세포 부착 촉진에 있는 보체 단백질 C1q와 히알루론산 사이 상호 작용의 평가
Summary
보체 성분 C1q는 세포외 기질과 상호 작용할 수 있는 조직 미세환경에서 고도로 발현되는 염증성 분자이다. 여기서, 우리는 C1q가 히알루론산에 결합하여 세포 부착에 미치는 영향을 시험하는 방법을 설명한다.
Abstract
종양 미세 환경이 신생물 성장 및 전이에 적극적인 역할을 한다는 것이 점점 입증되고 있다. 다른 통로를 통해, 종양 세포는 자극 인자, 케모카인 및 사이토카인을 분비하여 기질, 면역 및 내피 세포를 효율적으로 모집 할 수 있습니다. 차례로, 이 세포는 높은 증식 및 전이성 능력을 유지하기 위하여 성장 촉진 신호, 대사 산물 및 세포외 매트릭스 분대를 풀어 놓음으로써 미세 환경의 신호 특성을 바꿀 수 있습니다. 이러한 맥락에서, 우리는 인간 악성 종양의 범위에 의해 국소적으로 고도로 발현되는 보체 성분 C1q가 세포외 기질 히알루론산과 상호 작용할 때 인간 종양으로부터 분리된 1차 세포의 거동에 강하게 영향을 미친다는 것을 확인합니다. 표본. 여기서, 우리는 C1q가 히알루론산(HA)에 결합하여 종양 세포 부착에 어떻게 영향을 미치는지 테스트하는 방법을 설명하며, 이는 세포외 기질의 주요 성분의 생물학적 특성(이 경우 HA)이 종양을 향한 생리활성 신호에 의해 형성될 수 있다는 사실을 뒷받침하는 것입니다. 진행.
Introduction
종양 미세 환경 (TME)은 세포 생존, 성장 및 침략에 대한 허용 틈새 시장을 제공 할 수 있기 때문에 암 발달 및 진행에 영향을 미칩니다. TME에 있는 새로운 중요한 선수의 확인은 표적 치료를 위한 새로운 분자 공구의 발견을 위해 유용할 지도 모릅니다. TME는 내피 세포, 섬유아세포 및 면역 계통의 세포와 같은 비악성 세포의 복잡하고 동적인 네트워크를 포함하며, 콜라겐, 라미닌, 섬유넥틴을 포함하는 주변 세포외 매트릭스(ECM) 성분에 내장되어 있으며, 프로테오글리칸과 히알루로난을 종양 및 비종양 세포는 사이토카인, 케모카인, 성장 인자 및 TME의 물리적, 화학적 및 신호 특성을 전체적으로 변경하는 염증 및 매트릭스 리모델링 효소와 함께 ECM 구성 요소를 합성하고 분비합니다. 이러한 성분 중, 히알루 론산 (HA) 종양 생물학에 중요 한 역할을 발휘 하기 위해 등장 했다. 그것의 간단한 화학 성분에도 불구하고, HA는, 그것의 HA 결합 분자 (hyaladherins)와 더불어, 크기 및 농도 의존적인 방식으로 혈관신생, 면역 계통 반응성 및 ECM 리모델링을 조절할 수 있다 1.
보체 (C) 시스템은 또한 최근 증가하고있는 로컬 TME의 일부입니다. C 시스템은 비 자기 세포, 원치 않는 숙주 요소 및 병원체에 대한 방어의 첫 번째 라인에 관여하는 수용성 및 막 결합 단백질의 세트를 포함합니다. 기능적으로, C는 선천적이고 적응적인 시스템의 2-이펙터 암을 연결하여 염증 반응의 직접적인 세포 살상 또는 장착을 촉진한다2. C 활성화는 암세포를 파괴하거나 그들의 성장을 억제해서 종양 성장을 억제할 수 있습니다, 그러나 만성 염증을 유지해서 종양 승진시키는 활동을 소유할 수 있다는 것을 점점 더 명확해지고 있습니다, 의 설치를 승진시키는 면역억제군, 혈관신생 유도, 암 관련 신호경로 활성화3. 이러한 맥락에서, C1q, C 시스템의 고전적인 경로의 제1 인식 분자는 C 활성화 4와 독립적으로종양 미세 환경에서 중요한 기능을 발휘하는 것으로 나타났다. C1q는 혈관신생 및 전이 외에 암세포 부착, 이동 및 증식을 선호할 수 있는 다양한 인간 악성 종양에 의해 국소적으로 발현되는 것으로 나타났다5. 흥미롭게도 C1q는 HA와 같은 ECM의 주요 구성 요소와 상호 작용합니다.
