Test de préférence clair-foncé : une méthode pour étudier le comportement lié à l’anxiété chez zebrafish

- Tout d’abord, créer un enclos à trois côtés autour de la zone d’essai afin de minimiser les stimuli externes qui peuvent affecter le comportement des poissons. Mettre en place un éclairage aérien diffus pour éviter les reflets de surface de l’eau. Ensuite, remplissez l’aréna, qui est divisé en zones sombres et lumineuses, avec de l’eau d’habitat maintenue à 28 degrés Celsius.

Placez l’aréna dans l’enclos. Gardez le réservoir d’habitat - contenant des poissons à tester - à l’extérieur de l’enclos. Laissez les poissons s’acclimater pour réduire leur stress.

Maintenant, filetez doucement un poisson du réservoir de l’habitat et placez-le dans le réservoir d’essai. Placez le poisson perpendiculairement aux côtés longs de l’arène pour éviter les biais vers l’une ou l’autre zone. Observez le comportement des poissons à l’aide d’un logiciel d’enregistrement et répétez le test pour le reste du poisson. Mesurer le temps moyen passé par chaque poisson dans les zones sombres et lumineuses.

Le poisson zèbre a tendance à passer plus de temps dans la zone sombre lorsqu’il est anxieux. Dans le protocole de l’exemple, nous effectuerons un test clair-foncé pour observer l’effet de l’exposition à l’éthanol sur le comportement du poisson zèbre.

- Obtenez une arène sombre de 9 et 1/2 centimètres de large par 55 centimètres de long et 9 et 1/2 centimètres de profondeur avec un plancher imperméable blanc. Apposer du papier blanc et noir imperméable à l’eau et non réfléchissant sur les murs intérieurs de l’aréna à l’aide de Velcro, la moitié de l’aréna recouverte de blanc et la moitié recouverte de noir. Remplissez l’aréna à une profondeur de 5 centimètres avec de l’eau d’habitat à une température de 25 à 28 degrés Celsius. Maintenez cette température tout au long des essais.

Réduire au minimum les stimuli visuels externes en construisant une enceinte blanche à trois côtés pour que l’aréna soit placé. Assurez-vous que la zone d’essai dispose d’un éclairage aérien diffus qui ne provoque pas de réflexions à la surface de l’eau, mais qui est suffisamment lumineux pour le logiciel de suivi des mouvements ou la quantification manuelle post-hoc à partir d’images vidéo. Puis définissez les paramètres d’enregistrement et d’analyse des mouvements du logiciel de suivi du comportement d’une durée d’essai de 5 à 15 minutes, selon la question de recherche.

Transportez le groupe de poissons à tester dans la zone de recherche dans le réservoir d’habitat et placez-les à l’extérieur de l’enclos de l’aréna. Laissez le poisson s’acclimater pendant 10 minutes. Filetez doucement un poisson du groupe approprié et placez-le au centre de l’arène sombre et lumineuse, libérant chaque poisson lorsqu’il est placé parallèlement au long axe de l’aréna pour éviter de biaiser le poisson vers la zone sombre ou lumineuse.

Commencez à enregistrer le comportement immédiatement après la libération de l’animal. Surveillez tout problème logiciel de suivi du poisson ou de saut ou de congélation des poissons. Après la fin de l’essai, filetez doucement et retirez le poisson de l’aréna vers un réservoir de détention ou un réservoir d’habitat. Faites pivoter l’aréna à 180 degrés après que la moitié des sujets ont été testés afin d’éviter toute confusion due à des biais résultant de l’extrémité de l’aréna orientée vers l’extrémité ouverte de l’enclos.

Commencez l’analyse en examinant le temps passé dans la lumière par rapport aux zones sombres. Pour chaque groupe et pour chaque poisson, obtenez le temps relatif passé dans les zones claires et sombres et analysez à l’aide d’un échantillon t-test pour déterminer si les groupes préfèrent significativement une zone à l’autre. Comparer les préférences, calculer un indice de préférence en soustrayant le temps passé dans la zone lumineuse du temps passé dans la zone sombre et comparer les différences entre les groupes à l’aide de tests t. Comparez plusieurs groupes avec une analyse à sens unique de la variance, en utilisant le test post-hoc de différence significative honnête de Tukey au besoin.