Una tecnica semplificata per<em> In situ</emEscissione> della cornea e l'eviscerazione del tessuto retinico dal globo oculare umano

Summary

Il documento descrive una tecnica semplificata per corneale accise e di sviscerare i tessuti della retina dal globo oculare di donatori cadaveri umani. La tecnica qui descritta aiuterà a accise tessuti di buona qualità da usare per il trapianto, a fini chirurgici o di ricerca senza danneggiare altri tessuti del globo oculare.

Abstract

Enucleazione è il processo di recupero del globo oculare da un donatore cadavere lasciando il resto del globo indisturbata. Escissione si riferisce al recupero dei tessuti oculari, in particolare cornea, tagliandolo separato dal globo oculare. L'eviscerazione è il processo di rimozione degli organi interni di cui qui retina. Il globo oculare consiste nella cornea, sclera, il corpo vitreo, la lente, l'iride, la retina, coroide, etc muscoli (Suppl. Figura 1). Quando un paziente è affetto da danno corneale, la cornea deve essere rimosso e un sano deve essere trapiantato da interventi cheratoplastica. Malattie genetiche o difetti della funzione retinica, può compromettere la visione. Globi oculari umani possono essere utilizzate per varie procedure chirurgiche come banche degli occhi, il trapianto di cornea o la sclera umana e ricerca su tessuti oculari. Tuttavia, vi sono poche informazioni disponibili sulla cornea umana escissione e della retina, probabilmente a causa della Limited accessibilità ai tessuti umani. La maggior parte degli studi che descrivono procedure simili vengono eseguiti su modelli animali. Ricercatori contare sulla disponibilità di tessuti oculari adeguatamente sezionati e ben conservata al fine di estendere la conoscenza sui diritti umani lo sviluppo degli occhi, l'omeostasi e la funzione. Come riceviamo elevata quantità di globi oculari di cui circa il 40% (Tabella 1) di essi sono utilizzati per scopi di ricerca, siamo in grado di eseguire la grande quantità di esperimenti su questi tessuti, la definizione di tecniche per accise e conservare regolarmente.

La cornea è un tessuto avascolare che consente la trasmissione della luce sulla retina e per questo scopo deve sempre mantenere un buon grado di trasparenza. All'interno della cornea, la regione limbus, che è un serbatoio delle cellule staminali, aiuta la ricostruzione delle cellule epiteliali e limita la crescita eccessiva della congiuntiva mantenere trasparenza corneale e chiarezza. La dimensione e th ickness della cornea sono essenziali per la visione chiara, come cambiamenti di una di esse potrebbe portare a distrarsi, la visione chiara. La cornea è composto da 5 strati: a) epitelio, b) strato di Bowman, c) stroma, d), della membrana di Descemet e e) endotelio. Tutti i livelli dovrebbe funzionare correttamente per garantire una visione chiara ^4,5,6. La coroide è la tunica intermedia tra la sclera e retina, delimitata all'interno dalla membrana del Bruch ed è responsabile del flusso di sangue nell'occhio. Il coroide aiuta anche a regolare la temperatura e fornisce nutrimento per gli strati esterni della retina ^5,6. La retina è uno strato di tessuto nervoso che copre la parte posteriore del globo oculare (Suppl. figura 1) e consiste di due parti: una parte fotosensibile e un non-ricettivo dell'articolo. La retina aiuta a ricevere la luce dalla cornea e del cristallino e lo converte in energia chimica eventualmente trasmessa al cervello con l'aiuto del nervo ottico ^5,6.

