Summary

마우스 폐에 Solutes 직접 Tracheal 떨어뜨림

Published: August 29, 2010
doi:

Summary

Intratracheal instillations 직접 폐에 solutes을 제공합니다. 이 절차는 폐암의 말초 지역에 instillate의 전달을 대상으로하고, 따라서 종종 폐포를 공부하기위한 연구에 통합됩니다. 우리는 생쥐에서 intratracheal instillations을 수행하기위한 세부적인 생존 프로토콜을 제공합니다.

Abstract

Intratracheal instillations 직접 폐에 solutes을 제공합니다. 이 절차는 폐암의 말초 지역에 instillate의 전달을 대상으로하고, 따라서 종종 폐포를 공부하기위한 연구에 통합됩니다. 우리는 생쥐에서 intratracheal instillations을 수행하기위한 세부적인 생존 프로토콜을 제공합니다. 이 방법을 사용, 하나는 말초 폐로 테스트 solutes 또는 고체의 제공 (예 : 폐 치료제, 계면 활성제, 바이러스, 작은 oligonucleotides)를 타겟팅할 수 있습니다. Tracheal instillations는 주로 상부 호흡기를 타겟으로하고 가능한 잠재적 유해 물질에 대한 조사에 노출될 수 있습니다 흡입 프로토콜을 통해, 원하는 방법 수 있습니다. 또한, tracheal 떨어뜨림 프로토콜을 사용하여, 동물 완전히 비침습 절차에서 복구할 수 있습니다. 이 같은 동물을 사용하여 시험 동물, 또는 다시 설치에 대한 후속 생리 측정을 만들기위한 수 있습니다. 폐에 소개 instillate의 금액은 신중하게 결정과 동물 복구를 보장하기 위해 osmotically 균형해야합니다. 일반적으로 30-75 μL instillate 볼륨 마우스 폐에 소개하실 수 있습니다.

Protocol

1. 마취 isoflurane과 쥐를 Anesthetizing하면 intraperitaneally 마취 관리를하기 전에 동물의 처리와 구속을 촉진 수도 있습니다. 흡입 마취제를 사용하면 또는 특정 연구에 적합하지 않을 수 있습니다 수 있습니다 제안한 폐 연구에서 첫 번째 isoflurane 사용의 영향, 또는 다른 마취제를 결정합니다. isoflurane과 동물을 마취. 동영상은 산소와 혼합 2퍼센트 isoflurane에서 설정 isoflurane 기화기 챔버?…

Discussion

Intratracheal instillations는 시험 화합물 (6)의 독성을 평가하기 위해 여러 가지 다양한 연구에 사용되었으며, 폐포 폐 상해 (4, 7) 유​​도, 직접 작은 oligonucleotides의 전달을 통해 계면 활성제 (8)뿐​​만 아니라, 변경 유전자 발현을 교체 폐 (5). 우리는 현재 폐암에 형광 산화 환원에 민감한 자료는 약리 성분, DNA 벡터, 바이러스, 그리고 함께 형광 표시기를 instilling)뿐만 아니라 2로 평범하고 pathophysiolog…

Acknowledgements

이 작품은 NIH K99 HL09222601 및 MNH에게 수여 S & R 재단 Ryaji Uneo 수상에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Isoflurane   Webster Veterinary Sterling , MA 14043-220-05  
Xylazine   Lloyd Laboratories Shenandoah, IA   New Animal Drug Application #139-236
Ketamine   Bioniche Pharma Lake Forest, IL 67457-001-10  
Nair       Available at drug stores
1mL SubQ Syringe   BD Syringe Franklin Lakes, NJ 309597 26 5/8 G
4-0 Nylon Suture   Ethicon San Lorenzo, Puerto Rico 1894G.S30  

Referencias

  1. Driscoll, K. E., Costa, D. L., Hatch, G., Henderson, R., Oberdorster, G., Salem, H., Schlesinger, R. B. Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: uses and limitations. Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).
  2. Helms, M. N., Jain, L., Self, J. L., Eaton, D. C. Redox regulation of epithelial sodium channels examined in alveolar type 1 and 2 cells patch-clamped in lung slice tissue. J Biol Chem. 283, 22875-22883 (2008).
  3. Helms, M. N., Self, J., Bao, H. F., Job, L. C., Jain, L., Eaton, D. C. Dopamine activates amiloride-sensitive sodium channels in alveolar type I cells in lung slice preparations. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 291, L610-L618 (2006).
  4. Iyer, S. S., Ramirez, A. M., Ritzenthaler, J. D., Torres-Gonzalez, E., Roser-Page, S., Mora, A. L., Brigham, K. L., Jones, D. P., Roman, J., Rojas, M. Oxidation of extracellular cysteine/cystine redox state in bleomycin-induced lung fibrosis. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 296, L37-L45 (2009).
  5. Li, T., Folkesson, H. G. RNA interference for alpha-ENaC inhibits rat lung fluid absorption in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 290, L649-L660 (2006).
  6. Sager, T., Porter, D., Robinson, V., Lindsley, W., Schwegler-Berry, D., Castranova, V. An improved method to disperse nanoparticles for in vitro and in vivo investigation of toxicity. Nanotoxicol. 1, 118-129 (2007).
  7. Xu, J., Gonzalez, E. T., Iyer, S. S., Mac, V., Mora, A. L., Sutliff, R. L., Reed, A., Brigham, K. L., Kelly, P., Rojas, M. Use of senescence-accelerated mouse model in bleomycin-induced lung injury suggests that bone marrow-derived cells can alter the outcome of lung injury in aged mice. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 64, 731-739 (2009).
  8. Yeh, T. F., Lin, H. C., Chang, C. H., Wu, T. S., Su, B. H., Li, T. C., Pyati, S., Tsai, C. H. Early intratracheal instillation of budesonide using surfactant as a vehicle to prevent chronic lung disease in preterm infants: a pilot study. Pediatrics. 121, e1310-e1318 (2008).

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Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct Tracheal Instillation of Solutes into Mouse Lung. J. Vis. Exp. (42), e1941, doi:10.3791/1941 (2010).

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