Windowing Kip Eieren voor Ontwikkelingsbiologie Studies

Summary

Het gemak van bereikbaarheid van het embryo heeft het mogelijk gemaakt voor experimenten naar cel lot met behulp van verschillende methoden, waaronder chick kwartel hersenschimmen en focale kleurstof etikettering kaart. In dit artikel tonen we een ei voorbereiding methode die is geoptimaliseerd voor een lange overlevingsduur.

Abstract

De studie van de ontwikkeling is sterk ondersteund door het gebruik van het kippenembryo als een experimenteel model. Het gemak van bereikbaarheid van het embryo heeft het mogelijk gemaakt voor experimenten naar cel lot met behulp van verschillende methoden, waaronder chick kwartel hersenschimmen en focale kleurstof etikettering kaart. Daarnaast, is het mogelijk voor moleculaire verstoringen van verschillende types, waaronder de plaatsing van eiwit-gecoate kralen en introductie van plasmide DNA met behulp van in-ovo elektroporatie. Deze experimenten hebben opgeleverd belangrijke gegevens over de ontwikkeling van het centrale en perifere zenuwstelsel. Voor veel van deze studies, is het noodzakelijk om de eischaal te openen en te hersluiten zonder verstoren van de embryo's groei. Het embryo kan worden onderzocht in opeenvolgende ontwikkelingsfasen door de heropening van de eierschaal. Terwijl er verschillende uitstekende methoden voor het openen van kippeneieren, in dit artikel tonen we aan een methode die is geoptimaliseerd voor lange tijd te overleven. In deze methode, het ei rust op zijn kant en een klein venster wordt gesneden in de schaal. Na de experimentele procedure, wordt de shell gebruikt om het ei voor de duur van zijn ontwikkeling te dekken. Doorzichtige plastic tape bedekken de eierschaal beschermt de embryo en het behoud van hydratatie gedurende de rest van de incubatietijd. Deze methode is gebruikt vanaf twee dagen van incubatie en heeft toegestaan ​​overleving door volwassen embryonale leeftijden.

Protocol

1. Verwijder de eieren van incubator Te handhaven op 37 ° C met een relatieve luchtvochtigheid die boven de 60%. Verwijder de eieren, sla de eieren 90 °, zodat de grote basis horizontaal ligt. 2. Wattenstaafje eieren om te steriliseren Verzadigen een stapel van niet-steriel gaasje met 70% ethanol. Gebruik twee tot drie stukken op te uitstrijkje tot 5 eieren. Gooi als het gaas vuil is. 3. Voorbereiden eiwit verwij…

Discussion

Deze methode zorgt voor lange tijd te overleven volgende experimentele manipulaties. Bijvoorbeeld, dye-labeling studies mogen voortbestaan ​​aan E10 of later in een lot mapping studie (1). Daarnaast is het gebruikt voor in ovo elektroporatie studies dat verandering van de genexpressie niveaus en benodigde ontwikkeling door te gaan naar latere ontwikkelingsstadia (2-6) te verstrekken. Dit window techniek kan gebruikt worden in combinatie met een procedure die overleving na manipulaties aan het embryo vereist.

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Rotating incubator		Profi		Maintain at 37° Degrees with relative humidity set above 60%
70 % EtOH
gauze
3M plastic tape
10cc syringe				1/egg
18G needles				1½ inch needle, 1/syringe
Dissection scissors				4″ sharp straight blades
Fertilized Eggs

.