哺乳類細胞内の細胞内亜鉛プールを測定するための原子吸光度分光法
Summary
培養一次または確立された細胞株は、動物モデルを使用する前に初期のアプローチとして、基本的な生物学的および機械的な質問に対処するために一般的に使用される。このプロトコルは、亜鉛 (Zn) および原子吸光度分光法を有するその他の微量元素の研究のために全細胞抽出物を調製し、細胞内フラクションを準備する方法を説明する。
Abstract
遷移金属は、生物にとって不可欠な微量栄養素ですが、タンパク質中の生理的金属と競合し、酸化還元ストレスを発生させることにより、高濃度の細胞に対して毒性を及ぼします。金属の枯渇または蓄積につながる病的状態は、異なるヒト疾患の因果作用物質である。いくつかの例は、貧血、acrodermatitis enteropathica、ウィルソンとメンケスの病気が含まれています。したがって、これらの要素がどのように正常な生理的機能に寄与するかを探究する研究を容易にするためには、生体試料中の遷移金属のレベルと輸送を高感度かつ正確に測定できることが重要である。毒性。亜鉛 (Zn) は、例えば、多くの哺乳動物タンパク質における補因子であり、シグナル伝達事象に関与し、そして細胞における二次的なメッセンジャーである。過剰には、Zn は有毒であり、他の金属の吸収を阻害することができますが、赤字では、潜在的に致命的な条件の様々につながることができます。
グラファイト炉原子吸光分析 (GF-AAS) は、多様な生物学的試料中の Zn およびその他の遷移金属濃度を決定するための非常に高感度かつ有効の方法を提供します。電熱は、対象の要素の励起波長を使用して、その後の選択的吸収解析のために少量のサンプルを微粒化することにより、GF AAS を使用して微粒化を行います。ビール-ランバート法の線形性の範囲内では、金属による光の吸光度は、検体の濃度に正比例する。Zn 含有量を決定する他の方法と比較して、GF-AAS は、タンパク質および場合によっては小さなサンプル量で高感度の小さな細胞内分子で、遊離および複合体化 Zn の両方を検出します。さらに、GF-AAS は、誘導結合プラズマ質量分析 (ICP-MS) またはシンクロトロンベースの X 線蛍光よりも容易にアクセスできます。この方法では、GF-AAS での分析のための異なる培養細胞株の系統的サンプル調製物が記載されている。この微量元素の変動は、原則の証明として、細胞溶解物および増殖した細胞の細胞内フラクションの両方において比較された。
Introduction
そのような Zn、Cu、Mn、および Fe などの移行および重金属は、食品および汚染物質の両方の栄養素の環境で自然に見出されます。すべての生物は、これらの微量栄養素の異なる量を必要とします。しかし、高レベルへの暴露は、生物に有害である。金属の捕捉は主に食事を介して行いますが、金属はまた、皮膚1、2、3、4、5を介して吸入または吸収することができます。大気中の粒子の金属の存在が増加していることに注意することが重要であり、主に健康上のリスクに関連付けられています。人為的な活動のために、Ag などの重金属の増加レベル、Cd、Cr、Hg、Ni、Fe および Pb が大気粒子状物質、雨水、および土壌6,7で検出されています。これらの金属は、本質的な生理的微量元素、特に Zn と Fe と競合する可能性があり、生物学的プロセスのための基礎的な酵素を不活化することによって毒性作用を誘発する。
微量元素 Zn は、酸化還元中性であり、生物学的反応においてルイス酸として動作し、それが哺乳動物タンパク質8、9 の 10% 以上でのタンパク質のフォールディングおよび触媒活性に必要な基礎的な補因子となる。10;その結果、多様な生理機能8,11に必須である。しかし、多くの微量元素と同様に、これらの金属の間には繊細なバランスがあり、正常な生理的機能を促進し、毒性を引き起こします。哺乳動物において、Zn 欠乏症は、貧血、成長遅滞、性腺機能低下、皮膚異常、下痢、脱毛、味覚障害、慢性炎症、および免疫・神経機能障害を引き起こす11、12、 13、14、15、16、17、18。過剰には、Zn は細胞毒性であり、銅19、20、21などの他の必須金属の吸収を損なう。
さらに、Cu や Fe などの一部の金属は、有害な反応に関与する可能性があります。フェントン化学を介した活性酸素種 (ROS) の生成は、鉄硫黄クラスタータンパク質のアセンブリを妨害し、脂質代謝を変化させる22、23、24。この損傷を防ぐために、細胞は金属結合のシャペロンとトランスポーターを利用して毒性作用を防ぎます。特定のセルタイプが適切なレベルの金属を維持できるように、金属の恒常性を厳密に制御する必要があります。このため、生体試料中の微量金属を正確に測定するための技術を進歩させることが重要である。発達し成熟した生物においては、細胞レベルでの微量元素のための生物学的必要性の相違、異なる発達段階における、および正常および病的状態に存在する。したがって、組織と全身の金属レベルの正確な決定は、有機体金属の恒常性を理解する必要があります。
