다 발성 골 수 Xenografts 노 그 쥐에서의 복합 발광 및 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 영상
Summary
여기 우리가 사용 발광, x 선, 그리고 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 이미징 공부 어떻게 억제 mTOR 활동 영향이 종이 식 모델에서 골 engrafted 발성 종양. 이로써 순수 관련, 비-침략 적, 및 복합 요법 골 engrafted 발성 종양에서 vivo에서대상의 안티 발성 효과의 분석.
Abstract
다중 골 수 종 (MM) 종양이 골 수 (BM)에 engraft 그리고 그들의 생존 및 진행이이 microenvironment 내 존재 하는 복잡 한 분자 및 세포 상호 작용에 따라 결정 됩니다. 그러나 BM microenvironment 쉽게 복제 생체 외에서잠재적으로 많은 생체 외에서 그리고 vivo 전 실험 모델의 생리 적인 관련성을 제한 될 수 없습니다. 이러한 문제는 luciferase (루크)의 종이 식 모델을 이용 하 여 극복 될 수 있다-transfected 8226 m M 세포 특히 마우스 뼈대에 engraft 것입니다. 이러한 마우스 적절 한 기판 주어진, D-소, 종양 성장 및 생존에 치료의 효과 종양 비보를 제작한 (BLI) 발광 이미지에 변화를 측정 하 여 분석할 수 있습니다. 이 씨 데이터 결합 2 대사 마커를 사용 하 여 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 (PET/CT) 분석-의하여-2-(18F) 불 화-D-포도 당 (18F FDG)은 시간이 지남에 종양 물질 대사에 변화를 모니터링 하는 데 사용 됩니다. 이러한 이미징 플랫폼 종양/BM microenvironment 내의 여러 비 침 투 적인 측정을 허용 한다.
Introduction
MM 악성 플라스마 B 세포는 BM을 침투 하 고 뼈 파괴, 빈 혈, 신장 손상, 그리고 감염을 일으킬의 구성 하는 불 치의 질환입니다. MM 모든 혈액 악성 종양1 의 10%-15%를 만들고 뼈대2를 포함 하는 가장 빈번한 암 이다. MM의 개발은 결국 BM3귀환 하기 전에 림프 조직의 어린 싹 센터에 설정 되는 긴 플라즈마 세포의 종양 전이에서 유래한 다. 매우 이질적인 틈새;는 BM 특징 이다 다양 하 고 중요 한 세포 구성 요소, 낮은 포2 (hypoxia), 광범위 한 vascularization, 복잡 한 세포 외 매트릭스, 그리고 모두의 m M tumorgenesis4기여할 cytokine과 성장 인자 네트워크의 영역을 포함 하 여. 따라서, 엄격 하 게는 BM에 engrafted 종양 특징 전파 MM이 종이 식 모델의 개발 m M 병리학 vivo에서5,6공부를 매우 강력 하 고 임상 관련 도구 것입니다. 그러나, 수많은 기술적 장애물 적용 하기 어렵고 비용이 많이 드는 그들을 만드는 대부분의 종이 식 모델의 효과 제한할 수 있습니다. 이 능력을 직접 관찰 하 고 필요 없이 종양 성장/생존의 변화를 측정에 일관 되 고 재현 가능한 종양 engraftment BM 틈새 시장 내에서 종양 개발, 연장된 시간 제한과 관련 된 문제를 포함 실험7,8과정 쥐를 희생.
이 프로토콜 사용 하 여 Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 처음 개발 된 수정된이 종이 식 모델 9, myeloma 세포는 정 맥 (IV) 도전 결과 “전파” 지속적으로 그리고 reproducibly BM의 NOD/SCID/IL-2γ(null) (노 그) 쥐10에 engraft 종양. 이 종양의 위치에 시각화 뤽 대립 유전자와 8226 인간의 MM 셀 라인의 안정 되어 있는 transfection에 의해 달성 하 고 이러한 engrafted 종양 세포6제작한 직렬로 씨에서 변화를 측정. 중요 한 것은,이 모델은 특히 노 그 쥐의 골격에 engraft 비슷한 성향을 가진 다양 한 다른 뤽 표현 인간의 MM 셀 라인 (예를 들어, U266 및 OPM2)를 활용 하 확장할 수 있습니다. 쥐의 발광 영상으로 종양의 식별 애완/코네티컷 함께 하 여 (예: 18F FDG) radiopharmaceutical 프로브의 이해를 측정 하 여 다음 수 있습니다 중요 한 추가 특성에 대 한 생화학 경로 (즉, 물질 대사, hypoxia, 변화 및 apoptosis 유도 변경) 종양/BM microenvironment 내. 이 모델의 주요 장점 다양 한 방사선, 발광 및 형광 프로브 및 m M 진행 및 병리학 비보를 공부 하는 데 사용할 수 있는 표시의 가용성에 의해 강조 될 수 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
M M6,9,11,,1213의 전 임상이 종이 식 모델의 다양 한에 불구 하 고 BM microenvironment 내 종양/BM 상호 작용을 공부 하는 능력 유지 곤란 14. 여기서 설명 8226 루크 노 그 쥐의 골격에 종양 세포의 신속 하 고 재현성 engraftment 허용.
이 프로토콜의 ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품 버지니아 장점 grant1I01BX001532에서 미국 학과의 재향 군인 담당 생물 의학 실험실 연구에 의해 지원 되었다과 개발 서비스 (BLRDS) P.F., 및 유럽 인정 버지니아 임상 과학 R & D 서비스 (에서 지원 수상 I01CX001388 장점)와 버지니아 재활 R & D 서비스 (공로 수상 I01RX002604). 조 앤 UCLA 교수 씨 그랜트에서 온 추가 지원 이러한 내용을 반드시 미국 재향 군인 담당 부서 또는 미국 정부의 의견을 대표 하지 않는다.
Materials
| 8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
| VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
| Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
| PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
| rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
| pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
| IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
| Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |
Referenzen
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