Das folgende Protokoll konzentriert sich auf die Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen (STS). Dieses Modell könnte uns helfen, besser zu verstehen, die molekularen Hintergründe und pharmakologischen Profil von diesen seltenen Tumoren und könnte einen Ausgangspunkt für die weitere Forschung zur Verbesserung der STS Management darstellen.
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Methodenartikel
Einrichtung einer primären Kultur des Patienten abgeleitet Weichteilsarkomen
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Weichgewebe Sarkome (STS) decken ein Spektrum von heterogenen Tumoren mit einer schwierigen Diagnose, Klassifikation und Management. Bis heute wurden mehr als 50 histologische Subtypen dieser seltenen soliden Tumoren identifiziert. So ist unser Verständnis für die Biologie dieser Tumoren aufgrund ihrer außerordentlichen Vielfalt und niedrige Inzidenz, noch begrenzt. Patienten-abgeleiteten Kulturen repräsentieren die ideale Plattform, STS-Pathophysiologie und Pharmakologie zu studieren. Wir entwickelt somit ein menschliches Präklinisches Modell STS ab Tumor Proben von Patienten, die eine chirurgische Resektion geerntet. Patienten abgeleitet STS Zellkulturen wurden aus der chirurgischen Proben von Kollagenase Verdauung und isoliert durch Filtration. Zellen wurden gezählt, ausgesät, und Links für 14 Tage in standard Monolayer-Kulturen und dann durch nachgeschaltete Analyse verarbeitet. Bevor Sie Molekulare oder pharmazeutische Analysen durchführen, die Einrichtung von STS Primärkulturen wurde bestätigt durch die Evaluierung zytomorphologischen Merkmale und, wenn vorhanden, immunhistochemischen Marker. Diese Methode stellt ein nützliches Werkzeug (1), die Naturgeschichte dieser schlecht erforschten maligner Erkrankungen zu studieren und 2) so testen Sie die Auswirkungen von verschiedenen Drogen in einer Bemühung, mehr über ihre Wirkmechanismen zu erfahren.
Einleitung
Weichgewebe Sarkome (STS) umfassen ein Spektrum von heterogenen Läsionen des mesenchymaler Herkunft einen Anteil von 1 % aller soliden Tumoren1,2, und die neue Klassifikation der Weltgesundheitsorganisation (WHO) erkennt das Vorhandensein von mehr als 50 Subtypen3. Unter diesen sind die am häufigsten verwendeten Histotypes Adipocyte Sarkom oder Liposarcoma und Leiomyosarcoma, einem Anteil von 15 % und 11 % aller Erwachsenen m., jeweils4,5. Obwohl STS in verschiedenen Teilen des Körpers entwickeln können, sind die Extremitäten un....
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Protokoll
STS-Zellen sind isoliert von einem Tumor Masse chirurgisch herausgeschnitten von Patienten mit STS. Das Protokoll wurde von der lokalen Ethikkommission genehmigt und erfolgt nach den Leitlinien zur guten klinischen Praxis und der Deklaration von Helsinki. Alle Patienten gaben schriftliche Einwilligungserklärung, an der Studie teilzunehmen. Die chirurgische Exemplare sind durch einen erfahrenen Sarkom Pathologen analysiert und verarbeitet innerhalb 3 Stunden nach der Operation.
1. Tumor Probengewinnung und Verarbeitung:
- Sammeln Sie Tumor Proben mit Hilfe von einem Sarkom Pathologen in einem 100 mL sterilen Urin-Behälter mit 50 mL D....
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Ergebnisse
Wir haben eine einfache Methode, um zu erhalten die Errichtung einer Primärkultur von Weichteilsarkomen Patienten abgeleitet und Berichten hier ein Beispiel für Ergebnisse, die auf einem bestimmten STS Histotype13entwickelt. Das Protokoll wurde für die Errichtung von Primärkulturen von verschiedenen STS Histotypes einschließlich gut differenzierte Liposarcoma, entdifferenzierten myxoid Liposarcoma, pleomorphes Liposarcoma, Liposarcoma, Myxofibrosarcoma, undifferenz.......
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Diskussion
Gut definierte präklinische Modellen genügen, um den molekularen Hintergrund von Tumoren zu erhellen, schlechten Prognose Vorhersagen und neue therapeutische Strategien zu entwickeln, für Krebspatienten. Dies ist besonders wichtig für seltene Tumoren wie STS, deren hohe Heterogenität in Bezug auf die Morphologie, aggressives Potenzial und klinischen Verhalten fordert unser Verständnis von STS-Biologie und Patientenmanagement21. Darüber hinaus einige kommerzielle Sarkom-Zell-Linien zur Verfügung pr.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offenlegen.
Danksagungen
Die Autoren möchten Gráinne Tierney für redaktionelle Unterstützung bedanken.
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| DMEM High Glucose | EuroClone | ECB7501L | |
| Fötales Rinderserum | EuroClone | ECS0180D | |
| Glutamin | Gibco | 25030-024 | |
| Paraformaldehyd 4% wässrige Lösung, EM-Qualität | Elektronenmikroskopie Sciences | 157-4-100 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Triazol Reagenz | Ambion Life-Technologies | 15596018 | |
| Trypsin | EuroClone | ECB3052D |
Referenzen
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics. CA Cancer J Clin. 66 (1), 7-30 (2016).
- Linch, M., Miah, A. B., Thway, K., Judson, I. R., Benson, C. Systemic treatment of soft-tissue sarcoma gold standard and novel therapies. Nat Rev Clin Oncol. 11 (4), 187-202 (2014).
- Fletcher, C. D.
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Nachdrucke und Genehmigungen
