Analyse automatisée Gait chez la souris avec la blessure de Constriction chronique
Summary
L’évaluation précise de la réponse de la douleur chez un modèle animal neuropathique est critique pour étudier la physiopathologie des maladies de douleur et élaborer de nouveaux analgésiques. Nous présentons une méthode sensible et objective pour déterminer la fonction sensorielle du rongeur hind patte par un système d’analyse automatisée de démarche.
Abstract
Le critère de von Frey est une méthode classique qui a été largement utilisée pour examiner la fonction sensorielle des animaux de la douleur neuropathique. Toutefois, il a quelques inconvénients tels que les données subjectives et l’exigence d’un expérimentateur habile et expérimenté. A ce jour, diverses modifications ont amélioré la méthode de von Frey, mais il a encore quelques limitations. Des rapports récents ont suggéré que l’analyse de la démarche produit des données plus précises et objectives des animaux neuropathiques. Ce protocole montre comment effectuer l’analyse automatisée de démarche pour déterminer le degré de la douleur neuropathique chez la souris. Après plusieurs jours d’acclimatation, les souris étaient autorisés à circuler librement sur le plancher de verre pour éclairer les empreintes. Puis, quantification de l’empreinte et la démarche ont été effectuées par le biais de clips vidéo avec analyse automatique des différents paramètres de marche, tels que la zone de temps patte pour l’impression, swing, angle de patte, etc.
L’objectif principal de cette étude est de décrire la méthodologie de l’analyse de la démarche automatisée et brièvement le comparer avec les données de l’essai sensoriel classique à l’aide de filaments de von Frey.
Introduction
Les changements pathologiques du système nerveux induite par un dysfonctionnement métabolique, inflammation, infection, traumatisme, ischémie, ou maladie auto-immune occasionnellement entraîner des douleurs neuropathiques, qui sont définie comme une douleur résultant en conséquence directe d’une lésion ou maladie affectant le système somatosensoriel1. La douleur neuropathique est souvent insupportable, et malheureusement, analgésiques classiques ne produisent généralement pas suffisamment la douleur soulagement2. Une caractéristique importante de la douleur neuropathique contient spontanées et induite par la stimulation des douleurs (c.-à-d., allodynie et hyperalgésie). Allodynie est une réponse nociceptive qui se produit à des stimuli normalement non douloureuse, comme toucher léger ou stimulation chaude. Hyperalgésie indique une réponse de douleur accrue à des stimuli nociceptifs mécaniques et/ou thermiques3. Bien que ces deux symptômes menacerait gravement la qualité de vie des patients, allodynie mécanique évoqué par stimulation tactile légère est le symptôme le plus exaspérant car contact doux est difficile d’éviter dans la vie quotidienne.
Pour étudier le mécanisme sous-jacent et nouveaux analgésiques pour le traitement des douleurs neuropathiques, la mesure précise de la réponse de la douleur est indispensable. Nombreux modèles de douleur neuropathique animaux ont développé des réponses nociceptives sur la postérieur patte zone en raison de sa grande accessibilité4,5,6,7. Ainsi, la plupart des évaluations réponse de douleur ont été réalisées sur la surface plantaire ou dorsale de la patte arrière en appliquant des stimuli mécaniques à l’aide d’instruments spéciaux, tels que les filaments de von Frey. Une des méthodes plus fréquemment utilisées est le haut et vers le bas de la méthode décrite par Dixon8 et les versions ultérieures modifié les versions9,10. Cependant, très habiles et expérimentés expérimentateurs sont nécessaires pour effectuer le test de von Frey et les résultats peuvent être subjectifs.
Le système d’analyse automatisé démarche peut enquêter sur les troubles neurologiques et neuromusculaires en mesurant différents paramètres de la marche en se déplaçant librement des rongeurs. Dans une variété de modèles animaux de lésion du nerf, le degré de la nociception et l’effet antinociceptif de plusieurs traitements peuvent être évaluées sans ajouter une douleur stimulation11,12,13, 14. ce système d’analyse peut détecter les paramètres de la démarche statiques et dynamiques, tels que : patte imprimée (la zone de l’empreinte de patte complète que les contacts avec le sol), patte d’intensité (l’intensité moyenne de la zone contact de patte), “Stridez” de longueur (le position de la distance entre les placements successifs du même pied), phase (la durée de contact avec le sol pour une seule patte arrière), séquence (l’ordre dans lequel les quatre pattes sont placés sur le plancher), swing (la durée de la phase pendulaire) et vitesse (calculée d’oscillation de “Stridez” longueur et swing durée et exprimée en pixels par seconde). Cet article illustre l’utilisation d’un système d’analyse et fournit une brève comparaison des données avec le critère de von Frey constriction chronique blessures (CCI) neuropathique chez des souris.
Protocol
Representative Results
Discussion
Actuellement, mesure d’allodynie mécanique à l’aide de filaments de von Frey est le plus couramment méthode dans des modèles animaux de douleur pour démontrer une hypersensibilité tactile. Des modèles animaux pour les douleurs neuropathiques ont continué à être développé, la méthodologie d’évaluation de la fonction sensorielle a été également améliorée8,9,10,15. Dans ce…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Cette recherche a été financée par Chungnam National University, Corée Institut de la médecine orientale (KIOM) et une subvention de la Corée Health Technology R & D projet à travers la Corée santé Industrie développement Institut (KHIDI), financé par le ministère de la santé & Bien-être, République de Corée (numéro de licence : HI15C0007).
Materials
| 0.9% Saline | JW Pharmaceutical | N/A | Vehicle for drugs |
| 1ml syringe | BD Plastipak | 300013 | Injecting device |
| 2, 2, 2-tribromoethanol (97% purity) | Sigma | T48402 | Anesthetic |
| 2-methyl-2-buthanol (99% purity) | Sigma | 152463 | Solvent for 2, 2, 2-tribromoethanol |
| Catwalk Automated gait analysis system | Noldus | N/A | Automatic analysis software of aniaml gait |
| Chromic catgut (4-0 thickness) | AILEE | C442 | Ligature to make chronic constriction injury on the sciatic nerve |
| Gabapentin | Sigma | Y0001280 | Analgeisc, Used as a positive control drug in this study |
| Graefe Forceps | F.S.T | 11051-10 | Surgical instrument |
| Heating Pad | DAESHIN ELECTRONICS | M-303AT | Regulation of body temperature |
| ICR Mouse | Samtaco | N/A | Experimental animal |
| Mersilk (3-0 thickness) | ETHICON | W598H | Suture material for surgical closure of skin |
| Micro-Mosquito | F.S.T | 13010-12 | Surgical instrument |
| Micro-scissors | F.S.T | 14090-09 | Surgical instrument |
| Needle holder | F.S.T | 12002-12 | Surgical instrument |
| Povidone Iodine | Firson | N/A | Disinfectant to prevent infection after surgery |
| Scalpel blade | F.S.T | 10010-00 (#10) | Surgical instrument to make an incision |
| Scalpel handle | F.S.T | 10003-12 (#3) | Surgical instrument to make an incision |
| Von-Frey filaments | North Coast | NC12775-99 | Measurement device to test sensory function for mechanical stimulation |
Referenzen
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