グラファイト炉原子吸光分析 (GF-AAS) は、少量のサンプル容量に使用される高感度な技術で、生物学および環境試料中に存在する遷移および重金属を測定するのに理想的です。25、26,27,さらに、技術の高感度のために、アフリカツメガエルを使用して Na+/K+-ATPase および胃 H+/K+-ATPase の微細な輸送特性を研究するために適切であることが示されている。モデルシステム29としての卵母細胞。GF AAS では、サンプル内の微粒化された要素は対象の金属を含む光源から放出される放射線の波長を吸収し、吸収された輻射は要素の濃度に比例します。元素電子励起は、各化学元素に固有の量子化されたプロセスで、紫外線または可視放射の吸収によって起こります。単一の電子プロセスにおいて、光子の吸収は、低エネルギーレベルから原子内のより高いレベルへ移動する電子を含み、GF AAS は、試料によって吸収される光子の量を決定し、これは放射線吸収の数に比例するグラファイトチューブで微粒化された元素。
この技術の選択性は、各要素が特定の吸収/発光スペクトル線を有する原子の電子構造に依存する。Zn の場合、吸光度波長は 213.9 nm であり、他の金属と正確に区別することができます。全体として、GF AAS は、検出の十分な限界 (LOD) と高い感度と選択性25で Zn を定量化するために使用することができます。吸収した波長の変化は統合され、特定の、孤立した波長のエネルギー吸収のピークとして示される。所与の試料における Zn の濃度は、通常、ビール−ランバート法に従って既知濃度の標準曲線から計算され、その中で、吸光度は試料中の Zn の濃度に正比例する。しかし、ビール・ランバート方程式を GF-AAS 分析に適用することは、いくつかの合併症も示します。たとえば、サンプルの微粒化および/または均質でない濃度の変動は、金属測定に影響を与える可能性があります。
GF AAS に必要な金属微粒化微量元素分析は、3つの基本的なステップで構成されています。最初のステップは、液体溶媒が蒸発している desolvation、です。乾燥した化合物は、炉が約100° c の温度に達した後に残します。次いで、これらの化合物を800から1400° c (分析対象元素に応じて) に加熱することによって気化させ、気体となる。最後に、気体状態の化合物は、1500から2500° c の範囲の温度で微粒化されます。上で議論したように、目的の金属の濃度を高めることは、GF AAS によって検出された吸収に比例した増加をレンダリングしますが、炉は分析のダイナミックレンジを減少させます, これは、することができる濃度の作業範囲である装置によって決定される。したがって、この技術は、ビール-ランバート法の直線性の LOD と限界 (笑) を決定することによって、低濃度および方法のダイナミックレンジを慎重に決定することを必要とする。LOD は、検出される物質に必要な最小量で、マトリックス中の Zn の3倍の標準偏差として定義されます。LOL は、ビール・ランバート法を使用して検出することができる最大濃度です。
本研究では、細胞全体の抽出物中の Zn 濃度、細胞質および核の画分、増殖および分化培養細胞における亜鉛レベルを分析する標準的な方法について述べる (図 1)。我々は、試料調製時の金属損失を防止するために、異なる細胞系に核プロトコルの迅速な単離を適応させた。使用された細胞モデルは、マウス衛星細胞、ネズミ神経芽細胞腫細胞 (N2A または Neuro2A)、ネズミ 3T3 L1 脂肪細胞、ヒト非腫瘍化乳房上皮細胞株 (MCF10A)、および上皮 Madin-ダービーイヌ腎臓 (MDCK) 細胞。これらの細胞は、異なる系統から確立され、インビトロでの金属レベルの系統特異的変動を調査するための良好なモデルである。
