Lens transplantatie in de zebravis en de toepassing ervan in de Analyse van Eye Mutanten
Summary
Lens ontwikkeling houdt interacties met andere weefsels. Verschillende zebravis oog mutanten worden gekenmerkt door een abnormaal kleine lens formaat. Hier laten we zien een lens transplantatie experiment om te bepalen of dit fenotype is te wijten aan intrinsieke oorzaken of defecte interacties met weefsels die de lens omringen.
Abstract
De lens speelt een belangrijke rol in de ontwikkeling van de optische beker [1,2]. Met behulp van de zebravis als model organisme is, kan vragen met betrekking tot de ontwikkeling van objectieven worden aangepakt. De zebravis is handig voor genetische studies te wijten aan verschillende voordelige eigenschappen, met inbegrip van kleine formaat, de hoge vruchtbaarheid, korte levenscyclus, en het gemak van de zorg. Lens ontwikkeling treedt snel in zebravis. Met 72 HPF, de zebravis lens is functioneel volwassen [3]. Overvloedige genetische en moleculaire middelen beschikbaar zijn voor onderzoek in de zebravis te ondersteunen. Daarnaast is de gelijkenis van de zebravis oog met die van andere gewervelde dieren biedt basis voor het gebruik ervan als een uitstekend diermodel van menselijke gebreken [4-7]. Verschillende zebravis mutanten vertonen lens afwijkingen, met inbegrip van hoge niveaus van celdood, wat in sommige gevallen leidt tot een volledige degeneratie van weefsels lens [8].
Om te bepalen of lens afwijkingen te wijten zijn aan intrinsieke oorzaken of aan gebrekkige interactie met de omliggende weefsels, is transplantatie van een mutant lens in een wild-type eye uitgevoerd. Met behulp van brand-gepolijste metalen naalden, mutant of wild-type lenzen worden zorgvuldig ontleed van de donor dier, en overgebracht naar de gastheer. Om onderscheid te maken wild-type en mutant weefsels, is een transgene lijn gebruikt als de donor. Deze lijn drukt membraan-gebonden GFP in alle weefsels, inclusief de lens. Deze transplantatie techniek is een essentieel instrument in de studies van de zebravis lens mutanten.
Protocol
Discussion
Meerdere stappen vereisen speciale aandacht tijdens de lens transplantaties.
- Geslepen naalden: Het is beter om een aantal naalden voor te bereiden op het uitvoeren van lens transplantatie, en het topje van de naalden moet zo dun mogelijk. Een dikkere naald zal scheuren meer weefsel vanwege zijn grotere diameter, waardoor een storing in het oog om te genezen.
- Het regelen van de embryo's: Vlak voor de transplantatie, moet u de positie van de embryo's zodat ze op hun zij liggen. Bij het…
Acknowledgements
Deze procedure volgt voor een groot deel van de transplantatie techniek voor grot vis is ontwikkeld door het lab van Bill Jeffrey.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
Referencias
- Thut, C. J., Rountree, R. B., Hwa, M., Kingsley, D. M. A large-scale in situ screen provides molecular evidence for the induction of eye anterior segment structures by the developing lens. Dev Biol. 231, 63-76 (2001).
- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
- Avanesov, A., Malicki, J. Approaches to study neurogenesis in the zebrafish retina. Methods Cell Biol. 76, 333-384 (2004).
- Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Zebrafish mutagenesis yields eye morphological mutants with retinal and lens defects. Vision Res. 42, 535-540 (2002).
- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