ove_content "> Lo scopo di questo lavoro è quello di fornire un protocollo per la dissezione dei tessuti corneali e retiniche da globi oculari umani. Evitare la contaminazione incrociata con i tessuti adiacenti e preservando l'integrità dell'RNA è di fondamentale importanza in quanto tali tessuti sono indispensabili per scopi di ricerca finalizzati a (i) che caratterizza il trascrittoma dei tessuti oculari, (ii) isolare le cellule staminali per i progetti di medicina rigenerativa, e (iii) valutare le differenze istologiche tra i tessuti normali da / soggetti interessati. In questo articolo descriviamo la tecnica attualmente si sta adoperando per rimuovere la cornea, la coroide e dei tessuti retinici da un globo oculare. Qui forniamo un protocollo dettagliato per la dissezione del globo oculare umana e l'asportazione dei tessuti corneali e retiniche. Il video di accompagnamento aiuterà i ricercatori a imparare una tecnica appropriata per il recupero di preziosi tessuti umani, che sono difficili da trovare regolarmente.

Protocol

1. Excisione situ della cornea da globi oculari Accendere la cappa a flusso laminare d'aria circa 15 minuti prima dell'uso. Pulire la cappa a flusso laminare con il 70% di alcool isopropilico. Indossare indumenti protettivi, come cappello e maschera chirurgica. Scrub mani e gli avambracci e asciugare con un telo sterile. Indossare guanti sterili e camice o maniche con tecnica asettica. Impostare il campo sterile inserendo un vassoio sterile strumento asettico. Verificare che gli str…

Discussion

Entrambi, l'escissione e la corretta conservazione dei tessuti corneali e retiniche sono fondamentali come difetti minori come il danno endoteliale o elevato numero di pieghe Descemet può portare al fallimento del trapianto di cornea, mentre alterazioni di temperatura o di maltrattamento può compromettere l'integrità dei tessuti retinici. Lo scopo di questo lavoro è quello di mostrare come i tessuti corneali e retiniche possono essere isolate in modo ottimale, senza indurre danni o alterazioni che possono co…

Materials

Materials for excision of cornea and retina.

Product description	Dimensions	Company / Institute
Guarded disposable scalpel	Blade size 15	Swann-Morton
Sterile bandages	5 cm X 5 cm, 8 layered, 5 pcs	Artsana
Sterile disposable medical towel	35 X 50 cm	U.Jet
Sterile scissors	Blades 24 mm / overall length. 95 mm curved, blunt	e.janach
Sterile forceps	Stainless steel -100 mm 11 X 2 ruled by 0.70 mm teeth	e.janach
Corneal claw – Disposable medical device		NIIOS (Hippocratech)
	Preparations
PBS	100 ml PBS [10x] in 900 ml d/w (distilled water)	Sigma-Aldrich
Na-thiosulphate	1 gm Na-thiosulphate in 1 litre of PBS [1x]	Sigma-Aldrich
I-PVP	5 gm I-PVP in 1 litre d/w	Sigma-Aldrich

Table 2. The table describes the materials used for excision of cornea and retina and the company they are received from.

Materials for storage medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1900 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10ml/l)	20 ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10ml/l)	20 ml
Antibiotic/antimycotic	Sigma-aldrich	A5955-20ML	10ml/l	20 ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml

Table 3. Materials for storage medium.

Preparation of storage medium

Add all the ingredients using the specific concentrations as given above in a jar and mix well. Filter them using pore size of 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) with help of a peristaltic pump. Preserve the medium in the bottles at RT.

Materials for transport medium (2000 ml).

Components	Supplier	Catalogue number	Concentration	Quantity
MEM (1X) liquid	Invitrogen	32360-034		1800 ml
Sodium pyruvate	Invitrogen	11360-039	1mM (10 ml/l)	20ml
L-glutamine	Invitrogen	25030-032	2mM (10 ml/l)	20ml
Newborn calf serum	Invitrogen	26010-74	2% (20 ml/l)	40 ml
Dextran t500	Pharmacosmos	551005004007	6% (60 gm/litre)	120 g/l

Table 4. Material for transport medium.

Preparation of transport medium

Add Dextran 6% in ~ 1.5 litre of MEM and leave it overnight. Add the rest of ingredients in the media and filter using 0.2 micron filter (Millipore, Milan, Italy) using a vacuum pump. Preserve the medium in the bottles at RT.