Il documento descrive una tecnica semplificata per corneale accise e di sviscerare i tessuti della retina dal globo oculare di donatori cadaveri umani. La tecnica qui descritta aiuterà a accise tessuti di buona qualità da usare per il trapianto, a fini chirurgici o di ricerca senza danneggiare altri tessuti del globo oculare.
Enucleazione è il processo di recupero del globo oculare da un donatore cadavere lasciando il resto del globo indisturbata. Escissione si riferisce al recupero dei tessuti oculari, in particolare cornea, tagliandolo separato dal globo oculare. L'eviscerazione è il processo di rimozione degli organi interni di cui qui retina. Il globo oculare consiste nella cornea, sclera, il corpo vitreo, la lente, l'iride, la retina, coroide, etc muscoli (Suppl. Figura 1). Quando un paziente è affetto da danno corneale, la cornea deve essere rimosso e un sano deve essere trapiantato da interventi cheratoplastica. Malattie genetiche o difetti della funzione retinica, può compromettere la visione. Globi oculari umani possono essere utilizzate per varie procedure chirurgiche come banche degli occhi, il trapianto di cornea o la sclera umana e ricerca su tessuti oculari. Tuttavia, vi sono poche informazioni disponibili sulla cornea umana escissione e della retina, probabilmente a causa della Limited accessibilità ai tessuti umani. La maggior parte degli studi che descrivono procedure simili vengono eseguiti su modelli animali. Ricercatori contare sulla disponibilità di tessuti oculari adeguatamente sezionati e ben conservata al fine di estendere la conoscenza sui diritti umani lo sviluppo degli occhi, l'omeostasi e la funzione. Come riceviamo elevata quantità di globi oculari di cui circa il 40% (Tabella 1) di essi sono utilizzati per scopi di ricerca, siamo in grado di eseguire la grande quantità di esperimenti su questi tessuti, la definizione di tecniche per accise e conservare regolarmente.
La cornea è un tessuto avascolare che consente la trasmissione della luce sulla retina e per questo scopo deve sempre mantenere un buon grado di trasparenza. All'interno della cornea, la regione limbus, che è un serbatoio delle cellule staminali, aiuta la ricostruzione delle cellule epiteliali e limita la crescita eccessiva della congiuntiva mantenere trasparenza corneale e chiarezza. La dimensione e th ickness della cornea sono essenziali per la visione chiara, come cambiamenti di una di esse potrebbe portare a distrarsi, la visione chiara. La cornea è composto da 5 strati: a) epitelio, b) strato di Bowman, c) stroma, d), della membrana di Descemet e e) endotelio. Tutti i livelli dovrebbe funzionare correttamente per garantire una visione chiara 4,5,6. La coroide è la tunica intermedia tra la sclera e retina, delimitata all'interno dalla membrana del Bruch ed è responsabile del flusso di sangue nell'occhio. Il coroide aiuta anche a regolare la temperatura e fornisce nutrimento per gli strati esterni della retina 5,6. La retina è uno strato di tessuto nervoso che copre la parte posteriore del globo oculare (Suppl. figura 1) e consiste di due parti: una parte fotosensibile e un non-ricettivo dell'articolo. La retina aiuta a ricevere la luce dalla cornea e del cristallino e lo converte in energia chimica eventualmente trasmessa al cervello con l'aiuto del nervo ottico 5,6.
ove_content "> Lo scopo di questo lavoro è quello di fornire un protocollo per la dissezione dei tessuti corneali e retiniche da globi oculari umani. Evitare la contaminazione incrociata con i tessuti adiacenti e preservando l'integrità dell'RNA è di fondamentale importanza in quanto tali tessuti sono indispensabili per scopi di ricerca finalizzati a (i) che caratterizza il trascrittoma dei tessuti oculari, (ii) isolare le cellule staminali per i progetti di medicina rigenerativa, e (iii) valutare le differenze istologiche tra i tessuti normali da / soggetti interessati. In questo articolo descriviamo la tecnica attualmente si sta adoperando per rimuovere la cornea, la coroide e dei tessuti retinici da un globo oculare. Qui forniamo un protocollo dettagliato per la dissezione del globo oculare umana e l'asportazione dei tessuti corneali e retiniche. Il video di accompagnamento aiuterà i ricercatori a imparare una tecnica appropriata per il recupero di preziosi tessuti umani, che sono difficili da trovare regolarmente.Entrambi, l'escissione e la corretta conservazione dei tessuti corneali e retiniche sono fondamentali come difetti minori come il danno endoteliale o elevato numero di pieghe Descemet può portare al fallimento del trapianto di cornea, mentre alterazioni di temperatura o di maltrattamento può compromettere l'integrità dei tessuti retinici. Lo scopo di questo lavoro è quello di mostrare come i tessuti corneali e retiniche possono essere isolate in modo ottimale, senza indurre danni o alterazioni che possono co…
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato finanziato in parte attraverso borse di studio della Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 e la Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009). Gli autori ringraziano il dottor C. Griffoni per i dati 2009/2010 riassunto sull'uso dei globi oculari umane.
Materials for excision of cornea and retina.
Product description | Dimensions | Company / Institute |
Guarded disposable scalpel | Blade size 15 | Swann-Morton |
Sterile bandages | 5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs | Artsana |
Sterile disposable medical towel | 35 X 50 cm | U.Jet |
Sterile scissors | Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt | e.janach |
Sterile forceps | Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth | e.janach |
Corneal claw – Disposable medical device | NIIOS (Hippocratech) | |
Preparations | ||
PBS | 100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water) | Sigma-Aldrich |
Na-thiosulphate | 1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x] | Sigma-Aldrich |
I-PVP | 5 gm I-PVP in 1 litre d/w | Sigma-Aldrich |
Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.
Materials for storage medium (2000 ml).
Components | Supplier | Catalogue number | Concentration | Quantity |
MEM (1X) liquid | Invitrogen | 32360-034 | 1900 ml | |
Sodium pyruvate | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10ml/l) | 20 ml |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10ml/l) | 20 ml |
Antibiotic/antimycotic | Sigma-aldrich | A5955-20ML | 10ml/l | 20 ml |
Newborn calf serum | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml/l) | 40 ml |
Table 3. Materials for storage medium.
Preparation of storage medium
Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.
Materials for transport medium (2000 ml).
Components | Supplier | Catalogue number | Concentration | Quantity |
MEM (1X) liquid | Invitrogen | 32360-034 | 1800 ml | |
Sodium pyruvate | Invitrogen | 11360-039 | 1mM (10 ml/l) | 20ml |
L-glutamine | Invitrogen | 25030-032 | 2mM (10 ml/l) | 20ml |
Newborn calf serum | Invitrogen | 26010-74 | 2% (20 ml/l) | 40 ml |
Dextran t500 | Pharmacosmos | 551005004007 | 6% (60 gm/litre) | 120 g/l |
Table 4. Material for transport medium.
Preparation of transport medium
Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.