マウスの衛星細胞から派生した一次芽細胞は、骨格筋の分化を調査するのに適したインビトロモデルを構成しています。これらの細胞の増殖は、高血清条件下で培養すると高速である。筋肉系統への分化は、その後、低血清条件30によって誘発される。ネズミ神経芽細胞腫 (N2A) 確立された細胞株は、マウスニューラルクレストに由来した。これらの細胞は神経およびアメーバ様幹細胞の形態を示す。分化刺激の際、N2A 細胞は、neurofilaments などのニューロンのいくつかの特性を示す。N2A 細胞は、アルツハイマー病、神経突起伸長、および神経毒性31、32、33を調査するために使用されます。3T3 − L1 マウス前脂肪細胞を樹立した細胞株は、脂肪生成に関連する代謝および生理的変化を調査するために一般的に用いられる。これらの細胞は、線維芽細胞様の形態を提示するが、分化のために一度刺激したが、脂質合成およびトリグリセリド蓄積に関連する酵素活性化を提示する。これは、細胞質脂質液滴34、35を産生するための形態学的変化として観察することができる。MCF10A は、乳腺 fibrocystic 疾患36の閉経前女性に由来する非腫瘍乳腺上皮細胞株である。これは、増殖、細胞遊走、浸潤などの乳腺発癌に関連する生化学、分子、細胞学の研究に広く使用されてきました。Madin-ダービー犬の腎臓 (MDCK) 上皮細胞株は、広く上皮表現型の確立に関連する特性および分子イベントを調査するために使用されています。合流に達すると、これらの細胞は分極して、細胞細胞癒着を確立し、哺乳動物上皮組織37の特性を得る。
哺乳動物細胞における Zn 濃度を測定するための AAS 能力を試験するために、これら5つの細胞株の全体および細胞内フラクション (セルゾルおよび核) を分析しました。AAS の測定はこれらの細胞のタイプで Zn の異なった集中を示した。濃度は、1次筋芽細胞の増殖および分化において低かった (4 〜 7 nmol/タンパク質)、そして4つの確立された細胞株 (20 〜 40 nmol/mg のタンパク質の範囲) で高い。増殖細胞と比較した場合、Zn レベルの小さな非有意な増加が、原発性筋芽細胞および神経芽腫を分化することで検出された。この反対の効果は分化した脂肪細胞において検出された。しかし、3T3 − L1 細胞の増殖は、分化した細胞と比較してより高い濃度の金属を呈した。重要なことに、これらの3つの細胞株において、細胞内分画は、Zn がこれらのセルの代謝状態に応じて基質および核内で差動的に分布していることを示した。例えば増殖性筋芽細胞において、N2A セル、および3T3 − L1 前脂肪細胞は、大部分の金属が核に局在する。特定の細胞処置を使用して分化の誘導に際して、これらの3つの細胞型において質ゾルに局在する Zn。興味深いことに、両方の上皮細胞株は、増殖中に高いレベルの Zn を示したが、合流の際には、特徴的なタイト単層を形成した。増殖性の上皮細胞において、乳腺細胞株 MCF10A は、細胞質と核の間に等しい Zn 分布を有し、一方、腎臓由来セルラインでは、ほとんどの金属が核内に位置していた。これらの2つの細胞型では、細胞がコンフルエントに達したとき、Zn は主として質基質に位置していた。これらの結果は、GF AAS が低収量サンプルで元素分析を行うための非常に高感度で正確な技術であることを示しています。GF-AAS は、細胞内分別と相まって、異なる細胞株および組織の微量金属元素のレベルを調査するために適応することができます。
Protocol
Representative Results
Discussion
原子吸光度分光法は、小容量/質量の生物学的サンプルにおける Zn 定量の高感度な方法です。Zn の測定の記述された最適化はこの方法の適用を簡単にし、理想的な分析条件を保証する。ここでは、GF AAS を使用して、細胞全体の Zn の濃度、および細胞質と核画分を、異なるセルラインから決定しました。結果は、この技術は、蛍光プローブおよび ICP-MS によって得られるものに匹敵するレンダ?…
Offenlegungen
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、マサチューセッツ医科大学からトイレットペーパーへの教員ダイバーシティ・奨学生賞によってサポートされました.N.N.-T.9月-国家、グラント279879によってサポートされています。J. g. N は、国立科学財団グラント DBI 0959476 によってサポートされています.著者は、N2A 細胞株を提供し、彼女の技術サポートのためにダニエラ Cangussu に、ダリル・ A ・ボスコ博士に感謝しています。
Materials
| 3-isobutyl-1-methylxanthine | Sigma Aldrich | I5879 | |
| Acetic Acid | Sigma Aldrich | 1005706 | |
| Anti Brg1-antibody (G7) | Santa Cruz biotechnologies | sc-17796 | |
