayer measured with specular reflection of neutrons. Biophys J. 59 (2), 289-294 (1991).
- Koenig, B. W., et al. Neutron reflectivity and atomic force microscopy studies of a lipid bilayer in water adsorbed to the surface of a silicon single crystal. Langmuir. 12 (5), 1343-1350 (1996).
- Tanaka, M., Sackmann, E. Polymer-supported membranes as models of the cell surface. Nature. 437 (7059), 656-663 (2005).
- Renner, L., et al. Supported lipid bilayers on spacious and pH-responsive polymer cushions with varied hydrophilicity. J Phys Chem B. 112 (20), 6373-6378 (2008).
- Wagner, M. L., Tamm, L. K. Tethered polymer-supported planar lipid bilayers for reconstitution of integral membrane proteins: Silane-polyethyleneglycol-lipid as a cushion and covalent linker. Biophys J. 79 (3), 1400-1414 (2000).
- Pace, H., et al. Preserved transmembrane protein mobility in polymer-supported lipid bilayers derived from cell membranes. Anal Chem. 87 (18), 9194-9203 (2015).
- Braunger, J. A., Kramer, C., Morick, D., Steinem, C. Solid supported membranes doped with PIP2: Influence of ionic strength and pH on bilayer formation and membrane organization. Langmuir. 29 (46), 14204-14213 (2013).
- Paridon, P. A., de Kruijff, B., Ouwerkerk, R., Wirtz, K. W. Polyphosphoinositides undergo charge neutralization in the physiological pH range: A 31P-NMR study. Biochim Biophys Acta. 877 (1), 216-219 (1986).
- Liu, C., Huang, D., Yang, T., Cremer, P. S. Monitoring phosphatidic acid formation in intact phosphatidylcholine bilayers upon phospholipase D catalysis. Anal Chem. 86 (3), 1753-1759 (2014).
- Saad, J. S., et al. Structural basis for targeting HIV-1 Gag proteins to the plasma membrane for virus assembly. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (30), 11364-11369 (2006).
- Hsu, N. Y., et al. Viral reorganization of the secretory pathway generates distinct organelles for RNA replication. Cell. 141 (5), 799-811 (2010).
- Del Campo, C. M., et al. Structural basis for PI(4)P-specific membrane recruitment of the Legionella pneumophila effector DrrA/SidM. Structure. 22 (3), 397-408 (2014).
- Kolli, S., et al. Structure-function analysis of vaccinia virus H7 protein reveals a novel phosphoinositide binding fold essential for poxvirus replication. J Virol. 89 (4), 2209-2219 (2015).
- Cho, N. J., et al. Phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate is an HCV NS5A ligand and mediates replication of the viral genome. Gastroenterology. 148 (3), 616-625 (2015).
