Cultura organotipica di tutto spessore Retina suina adulti
Summary
Qui si descrive una soluzione economica per la cultura tecnica organotipica di retina suini adulti per sette giorni. In breve, una carta sterile filtro è stato usato per sollevare la retina neurale fuori dal RPE e fotorecettori lato posto su un inserto sollevata da una misura stand.
Abstract
Vi è una domanda riconosciuto per modelli in vitro che può sostituire o ridurre gli esperimenti sugli animali. Retina suina ha una struttura simile a neuronale retina umana ed è quindi una specie preziosa per lo studio dei meccanismi di lesione della retina umana e le malattie degenerative. Qui si descrive una soluzione economica per la cultura tecnica organotipica di retina suini adulti isolati da occhi ottenuti da un mattatoio. Dopo aver rimosso il segmento anteriore, una lama trapano è stato utilizzato per creare più neurali retina-membrana di Bruch-RPE-coroide, sclera espianti dal segmento posteriore degli occhi suini adulti. Un pezzo di carta da filtro sterile è stato utilizzato per sollevare la retina neurale fuori da ogni espianto. Il filtro di carta retina complesso è stato colto (lato fotorecettori verso l'alto) in cima a un inserto, che si è tenuto lontano dal fondo del piatto la cultura da una misura stand. Il supporto permette una buona circolazione del terreno di coltura su entrambi i lati della retina. Nel complesso, questa procedura è semplice, riproducibile, e permette la conservazione dei nativi struttura della retina per almeno sette giorni, che lo rende un modello utile per una varietà di studi morfologici, farmacologico, biochimico e sulla retina dei mammiferi.
Protocol
Discussion
I ricercatori hanno stabilito una visione varietà di sistemi di coltura della retina, compresi i sistemi organotipica, per studiare una serie di questioni, come il trapianto di cellule staminali della retina 1, la rigenerazione della retina 2, e l'espressione genica esogeni 3-5. Tuttavia, retina dei mammiferi adulti è difficile da mantenere in vitro, principalmente a causa della alte energie richieste dei fotorecettori 6. Koizumi et al. Descritto un con…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto da NIH concedere EY 012.031 (ET-A), un premio dalla Fondazione FM Kirby (ET-A), ricerca per la Prevenzione della Cecità, Inc. (MAZ), il New Jersey Lions Eye Research Foundation (MAZ), L'Istituto Eye of New Jersey (MAZ), il J. Giuseppe e Margherita DiSepio Retina Research Fund (MAZ), ed il Janice Mitchell Vassar e Ashby Mitchell Fellowship (AMK).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| MEM | Invitrogen-Gibco | 10370-021 | |
| 5 mL pipette tip | ISC BioExpress | P-3250-19 | |
| NUNC cell culture insert | Thermal | 137443 | 8μm, Polycarbonate |
| Whatman 4M Filter paper | Whatman | 1004 | |
| DMEM | Cellgro-mediatech Inc | 10-013-CV | |
| Agar | Fluka | 05040 | |
| Fungizone Amphotericin B | Invitrogen-Gibco | 15290018 | |
| Trephine blades | Bausch and Lomb | T3096 | 6.00mm |
| O.C.T. Compound | Electron Microscopy Sciences | 62550-01 | 4583 |
| Sciences | |||
| Cryostat | Leica | CM1900 | |
| Vibratome | Leica | Series 1000 | |
| Confocal microscopy; | Carl Zeiss | LSM510 | |
| Anti-Synaptic Vesicle Protein 2 (SV2) mouse monoclonal antibody | DSHB | N/A | |
| Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein (GFAP) polyclonal rabbit antibody | DAKO | DAKO | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170 |
Referencias
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