| Anti b-tubulin-antibody (BT7R) | Thermo Scientific | MA5-16308 | |
| Bradford | Biorad | 5000205 | |
| Dexamethasone | Sigma Aldrich | D4902 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media (DMEM) | ThermoFischer-Gibco | 11965092 | |
| Dulbecco's Modified Eagle's Media/Nutrient Mix (DMEM/F12) | ThermoFischer-Gibco | 11320033 | |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) | ThermoFischer-Gibco | 14190144 | |
| Epidemal Growth Factor (EGF) | Sigma Aldrich | E9644 | |
| Fetal Bovine Serum (FBS) | ThermoFischer-Gibco | 16000044 | |
| Fibroblastic Growth Factor-Basic (FGF) (AA 10-155) | ThermoFischer-Gibco | PHG0024 | |
| Horse serum | ThermoFischer-Gibco | 16050122 | |
| Hydrocortisone | Sigma Aldrich | H0888 | |
| Hydrogen Peroxide (H2O2) | Sigma Aldrich | 95321 | |
| Insulin | Sigma Aldrich | 91077C | |
| Insulin-Transferrin-Selenium-A | ThermoFischer | 51300044 | |
| Nitric Acid (HNO3) | Sigma Aldrich | 438073 | |
| Nonidet P-40 (NP-40) | Thermo Scientific | 85125 | |
| OptiMEM (Reduced Serum Media) | ThermoFischer-Gibco | 31985070 | |
| Penicillin-Streptomycin | ThermoFischer-Gibco | 15140148 | |
| PureCol (Collagen) | Advanced BioMatrix | 5005 | |
| Retionic Acid | Sigma Aldrich | PHR1187 | |
| Troglitazone | Sigma Aldrich | 648469-M | |
| Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red | ThermoFischer-Gibco | 25200056 | |
| Zinc (Zn) Pure Single-Element Standard, 1,000 µg/mL, 2% HNO3 | Perkin Elmer | N9300168 | |
| Established Cell Lines | |||
| 3T3-L1 | American Type Culture Collection | CL-173 | |
| MCDK | American Type Culture Collection | CCL-34 | |
| MCF10A | American Type Culture Collection | CRL-10317 | |
| N2A | American Type Culture Collection | CCL-131 | |
| Equipment | |||
| Atomic Absortion spectrophotometer | PerkinElmer | Aanalyst 800 | |
| Bioruptor | Diagnode | UCD-200 |
Referenzen
- Sharma, B., Singh, S., Siddiqi, N. J. Biomedical implications of heavy metals induced imbalances in redox systems. Biomed Research International. 640754, (2014).
