Summary

白细胞的归位和迁移的非侵入性的成像在体内</em

Published: December 05, 2010
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Summary

在这里,我们描述了一种非侵入性的双光子显微镜(2P)的方法来研究白细胞在鼠标脚垫的归巢。我们将讨论我们的组织成像中的技术方面的准备,然后步行通过设立执行和数据收集的实验,从最初的典型读者。

Abstract

双光子显微镜(2P)是一种高分辨率的成像技术,已被广泛生物学家适应。 2P显微镜的价值是,它提供了丰富的时空内完整的组织和细胞在活体小鼠行为的信息。白细胞招聘中起着重要的作用在宿主防御感染和未选中时,可以促进炎症和自身免疫性疾病。研究在体内的白细胞招聘是在技术上具有挑战性,因为细胞正在迅速在位于深内光散射组织的船只。迄今为止,大多数活体成像研究需要手术的准备,暴露的血管和组织。为了避免手术本身引起的组织损伤和炎症,在这里,我们描述了一种非侵入性的单细胞成像的方法,可用于研究白细胞贩运鼠标脚垫和指骨。我们讨论了我们的2P成像准备的技术方面和读者穿行典型的从最初的成立,以执行和数据采集的实验。

Protocol

1。动物的准备: 这个协议采用成年雌性成年LysM – EGFP小鼠,其中中性粒细胞和巨噬细胞的荧光标记1 EGFP的表达。 血管标签: 为了形象化血管,非针对性的量子点15μl(655nm)稀释成100μL的PBS和鼠标前成像10-30分钟静脉注射注入。 麻醉: 将鼠标在兽医吸入麻醉诱导系统(贵族医疗服务,INC)室。 将蒸发器,以3-4%的异氟醚和…

Discussion

在此视频协议中,我们展示了在炎症反应中白细胞招聘2P非侵入性成像程序。

脚垫是一个经典的研究,如过敏,感染和自身免疫性疾病4-7发炎的生理网站。 2P的成像提供了一个详细的图片,滚动和粘附在血管效应功能的网站趋化白细胞贩运途径不同的步骤。我们发现,针对不同类型的炎症刺激白细胞招聘的变化。刺激的剂量应慎重选择,每次尝试复述一种生理性的侮?…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项工作是由美国国立卫生研究院授予R01 – 3155 – 53502和华盛顿大学辉瑞生物医学研究协议的支持。

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Isoflurane, USP   Butler Animal Health Supply 029405  
655nm non-targeted quantum dots   Invitrogen Q21021MP  
Tetramathylrhodamine conjugated
E. coli BioParticles
  Invitrogen E2862  
Listeria monocytogenes (Lm)   Reference 2    
Quick gel   Duro    
Puralube Vet Ointment   Pharmaderm Animal Health    
Insulin syringes   BD 08290-3284-38  
PBS   Thermo Scirntific SH30256.02  

Referencias

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Wang, B., Zinselmeyer, B. H., McDole, J. R., Gieselman, P. A., Miller, M. J. Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo. J. Vis. Exp. (46), e2062, doi:10.3791/2062 (2010).

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