본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.
다발성 경화증 (MS)은 염증성 침윤, 탈수초화 및 축삭 손상을 특징으로 하는 중추신경계(CNS)의 전형적인 자가면역 질환이다. 현재 MS를 완전히 치료할 수있는 조치는 없지만 질병 진행을 제어하고 완화하기 위해 여러 질병 수정 요법 (DMT)을 사용할 수 있습니다. 실험적 자가면역 뇌척수염 (EAE)과 MS 환자의 CNS 병리학적 특징 사이에는 상당한 유사성이 있다. EAE는 MS 약물의 효능을 결정하고 MS 질환에 대한 새로운 치료법 개발을 모색하는 대표적인 모델로 널리 사용되었습니다. 마우스에서 EAE의 활성 유도는 안정하고 재현 가능한 효과를 가지며,자가 면역 신경 염증에 대한 약물 또는 유전자의 효과를 연구하는데 특히 적합하다. C57BL/6J 마우스를 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG35-55)로 면역화하는 방법과 임상 점수 시스템을 사용하여 질병 증상의 일일 평가가 주로 공유됩니다. 다양한 임상 증상을 가진 MS의 복잡한 병인을 감안할 때 기존 임상 점수 시스템은 질병 치료 평가를 만족시킬 수 없습니다. 단일 개입의 단점을 피하기 위해 MS 환자에서 불안과 유사한 기분 및 골다공증의 임상 증상을 기반으로 EAE를 평가하는 새로운 지표를 만들어 MS 치료에 대한보다 포괄적 인 평가를 제공합니다.
자가면역질환은 자체 항원에 대한 면역계의 면역 반응으로 인해 조직 손상 또는 기능 장애를 초래하는 다양한 장애입니다1. 다발성 경화증 (MS)은 염증성 침윤, 탈수 초화 및 신경 축삭 변성 2,3을 특징으로하는 중추 신경계 (CNS)의 다발성 신경 병증의 만성자가 면역 질환입니다. 현재 MS는 전 세계적으로 250 만 명의 사람들에게 영향을 미쳤으며, 대부분 가족과 사회의 중추 인 20-40 세의 젊은 및 중년의 사람들입니다. 이것은 가족과 사회에 상당한 영향과 해를 끼쳤습니다 2,4.
MS는 다양하고 복잡한 임상 증상을 가진 다 인성 질환입니다. 염증성 침윤 및 탈수초화를 특징으로 하는 고전적인 신경 장애 외에도 MS는 종종 시각 장애, 사지 운동 이상증, 인지 및 정서 장애 5,6,7을 보여줍니다. MS 환자가 적절하고 올바른 치료를받지 못하면 절반은 20 년 후에 휠체어에서 살게되고 거의 절반이 우울 및 불안 증상을 경험하여 일반 인구보다 훨씬 높은 수준의 자살 충동을 느끼게됩니다 8,9.
오랜 연구 기간에도 불구하고 MS의 병인은 여전히 파악하기 어렵고 MS의 발병 기전은 아직 밝혀지지 않았습니다. MS의 동물 모델은 설치류와 인간 면역계의 중요한 차이에도 불구하고 질병 개발 및 새로운 치료법을 탐구하는 동시에 몇 가지 기본 원칙을 공유하는 테스트 도구 역할을 허용했습니다. 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 현재 MS 연구를 위한 이상적인 동물 모델로, 미엘린 단백질의 자가항원 면역을 사용하여 감수성 마우스에서 CNS 성분에 대한 자가면역을 유도하고 체액성 면역 반응을 향상시키기 위해 완전한 프로인트 보조제(CFA) 및 백일해 독소(PTX)를 추가합니다. 유전적 배경 및 면역 항원에 따라, MS10,11,12의 다양한 임상 형태를 모방하기 위해 급성, 재발-완화 또는 만성을 포함한 다양한 질병 과정이 얻어진다. EAE 모델의 구축에 일반적으로 사용되는 관련 면역원은 자가 CNS 단백질, 예컨대 미엘린 염기성 단백질 (MBP), 프로테오리피드 단백질 (PLP), 또는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 (MOG)으로부터 유래한다. MBP- 또는 PLP-면역화된 SJL/L 마우스는 재발-완화 과정을 개발하고, MOG는 C57BL/6 마우스11,12,13에서 만성 진행성 EAE를 유발한다.
질병 수정 요법 (DMT)의 주요 목적은 질병 증상을 최소화하고 기능을 개선하는 것입니다6. MS를 완화하기 위해 여러 약물이 임상적으로 사용되지만 아직 완전히 치료하는 데 사용되는 약물은 없으므로 시너지 치료의 필요성이 드러납니다. C57BL/6 마우스는 현재 트랜스제닉 마우스를 구축하는데 가장 통상적으로 사용되며, 이 작업에서, 5점 척도를 갖는 C57BL/6J 마우스에서 MOG35-55 에 의해 유도된 EAE 모델을 사용하여 질환 진행을 모니터링하였다. EAE 모델은 또한 불안-유사 기분 및 골 손실, 및 널리 공지된 탈수초성 병변을 앓고 있다. 여기서, 개방 필드 테스트 및 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 (Micro-CT) 분석을 사용하여 여러 관점에서 EAE의 증상을 평가하는 방법이 또한 설명된다.
MS는 CNS의 탈수초성 염증성 질환이며 젊은 사람들에게 만성 장애를 유발하는 가장 흔한 신경 질환 중 하나이며가족과 사회에 큰 부담을 줍니다3,4. MS는 항상 기관-특이적 T 세포-매개 자가면역 질환으로 분류되어, 자가면역계가 CNS를 천천히 침식하도록 유도하며, 이는 몸 전체에 걸쳐 다수의 시스템을 수반할 것이다27. 전형적인 임상 증…
The authors have nothing to disclose.
저자는 중국 국립 자연 과학 재단 (32070768, 31871404, 31900658, 32270754)과 국가 약물 연구 핵심 연구소의 지원을 인정합니다.
1 mL syringe(with 26 G needle) | Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd | 60017031 | |
2 mL microcentrifuge tube | HAIKELASI | KY-LXG2A | |
22 G needle | Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd | 60017208 | |
Complete Freund’s Adjuvant | Sigma | F5881 | Stored at 4 °C, 1 mg of heat-inactivated MTB (H37Ra) per mL |
Conditioned place preference system | Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd | Animal behavior | |
Ethanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10009218 | Stored at RT |
Locomotion activity (open field) video analysis system | Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd | DigBehv-002 | Animal behavior |
MOG35-55 peptide | Gill Biochemical Co., Ltd | GLS-Y-M-03590 | Stored at -20 °C |
Mycobacterium tuberculosis H37Ra | BD | 231141 | Stored at 4 °C |
Open field reaction chamber | Shanghai Jiliang Software Technology Co., Ltd | Animal behavior | |
Pertussis toxin | Calbiochem | 516560 | Stored at 4 °C |
Phosphate Buffered Saline | Made in our laboratory | ||
Scissor | Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd | J21010 | |
Sealing film | Heathrow Scientific | HS 234526B | |
Sorvall Legend Micro 21R Microcentrifuge | Thermo Scientific | 75002447 | |
Steel ball | QIAGEN | 69975 | |
TissueLyser II | QIAGEN | 85300 | |
Tweezer | Shanghai Medical Instrument (group) Co., Ltd | JD1060 | |
μCT 35 desktop microCT scanner | Scanco Medical AG, Bassersdorf, Switzerland |