- Jaishankar, M., Tseten, T., Anbalagan, N., Mathew, B. B., Beeregowda, K. N. Toxicity, mechanism and health effects of some heavy metals. Interdisciplinary Toxicology. 7 (2), 60-72 (2014).
- Jan, A. T., et al. Heavy Metals and Human Health: Mechanistic Insight into Toxicity and Counter Defense System of Antioxidants. International Journal of Molecular Science. 16 (12), 29592-29630 (2015).
- Manutsewee, N., Aeungmaitrepirom, W., Varanusupakul, P., Imyim, A. Determination of Cd, Cu, and Zn in fish and mussel by AAS after ultrasound-assisted acid leaching extraction. Food Chemistry. 101 (2), 817-824 (2007).
- Pereira, C. C., de Souza, A. O., Oreste, E. Q., Vieira, M. A., Ribeiro, A. S. Evaluation of the use of a reflux system for sample preparation of processed fruit juices and subsequent determination of Cr, Cu, K, Mg, Na, Pb, and Zn by atomic spectrometry techniques. Food Chemistry. 240, 959-964 (2018).
- McComb, J. Q., Rogers, C., Han, F. X., Tchounwou, P. B. Rapid screening of heavy metals and trace elements in environmental samples using portable X-ray fluorescence spectrometer, A comparative study. Water, Air, & Soil Pollution. 225 (12), (2014).
- Borgatta, J. P., Paskavitz, A., Kim, D., Navea, J. G. Comparative evaluation of iron leach from different sources of fly ash under atmospherically relevant conditions. Environmental Chemistry. 13, 902-912 (2016).
- Dufner-Beattie, J., Langmade, S. J., Wang, F., Eide, D., Andrews, G. K. Structure, function, and regulation of a subfamily of mouse zinc transporter genes. Journal of Biological Chemistry. 278 (50), 50142-50150 (2003).
- Sekler, I., Sensi, S. L., Hershfinkel, M., Silverman, W. F. Mechanism and regulation of cellular zinc transport. Molecular Medicine. 13 (7-8), 337-343 (2007).
- Berg, J. M., Shi, Y. The galvanization of biology: a growing appreciation for the roles of zinc. Science. 271 (5252), 1081-1085 (1996).
- Kambe, T., Tsuji, T., Hashimoto, A., Itsumura, N. The Physiological, Biochemical, and Molecular Roles of Zinc Transporters in Zinc Homeostasis and Metabolism. Physiology Reviews. 95 (3), 749-784 (2015).
- Fukada, T., Kambe, T. Molecular and genetic features of zinc transporters in physiology and pathogenesis. Metallomics. 3 (7), 662-674 (2011).
- Prasad, A. S., Halsted, J. A., Nadimi, M. Syndrome of iron deficiency anemia, hepatosplenomegaly, hypogonadism, dwarfism and geophagia. American Journal of Medicine. 31, 532-546 (1961).
- Jinno, N., Nagata, M., Takahashi, T. Marginal zinc deficiency negatively affects recovery from muscle injury in mice. Biological Trace Element Research. 158 (1), 65-72 (2014).
- Gaither, L. A., Eide, D. J. Eukaryotic zinc transporters and their regulation. Biometals. 14 (3-4), 251-270 (2001).
