Este artigo descreve um método eletrofisiológico para isolar a estimulação química sensilla individuais via extracelular, tip-gravações sob óleo mineral.
Nós descrevemos uma modificação de uma técnica existente 1,2 ponta de gravação para eletrofisiologicamente investigando curto, peg-like sensilla sensoriais 3,4. Na superfície ventral de todos os escorpiões são dois apêndices chamados pectinas, que têm campos densos de mecano-peg e chemosensory sensilla 5,6. Um método para avaliar chemoresponsiveness destes sensilla usa um eletrodo de tungstênio para extracelularmente gravação atividade neural dentro de um sensillum como um odorant volátil é introduzido no campo sensorial 5,7. As limitações deste método incluem a coleta de dados lento e estimulante introdução não controlada, e remoção de, no campo peg. Para superar essas limitações, desenvolvemos uma técnica de ponta de gravação de novo que usa óleo mineral apolares como um meio através do qual a entregar à base de água tastants para indivíduo peg sensilla 8,9. Nós temos aplicado com sucesso este método para obter chemoresponses sensillar ao ácido cítrico, etanol e sal. Aqui nós descrevemos o protocolo experimental para tal estudo 9. Nós pensamos que este novo método pode ser útil para estudar as propriedades de resposta de outros artrópodes chemosensory sistemas, incluindo os dos insetos 10, 11 e 12 de crustáceos.
O protocolo acima descreve como preparar um deserto pastagens escorpião (Paruroctonus utahensis) para estudo eletrofisiológico. Especificamente, mostramos como construir uma câmara de controle extracelular ponta gravações de pectínios neurônios chemosensory sob óleo. Porque água e óleo não se misturam, é possível isolar a estimulação química (com base de água estimulantes) para sensilla único. Deve-se ressaltar que P. utahensis, é um animal relativamente pequeno (≈ 2,5-5 cm) e aplicando este protocolo para animais maiores podem exigir ajustes de tamanho de muitos, tais como o tamanho da plataforma do animal, de câmara, e quantidade de óleo aplicado. Recomendamos a realização de estudos-piloto para testar a quantidade mínima de óleo necessária para liberação controlada de estimulantes à base de água química.
Além disso, não houve efeito do óleo sobre a atividade neural de base dentro pectínios sensilla 8. Este deve ser confirmado para sistemas de outro modelo, bem como, antes de avaliar chemoresponsiveness.
Este método pode ser usado em conjunto com outro método para testar efeitos de interação entre chemoresponse sensilla no campo sensorial. Por exemplo, é possível registrar-ponta (em óleo) a partir de uma base de sensillum como registro (através de um eletrodo de tungstênio) de uma sensillum vizinhos 9. Essa configuração de gravação pode ser usada para avaliar se deve ou não quimicamente estimulando uma sensillum afeta a atividade neural do sensillum-base registrados. Até o momento, ninguém testou isso por escorpião pectínios sensilla, e permanece uma questão em aberto para outros sistemas chemosensory também.
Para resumir, nós achamos que o método de gravação de ponta em avanços de petróleo do âmbito de investigações eletrofisiológicas para a base neural da gustação artrópodes. Neste manuscrito, nós fornecemos um protocolo para a preparação de animais para este método, e esperamos que fornece uma base sólida para um estudo mais aprofundado de periféricos sensoriais sistema nervoso.
The authors have nothing to disclose.
Agradecemos do fundo de Vida, Universidade de Oklahoma Graduação de Pesquisa do Programa Oportunidades, e do Departamento de Zoologia para o financiamento deste trabalho. Agradecemos também Hoefnagels Dr. Marielle para ajudar a editorial.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lift-N-Press tab | Ted Pella, Inc. | 16082 | Doubled-sided adhesive | |
MicroFil | World Precision Instruments, Inc. | MF34G | Micropipette filler | |
Standard Glass Capillaries | World Precision Instruments, Inc. | 1B100F-6 | Glass pipettes | |
Microelectrode Holder | World Precision Instruments, Inc. | MEH3SBW10 |