우리는 종양 질량에서 1 차적인 암세포를 격리하는 기술을 개발했습니다. 또한, 우리는 종양 미세 환경, 특히 C1q와 높은 분자량 히알루 론산 사이의 상호 작용을 자극 할 수있는 매트릭스를 만들었습니다. HA에 결합된 C1q는 종양 세포의 부착을 유도할 수 있었다.
Protocol
Representative Results
Discussion
우리는 히알루론산과 상호 작용하는 보체 성분 C1q가 어떻게 인간 종양 조직으로부터 분리된 1차 세포의 거동을 조절할 수 있는지 를 조사하는 쉬운 방법을 설명합니다. HA와 C1q는 모두 생리적 및 병리학적 조건 하에서 조직 미세 환경에 풍부하게 존재하며, 여러 세포 생물학적 과정에 참여한다. 예를 들어, C1q는 태반 8 동안 모계 데시두아의 엑스트라풀루스 트로포블라스트 침공을 선호하는 태반의…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 HA, 레오나르도 아마디오, 가브리엘라 지토 (IRCCS “Burlo Garofolo”, 트리에스테, 이탈리아의 부인과)와 안드레아 로마노 (해부학 및 병리학 조직학의 수술 임상 단위, 카티나라 병원, 트리에스테, 이탈리아의 제공에 대한 이반 도나티에게 감사드립니다. )을 조직 샘플 수집용으로 하였다. 우리는 비디오 준비와 알렉스 코폴라, 목소리의 도움 니콜로 모로시니도 감사합니다. 이 작품은 산모와 아동 건강 연구소에서 보조금에 의해 지원되었다, IRCCS “Burlo Garofolo”, 트리에스테, 이탈리아 (RC20/16) 및 폰다지오네 카사 디 리스파르미오 트리에스테 R.Bulla.
Materials
| 100 µm pore filter | BD Falcon | 352360 | |
| Amphotericin B solution (fungizone) | Sigma-Aldrich | 1397-89-3 | |
| basic FGF | Immunological Sciences | GRF-15595 | |
| Calcium Chloride | Sigma-Aldrich | C-4901 | |
| Collagenase type I | Worthington Biochemical Corporation, DBA | MX1D12644 | |
| D-Glucose | Sigma-Aldrich | 50-99-7 | |
| DNase I | Roche | 10 104 159 001 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 60-00-4 | |
| EGF | Immunological Sciences | GRF-10544 | |
| FAST DiI | Molecular probes, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific | D7756 | |
| Fetal bovine serum | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 10270-106 | |
| Fibronectin | Roche | 11051407001 | |
| Flask for cell culture | Corning | 430639 | Sterile, vented |
| Gentamicin solution | Sigma-Aldrich | G1397-10ML | |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBBS) | Sigma-Aldrich | H6648 | Supplemented with EDTA, Glucose, penicillin-streptamicin, gentamicin and fungizone |
| High molecular weight hyaluronic acid | Kind gift by Prof. Ivan Donati | ||
| Human endothelial serum free medium | Gibco, Thermo Fisher Scientific | 11111-044 | Supplemented with EGF (5 ng/mL), basic FGF (10 ng/mL), and 1% penicillin–streptomycin (Sigma-Aldrich) |
| Magnesium Chloride | Carlo Erba | 13446-18-9 | |
| Medium 199 with Hank’s salt | Sigma-Aldrich | M7653 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma-Aldrich | P0781 | |
| Time-lapse microscopy | Nikon | Imaging System BioStation IM-Q | |
| Titertek Multiskan ELISA Reader | Flow Labs | ||
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T4674 |
Referenzen
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