Un protocolo optimizado para el aislamiento de células madre de la glándula salival del ratón se describe. El método emplea la digestión enzimática y mecánica, y permite el aislamiento de salispheres que contiene células con características de células madre.
Madura glándulas salivales tanto de origen humano y el ratón integrado por un mínimo de cinco tipos de células, cada una de las que facilita la producción y excreción de saliva en la cavidad oral. Las células acinares serosas y mucosas son las proteínas y las mucosas de las fábricas que producen las glándulas, respectivamente, y representan el origen de la producción de saliva. Una vez sintetizados, los diversos componentes proteicos enzimáticos y otros de la saliva se secreta a través de una serie de células ductales epiteliales teniendo morfología de tipo, hasta la expulsión definitiva de la saliva a través de un conducto principal en la cavidad de la boca. La composición de la saliva también es modificado por las células ductales durante este proceso.
En la manifestación de enfermedades como el síndrome de Sjögren, y en algunas situaciones clínicas como el tratamiento de radioterapia para el cáncer de cabeza y cuello, la producción de saliva por las glándulas se reduce drásticamente 1,2. La xerostomía como resultado, una sensación subjetiva de boca seca, no sólo afecta a la capacidad del paciente para tragar y hablar, sino que también fomenta el desarrollo de la caries dental y puede ser socialmente debilitante para la víctima.
La restauración de la producción de saliva en las condiciones clínicas antes mencionadas por lo tanto, representa una necesidad clínica no cubierta, y como tal, varios estudios han demostrado la capacidad de regeneración de las glándulas salivales 3-5. En relación con el aislamiento de células madre similares a las células de poblaciones de células de diversos tejidos en el ratón y el cuerpo humano 6.8, hemos demostrado mediante el método descrito que las células madre aisladas de las glándulas salivales del ratón se puede utilizar para rescatar a la producción de saliva en la saliva irradiados glándulas 9,10. Este descubrimiento abre el camino para el desarrollo de células madre basado en terapias para el tratamiento de las condiciones de xerostomía en los seres humanos, y también para la exploración de las glándulas salivales como un microambiente que contiene células pluripotentes, con capacidad de auto-renovación.
El método de cultivo de tejidos descrito aquí representa un protocolo reproducible para el aislamiento de células madre que contienen salispheres de las glándulas salivales de los ratones. Los estudios que utilizan células aisladas de este modo se ha destacado la capacidad de regeneración de células de la glándula salival madre 9. El trasplante de un centenar de c-Kit + células derivadas de la salispheres inducida recuperación funcional de las glándulas salivales de ratón irradiados. Estos datos son muy interesantes y un punto de partida para la investigación de células madre basado en la terapia para la xerostomía. Muchos caminos quedan por explorar sin embargo, incluyendo el perfil de expresión de los marcadores completa de proteínas de las células madre, la capacidad de las glándulas submandibulares de rescatar la función de las glándulas parótidas irradiados salivales y viceversa, y la caracterización de la supuesta en el nicho de células madre in vivo de las células. En última instancia, la traducción de este protocolo para las muestras de tejido humano y el potencial posterior para el tratamiento de la xerostomía en pacientes humanos con las células aisladas es la aplicación más interesante del método descrito.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |