Yetişkin Zebra balığı retro-orbital Enjeksiyon
Summary
Burada yetişkin zebrafish retroorbital enjeksiyon nasıl yapılacağını göstermektedir.
Abstract
Bütün hayvanlar İlaç tedavisi, kimyasal, farmakolojik ve genetik çalışmalar için herhangi bir model sistem önemli bir araçtır. İntravenöz (IV) enjeksiyonu genellikle en etkili ve non-invaziv bir ilgi ajan teslim şeklidir. Zebra balığı (<em> Danio rerio</em>), IV ilaç enjeksiyonu küçük damar çapı nedeniyle uzun bir meydan okuma olmuştur. Bu aynı zamanda hematopoeitic kök hücre nakli sırasında hücrelerin enjeksiyon için önemli bir engel olduğu kanıtlanmıştır. Tarihsel olarak, kalp yoluyla doğrudan kana enjeksiyon yapıldı. Ancak kalp, enfeksiyon, büyük bir kan kaybı veya ölümcül organ hasarı eğilimli balık bırakarak enjeksiyon sırasında sık sık delinirse, bu intra-kardiyak prosedür çok yüksek bir ölüm oranına sahiptir. Fare ile deneyim Çizim, gözün arkasında ve retro-orbital venöz sinüs içine enjeksiyon yerinde olduğu zebrafish yeni bir enjeksiyon prosedürü geliştirdik. Bu retro-orbital (RO) enjeksiyon tekniği yetişkin balık ilaç enjeksiyonu yanı sıra, tüm böbrek iliği hücreleri nakli başarıyla çalışan olmuştur. RO enjeksiyon geleneksel kalp içi enjeksiyon çok daha düşük bir ölüm oranı vardır. Retro-orbitally enjekte Balık az aşağıdaki enjeksiyon kanamaya eğilimi ve kalp gibi önemli bir organ yaralanma riski çok daha düşük. Ayrıca, düzgün bir şekilde yapıldığında, enjekte edilen hücreler ve / veya ilaçlar, kan dolaşımına izin veren bileşikler kendi niş ev kolayca bütün balık ve böbrek hücreleri üzerindeki etkisi hızla girin. Böylece, yetişkin balık kana malzemenin verimli teslim izin verirken, bu yeni enjeksiyon tekniği mortalite en aza indirir. Burada Tg retroorbital enjeksiyonu ile bu tekniği örnek (<em> Globin</em>: Yetişkin içine GFP) hücreleri<em> Casper</em> Balık yanı sıra kırmızı floresan boya enjeksiyon (dekstran, Texas Red<em></em>) Yetişkin<em> Casper</em> Balık. Daha sonra tüm hayvan floresan mikroskopi başarılı enjeksiyonları görselleştirmek.
Protocol
Discussion
Yetişkin zebrafish retroorbital enjeksiyon, kan dolaşımına enjekte edilen malzeme teslimi en yüksek verimi en düşük ölüm insidansı verir. Çünkü enjeksiyon yerinde doğa, delinme, enfeksiyon ve kan kaybı miktarı oluşumunu azaltarak, çabuk iyileşmek için görünür. Bu site bile defalarca, örneğin, günlük ilaç enjeksiyonları için kısa bir süre içinde enjekte edilebilir.
Büyük miktarda uyuşturucu sadece dalmış ve ilgi ilaç içeren suya batırılmış balık y…
Acknowledgements
Bu çalışma, Howard Hughes Tıp Enstitüsü ve embriyonik hematopoez çalışmaları için bir hibe NIH tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma-Aldrich | 2106 | Preweighed vial of 300 USP units | |
| Tricaine-S | Western Chemical | MS-222 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14190-144 | ||
| Dextran, Texas Red® | Molecular Probes Inc. | D1830 | ||
| E3 | 5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2 |
|||
| Microliter Syringe | Hamilton | 80300 | 701N 10uL SYR (26s/2”/2) |
Referencias
- Steel, C. D., Stephens, A. L., Hahto, S. M., Singletary, S. J., Ciavarra, R. P. Comparison of the lateral tail vein and the retro-orbital venous sinus as route of intravenous drug delivery in a transgenic mouse model. Lab Animal. 37, 26-32 (2008).
- Pinkerton, W., Webber, M. A method of injecting small laboratory animals by the ophthalmic plexus route. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 116, 959-961 (1964).
- White, R. M., Sessa, A. S., Burke, C., Bowman, T., LeBlanc, J., Ceol, C., Bourque, C., Dovey, M., Goessling, W., Burns, C. E., Zon, L. I. Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis. Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).
- LeBlanc, J., Bowman, T. V., Zon, L. I. Transplantation of whole kidney marrow in adult zebrafish. J. Vis. Exp. , (2007).