- Fukada, T., Yamasaki, S., Nishida, K., Murakami, M., Hirano, T. Zinc homeostasis and signaling in health and diseases: Zinc signaling. Journal of Biological Inorganic Chemistry. 16 (7), 1123-1134 (2011).
- Kambe, T., Hashimoto, A., Fujimoto, S. Current understanding of ZIP and ZnT zinc transporters in human health and diseases. Cellular and Molecular Life Sciences. 71 (17), 3281-3295 (2014).
- Plum, L. M., Rink, L., Haase, H. The essential toxin: impact of zinc on human health. International Journal of Environmental Research and Public Health. 7 (4), 1342-1365 (2010).
- Broun, E. R., Greist, A., Tricot, G., Hoffman, R. Excessive zinc ingestion. A reversible cause of sideroblastic anemia and bone marrow depression. Journal of the American Medical Association. 264 (11), 1441-1443 (1990).
- Fischer, P. W., Giroux, A., L’Abbe, M. R. The effect of dietary zinc on intestinal copper absorption. American Journal of Clinical Nutrition. 34 (9), 1670-1675 (1981).
- Ogiso, T., Ogawa, N., Miura, T. Inhibitory effect of high dietary zinc on copper absorption in rats. II. Binding of copper and zinc to cytosol proteins. in the intestinal mucosa. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo. 27 (2), 515-521 (1979).
- Gaetke, L. M., Chow, C. K. Copper toxicity, oxidative stress, and antioxidant nutrients. Toxicology. 189 (1-2), 147-163 (2003).
- Macomber, L., Imlay, J. A. The iron-sulfur clusters of dehydratases are primary intracellular targets of copper toxicity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (20), 8344-8349 (2009).
- Robotham, J. L., Lietman, P. S. Acute iron poisoning. A review. American Journal of Diseases of Children. 134 (9), 875-879 (1980).
- Yang, W., Ni, Z., Guang, P., Xue, Y., Guang, P., Fen, X. . Recent advances in absolute analysis by graphite furnace atomic absorption spectrometry. 17 (2), 104-110 (1997).
- Gomez-Nieto, B., Gismera, M. J., Sevilla, M. T., Satrustegui, J., Procopio, J. R. Micro-sampling method based on high-resolution continuum source graphite furnace atomic absorption spectrometry for calcium determination in blood and mitochondrial suspensions. Talanta. 170, 15-21 (2017).
- Shaw, J. C., Bury, A. J., Barber, A., Mann, L., Taylor, A. A micromethod for the analysis of zinc in plasma or serum by atomic absorption spectrophotometry using graphite furnace. Clin Chim Acta. 118 (2-3), 229-239 (1982).
- Stevens, B. J., Hare, D. J., Volitakis, I., Cherny, R. A., Roberts, B. R. Direct determination of zinc in plasma by graphite furnace atomic absorption spectrometry using palladium/magnesium and EDTA matrix modification with high temperature pyrolysis. Journal of Analytical Atomic Spectrometry. 32 (4), 843-847 (2017).
- Durr, K. L., Tavraz, N. N., Spiller, S., Friedrich, T. Measuring cation transport by Na,K- and H,K-ATPase in Xenopus oocytes by atomic absorption spectrophotometry: an alternative to radioisotope assays. Journal of Visualized Experiments. (72), e50201 (2013).
- Conejo, R., Valverde, A. M., Benito, M., Lorenzo, M. Insulin produces myogenesis in C2C12 myoblasts by induction of NF-kappaB and downregulation of AP-1 activities. Journal of Cellular Physiology. 186 (1), 82-94 (2001).
- Salto, R., et al. beta-Hydroxy-beta-Methylbutyrate (HMB) Promotes Neurite Outgrowth in Neuro2a Cells. PLoS One. 10 (8), e0135614 (2015).
- LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies. Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).
- Provost, P. Interpretation and applicability of microRNA data to the context of Alzheimer’s and age-related diseases. Aging (Albany NY). 2 (3), 166-169 (2010).
