Indução neural é o primeiro passo na formação do cérebro. É um mecanismo pelo qual o nó de Hensen (organizador), instrui tecido adjacente a adotar um destino neural, ou seja, dar origem ao sistema nervoso. Este vídeo demonstra um ensaio para a indução neural no embrião de galinha.
O embrião de galinha é uma ferramenta valiosa no estudo do desenvolvimento embrionário precoce. Sua transparência, acessibilidade e facilidade de manipulação, torná-lo uma ferramenta ideal para estudar a formação inicial e padronização do sistema nervoso. Este vídeo demonstra como organizador do enxerto de tecido em um host, um método pelo qual nó s Hensen (o organizador do embrião de galinha) é enxertado em um ectoderma competente de acolhimento. O enxerto organizador instrui sobrejacente nd ve tecido de adotar um destino através de sinais neurais indução neural. Esse mecanismo é conhecido como indução neural, e constitui o passo inicial na formação do cérebro e da medula espinhal em amniotas. Este método é essencialmente utilizado para a caracterização de moléculas indução neural putativo no pinto. Este vídeo demonstra as diferentes etapas no ensaio para a indução neural; Primeiro, o embrião é Donnor explantado e colocou em um prato. Então, o embrião hospedeiro está preparado para a nova cultura. O enxerto é retirado e transplantado para o host margem área pelúcida. O host é cultivado para 18-22 hrs. A montagem é fixa e processados para outras aplicações (por exemplo, hibridização in situ). Este método foi originalmente concebido por Waddington<sup> 1,2</sup> E Gallera<sup> 3,4</sup>.
Este vídeo demonstra as diferentes etapas na realização de um ensaio para a indução neural; Este ensaio é essencialmente usado para a caracterização da suposta indução neural em moléculas de bico, e, portanto, pode ser usado para uma ampla variedade de aplicações, que vão desde micromanipulations embriológico 1-4; 6 a desvendar novas cascatas de sinalização 7,8, todas visando a compreensão da etapa inicial na formação do cérebro e restante do sistema nervoso.
DP é destinatário de Ruth Award Kirschstein DA021977 1F32-01A1 do Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas. Este trabalho foi financiado pela M. Margaret Alkek Fundação RHF.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Eggs | Animal | Charles River Laboratories | Premium Fertile | Fertilized, HH3+ (14 hr) |
Stereomicroscope | Microscope | Leica Microsystems | MZ9.5 or similar | |
Hybridization Incubator | Equipment | Robbins Scientific | M1000 | Use with inverted Pyrex dish and 500 ml ddH2O beaker |
Marsh Automatic Incubator | Equipment | Lyon | RX | |
Pyrex dish | ||||
Watchmaker’s glass 50mm | Tool | VWR | 66112-060 | |
Glass rings | Tool | Physical Plant facility | cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish. | |
Curved Forceps (1) | Tool | Electron Microscopy Sciences | 72991-4C | |
Forceps (2) | Tool | Fine Science Tools | 11002-13 | blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil |
Fine scissors | Tool | Fine Science Tools | 14161-10 | |
Plastic dishes | Tool | Falcon | 353001 | |
Rubber Bulb | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70980 | |
DiI | Reagent | Invitrogen | D-282 | |
Aspirator tube assembly | Tool | Sigma | A5177-5EA | |
Microelectrode puller | Equipment | Sutter Instruments | Sutter Instruments P-97 Flaming/Brown Micropipette | |
Pasteur Capillary Pipette | Tool | Electron Microscopy Sciences | 70950-12 | round edge under flame |
Culture chamber | Tool | Pioneer Plastics | 030C | |
Microcapillary tube | Tool | Sigma | P1049-1PAK | |
Microdissecting knife | Tool | Fine Science Tools | 10056-12 | Use to puncture cavities prior to in situ hybridization |
Minuten pins 0.2mm diam | Tool | Fine Science Tools | 26002-20 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C |
Diethylpyrocarbonate (depc) | Reagent | Electron Microscopy Sciences | 15710 | |
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base | Dow Corning | 0001986475 | Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C | |
Diethylpyrocarbonate (depc) | Acros Organics | 10025025 | Add 1ml depc to 1l PBS; shake; autoclave | |
16% PFA | Electron Microscopy Sciences | 15710 |