Dieses Papier enthält eine detaillierte Beschreibung, wie man ein Tiermodell der anhepatischen Phase (Leberischämie) bei Ratten baut, um die Grundlagenforschung zur Ischämie-Reperfusionsverletzung nach einer Lebertransplantation zu erleichtern.
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Methodenartikel
OrganIschemia-Reperfusion Verletzung durch Simulation hämodynamischer Veränderungen im Lebertransplantationsmodell der Ratte
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Orthotopische Lebertransplantation (OLT) bei Ratten ist ein bewährtes Tiermodell, das für präoperative, intraoperative und postoperative Studien verwendet wird, einschließlich Ischämie-Reperfusionsverletzungen (IRI) von extrahepatischen Organen. Dieses Modell erfordert zahlreiche Experimente und Geräte. Die Dauer der anhepatischen Phase hängt eng mit der Zeit zusammen, iri nach der Transplantation zu entwickeln. In diesem Experiment verwendeten wir hämodynamische Veränderungen, um extrahepatische Organschäden bei Ratten zu induzieren und die maximale Toleranzzeit zu bestimmen. Die Zeit bis zur schwersten Organverletzung variierte für verschiedene Organe. Diese Methode kann leicht repliziert werden und kann auch verwendet werden, um IRI der extrahepatischen Organe nach lebertransplantation zu studieren.
Einleitung
Ischämie-Reperfusionsverletzung (IRI) ist eine häufige Komplikation nach Lebertransplantation. Hepatische IRI ist ein pathologischer Prozess mit Ischämie-vermittelten Zellschäden und abnormale Verschlechterung der Leberreperfusion. Leber-IRI und die lokale angeborene Immunantwort können in heiße und kalte IRI unterteilt werden, je nach Unterschieden in der klinischen Umgebung1. Hot IRI wird durch Stammzellverletzungen induziert, in der Regel als Folge von Lebertransplantation, Schock und Trauma2. Cold IRI ist eine Komplikation der Lebertransplantation, die durch Endothelzellen und periphere Zirkulation verursacht wird
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Protokoll
Die Tierethikkommission genehmigte das Experiment der Guangxi Medical University (No20190920). Alle Tiere wurden vom Animal Experiment Center der Guangxi Medical University versorgt. Wir verwendeten SPF Männchen Sprague Dawley Ratten (200-250 g, 10-12 Wochen), gehalten unter der Raumtemperatur von 25 ± 2°C und Feuchtigkeit von 50 ± 10%. Die Fütterung wurde 24 Stunden vor dem Betrieb gestoppt; wasserversorgt war.
HINWEIS: Ein Bediener kann alle Operationen ohne Mikrochirurgie oder chirurgisches Mikroskop durchführen.
1. Betrieb
- Nach dem Wiegen die Ratten mit Isofluran ansien (5%) mit einer Tieranästhesie....
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Ergebnisse
Rattentoleranz gegenüber Leber-Ischämie
In diesem Tiermodell sind die Stellen, an denen Blutgefäße während des Betriebs ligiert wurden, in Abbildung 1dargestellt. Die Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in 5 Gruppen für Ischämie für 15 Minuten (I15-Gruppe), 30 Minuten (I30-Gruppe), 45 Minuten (I45-Gruppe), 60 Minuten (I60) und Scheingruppe mit 10 Ratten in jeder Gruppe eingeteilt. Die Überlebensrate jeder Gruppe wurde 14 Tage nach der Operation beobachtet. Alle Ratten ü.......
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Diskussion
OLT bei Ratten ist ein ideales Modell für die Untersuchung der Organkonservierung bei Lebertransplantation, IRI, Transplantationsabstoßung, Immuntoleranz, Transplantationspathologie und Pharmakologie, Homotransplantation und Xenotransplantation. Derzeit ist es weit verbreitet in der experimentellen Forschung der Lebertransplantation verwendet.
Während Pilotstudien verabreichten wir zunächst pentobarbitales Natriumintraperitonealanästhesie und fanden heraus, dass dies zu einer hohen postoperati.......
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Offenlegungen
Die Autoren dieses Manuskripts haben keine Interessenkonflikte offenzulegen.
Danksagungen
Wir möchten die nützlichen Vorschläge von Dr. Wen-tao Li und Dr. Ji-hua Wu vom Second Affiliated Hospital der Guangxi Medical University würdigen. Die Autoren danken unseren Teamkollegen für nützliche Kommentare und Diskussionen. Die Autoren bedanken sich auch bei den anonymen Rezensenten und Redakteuren von JoVE für ihre Kommentare. Ein besonderer Dank gilt den Eltern von Dr. Yuan für ihre kontinuierliche Unterstützung und Ermutigung. Die Arbeit wurde von der Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248) unterstützt.
....Zugriff eingeschränkt. Bitte melden Sie sich an oder starten Sie eine Testversion, um diesen Inhalt anzuzeigen.
Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| 4%ige Paraformaldehyd-Lösung | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd | P804536 | |
| Lufttrockenschrank | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanin-Aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| Ammoniak | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 10002118 | |
| Amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| wasserfreies Ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co., Ltd | 100092183 | |
| Tier Anästhesiegerät | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| Aspartat-Aminotransferase (AST) Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatischer biochemischer Analysator. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosysteme (bei Bedarf) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Zentrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| Deckglas | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| Kreatinin Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| Entwässerungsmaschine | Ungarn 3DHISTECH Co., Ltd | Donatello Serie 2 | |
| Einbettmaschine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| Tiefkühlmaschine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| Hämatoxylin-Eosin-Farbstofflösung | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| hocheffizientes Paraffinwachs | Shanghai huayong Paraffinwachs Co., Ltd | Q / YSQN40-91 | |
| Salzsäure | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| Intraokularlinsenzange (IOL) | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isofluran | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co., Ltd | — | |
| Mikroschere (falls erforderlich) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| Nadelhalter | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutrales Kaugummi | Shanghai Huashen Healing Equipment Co., Ltd. | – | |
| normales optisches Mikroskop | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmische Pinzette | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | gerade |
| ophthalmische Pinzette | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | Biegung |
| ophthalmische Schere | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathologischer Slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| Pipetten | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | ||
| Retraktoren | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| Scanner | Ungarn 3DHISTECH Co., Ltd | Pannoramic 250 | |
| Objektträger | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| Xylol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
Referenzen
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q.
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Nachdrucke und Genehmigungen