- Green, H., Kehinde, O. An established preadipose cell line and its differentiation in culture. II. Factors affecting the adipose conversion. Cell. 5 (1), 19-27 (1975).
- Padilla-Benavides, T., Velez-delValle, C., Marsch-Moreno, M., Castro-Munozledo, F., Kuri-Harcuch, W. Lipogenic Enzymes Complexes and Cytoplasmic Lipid Droplet Formation During Adipogenesis. Journal of Cellular Biochemistry. 117 (10), 2315-2326 (2016).
- Soule, H. D., et al. Isolation and characterization of a spontaneously immortalized human breast epithelial cell line, MCF-10. Krebsforschung. 50 (18), 6075-6086 (1990).
- Leighton, J., Estes, L. W., Mansukhani, S., Brada, Z. A cell line derived from normal dog kidney (MDCK) exhibiting qualities of papillary adenocarcinoma and of renal tubular epithelium. Cancer. 26 (5), 1022-1028 (1970).
- Cote, R. J. Aseptic technique for cell culture. Current Protocols in Cell Biology. , (2001).
- Suzuki, K., Bose, P., Leong-Quong, R. Y., Fujita, D. J., Riabowol, K. R. E. A. P. A two minute cell fractionation method. BMC Research Notes. 3, 294 (2010).
- Nabbi, A., Riabowol, K. Rapid Isolation of Nuclei from Cells In Vitro. Cold Spring Harbor Protocols. 2015 (8), 769-772 (2015).
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analytical Biochemistry. 72, 248-254 (1976).
- Carpenter, M. C., Lo, M. N., Palmer, A. E. Techniques for measuring cellular zinc. Archive of Biochemistry and Biophysics. 611, 20-29 (2016).
- Paskavitz, A. L., et al. Differential expression of zinc transporters accompanies the differentiation of C2C12 myoblasts. Journal of Trace Elements in Medical Biology. 49, 27-34 (2018).
- Chandler, P., et al. Subtype-specific accumulation of intracellular zinc pools is associated with the malignant phenotype in breast cancer. Molecular Cancer. 15 (2), (2016).
- Gordon, S. J. V., Fenker, D. E., Vest, K. E., Padilla-Benavides, T. Manganese influx and expression of ZIP8 is essential in primary myoblasts and contributes to activation of SOD2. bioRxiv. , 494542 (2018).
- Jansen, S., Arning, J., Beyersmann, D. Zinc homeostasis in C6 glioma cells: phospholipase C activity regulates cellular zinc export. Biological Trace Element Research. 108 (1-3), 87-104 (2005).
- Fahrni, C. J. Biological applications of X-ray fluorescence microscopy: exploring the subcellular topography and speciation of transition metals. Current Opinion in Chemical Biology. 11 (2), 121-127 (2007).
- Huang, Z., Lippard, S. J. Illuminating mobile zinc with fluorescence from cuvettes to live cells and tissues. Methods in Enzymology. 505, 445-468 (2012).
- Qiao, W., Mooney, M., Bird, A. J., Winge, D. R., Eide, D. J. Zinc binding to a regulatory zinc-sensing domain monitored in vivo by using FRET. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (23), 8674-8679 (2006).
- Tomat, E., Lippard, S. J. Imaging mobile zinc in biology. Current Opinion in Chemical Biology. 14 (2), 225-230 (2010).
- Jajda, H. M., et al. Comparative efficacy of two standard methods for determination of iron and zinc in fruits, pulses and cereals. Journal of Food Science and Technology. 52 (2), 1096-1102 (2015).
- Padilla-Benavides, T., Long, J. E., Raimunda, D., Sassetti, C. M., Argüello, J. M. A novel P1B-type Mn2+-transporting ATPase is required for secreted protein metallation in mycobacteria. Journal of Biological Chemistry. 288 (16), 11334-11347 (2013).
