Incorporare teste di Drosophila adulte in paraffina: preparare il tessuto per l'istologia

Abstract

Fonte: Sunderhaus, E. R., Kretzschmar, D. Istologia di Massa per quantificare la neurodegenerazione in Drosophila . J. Vis. Exp. (2016).

Questo video descrive come incorporare teste di Drosophila in paraffina usando il metodo collar, una tecnica che prepara teste di mosca per la sessatura seriale. Le sezioni di paraffina sono utilizzate per esami istologici dell’anatomia del cervello e per la valutazione della neurodegenerazione. Il protocollo in primo piano dimostra come più mosche possono essere elaborate in un’unica preparazione, aumentando così l’efficienza del tempo e riducendo al minimo gli artefatti sperimentali.

Protocol

Questo protocollo è un estratto da Sunderhaus e Kretzschmar, Istologia di Massa per quantificare la neurodegenerazione in Drosophila, J. Vis. Exp.  (2016). 1. Fissare la testa sui collari e incorporare in paraffina NOTA: Tutti i passaggi del processo di fissazione devono essere eseguiti in una cappa aspirante. Il metilbenzoato, pur non ponendo un rischio per la salute, ha un odore …

Representative Results

Figura 1: Sezioni seriali di paraffina. A) Utilizzando il metodo del collare, le mosche sperimentali e di controllo possono essere lavorate come un unico campione infilandole su un unico collare. Le mosche oculi sine senza occhi vengono inserite per l’orientamento (frecce). B) Schema che mostra l’orientamento delle teste di mosca nel colletto. C) In questa immagi…

Materials

Collar	Genesee Scientific	TS 48-100	We are using custom made collars that are made from one piece of metal instead of layers as the ones by Genesee.
Rubber ice cube tray for embedding	Household store		The size can be made-to-fit by glueing in additional walls
Crystallizing dish	Fisher Scientific Company	08-762-3
Ether	Fisher Scientific Company	E138-1
Ethanol	Decon Laboratories Inc.	2701
Choloroform	Fisher Scientific Company	C298-500
Glacial Acetic Acid	Fisher Scientific Company	A38-212
Methylbenzoate	Fisher Scientific Company	M205-500	Distinct Odor – Use in fume hood!
Low Melting Point Paraffin Wax	Fisher Scientific Company	T565	Make sure to keep extra melted in a 65 °C waterbath