従来の核酸の定量方法論への実践的かつ効率的な代替案として光度計微量システムの使用は、2つの微量核酸の定量プロトコルのデモンストレーションを通して説明されています。
生体分子のアッセイは、継続的に多くの場合、微量の定量を行うことができるものについては核酸の定量のための従来のキュベットベースの計測器の使用を排除し、材料の徐々に少量を使用することを開発されています。
光度計微量サンプル保持システム(サーモサイエンティフィックの光度計の製品)などのキュベットやキャピラリーのような伝統的な封じ込め装置の独立したサンプルの微量をキャプチャして保持する光ファイバ技術と自然の表面張力の特性を組み合わせることで機能します。さらに、システムは本質的に希釈を行うために必要がなくなり、核酸濃度測定値の広い範囲につながる短いパスの長さを、採用しています。分光分析に必要なサンプルの量を減らすことはまた、多くの分子のワークフロー全体を通じて追加の品質管理の手順を含めることを容易に、効率を高め、最終的に下流の結果が大きな自信につながる。
限られた大量の高感度蛍光分析の必要性はまた、最近の実験の進歩で浮上している。同じ微量サンプル保持技術を用いて、蛍光の測定は、蛍光アッセイのボリュームの要件が大幅に削減できるように、材料の2μLを実行することができる。 10μL以下のようなmicroreactionsは、専用の微量fluorospectrometerを使用可能になりました。
二つの微量核酸の定量のプロトコルは、従来のキュベットベースのプロトコルへの実用的な代替案として、統合されたサンプル保持システムを使用することが実証されます。最初に、微量分光光度計を使用して直接A260吸光度法が説明されています。これは、微量fluorospectrometerで低次元ボリューム蛍光反応を可能にする蛍光ベースの方法のデモが続いている。これらの新しい技術は、1〜pg /μLのサンプルの最小限の消費量15,000 ng /μLのに至るまでの核酸濃度の評価を可能にします。
ここで紹介する定量プロトコルは、最も広く受け入れられている微量のシステムに基づいています。このようなシステムは、より大きなサンプルの量と封じ込め装置の使用に依存している伝統的な核酸の定量方法論、実用的な代替案を提供しています。
光度計微量技術は、液柱を形成するために、測定される試料の表面張力の特性に依存しているサンプル保持システムを採用しています。それは、サンプルが適切な列形成のための上限と下限の光学測定面に接触することが不可欠です。任意の時点での測定結果が再現が不正確かどうかと思われる場合は、それが最も可能性が高いサンプルの不均一性や液柱の破損の結果です。
洗剤やイソプロピルアルコールは、彼らが台座の測定面を無条件可能性があるため、洗浄剤を推奨されていません。無条件の台座には、サンプルの液滴の平坦化、その結果、台座の疎水性表面の特性が危険にさらされている場合に発生します。無条件の台座は、測定中に液柱の破損につながることができます。
図3。無条件の表面は、水滴の平坦化によって特徴付けられる。
Uncondtioned台座の表面は、光度計台座コンディショニング化合物(PR – 1、サーモサイエンティフィック㈱エルプロダクツ)を使用して再調整することができます。化合物を再調整の薄層が〜30秒間乾燥させ、上部と下部台座の表面に適用され、その後きれいな、乾いた、糸くずの出ないラボペーパーを使用してオフこすった。が正常に再調整状態は底部の台座の表面に適用した場合、最大ビーズ水滴によって特徴付けられる。
図は、4。再生された表面は、水滴のビーズアップによって特徴付けられる。
微量定量システムが大幅にサンプルの消費を削減し、より伝統的な定量化のシステムに比べて劇的に濃度範囲を増加させる。微量定量は、しばしばそのような針生検とレーザーキャプチャーマイクロダイセクションなどの限られた細胞集団が関与する状況を可能にする技術となっていますが、この手法の効率性と使いやすさは、それにも伝統的な核酸の定量方法に広く受け入れられている代替きましたと、サンプルが豊富です。
The authors have nothing to disclose.
リチャードW.ベリンジャーとDavid L.アッシュ、技術支援及び撮影のためのアプリケーションの科学者、サーモサイエンティフィックの光度計の製品、。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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NanoDrop 2000c | Thermo Fisher Scientific | ND-2000C | ||
NanoDrop 3300 | Thermo Fisher Scientific | ND-3300 |