免疫印迹使用Invitrogen公司NuPage NOVEX双三MiniGels
Summary
这篇技术文章介绍了一个标准的程序，使用市售NuPAGE电泳迷你凝胶体系自Invitrogen Western印迹。
Abstract
免疫印迹（或免疫印迹）是一个标准的实验室程序，调查核实的一种蛋白质的表达，确定不同样品中的蛋白质目前的相对量，和免疫共沉淀实验分析结果。在此方法中，检测到目标蛋白质与特定抗体在组织匀浆或提取样品。根据分子量的蛋白质的分离是通过使用变性的SDS – PAGE。转移到膜后，靶蛋白的探测与特定的抗体，通过化学发光法检测。
自第一次描述，Western印迹技术已发生了一些改进，包括预制凝胶和用户友好的设备。在我们的实验室中，我们选择使用自Invitrogen市售NuPAGE电泳系统。这是一个创新的中性pH值，不连续的SDS – PAGE，预制小凝胶体系。该系统提出了一个较长的保质期从8个月至1年不等的预制凝胶ii）一个广泛的分离范围从1到400 kDa的分子量不同的类型，包括传统Laemmli技术的几个优势：一）凝胶使用;及iii）更大的灵活性（丙烯酰胺的比例，凝胶型，和运行缓冲液的离子组成范围）。
在这个视频文章中描述的程序利用了4-12％，二，三梯度凝胶和MES运行说明如何使用Invitrogen公司NuPAGE电泳系统进行免疫印迹的缓冲区，双三不连续缓冲系统。在我们的实验室中，我们已取得了良好的和可重复的结果，采用Western印迹方法的各种生化应用。
Protocol
Discussion
这里介绍的程序使用双三凝胶与MES作为使用Invitrogen公司NuPAGE NOVEX电泳系统变性PAGE的例子运行缓冲区。此外，这个预制凝胶系统允许下变性或非变性条件以及蛋白质分离，容纳了广泛的分子量范围（1-200 kDa的双三凝胶为36-400 kDa的三醋酸凝胶）。根据你的实验，你可以选择只遵循此处描述的Western印迹技术的一部分，使用直接凝胶染色程序（例如，银或考马斯染色）或其他免疫检测方法（例如，比色法或荧光）。 </…
Acknowledgements
Referencias
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