Moleküler Mekanizmalarının Karakterizasyonu<em> In vivo</em> UVR İsteyerek Katarakt
Summary
Katarakt dünyada körlüğün en önde gelen nedenidir. Güneş ultraviyole radyasyon (UVR) katarakt gelişimi için en önemli risk faktörüdür. Kadar UVR-B ile indüklenen katarakt bir hayvan modeli geliştirilmiştir. UVR, kantitatif RT-PCR ve immünohistokimyasal maruziyet: Bu yazıda katarakt oluşumu soruşturma yöntemleri açıklanmaktadır.
Abstract
Katarakt dünyada 1 körlüğün önde gelen nedenidir. Dünya Sağlık Örgütü ışık transferi engellediğini göz merceğinden bir karaltı olarak katarakt tanımlar. Katarakt diyabet, sigara, ultraviyole radyasyon (UVR), alkol, iyonize radyasyon, steroidler ve hipertansiyon ile ilişkili bir çok faktörlü bir hastalıktır. UVR katarakt neden olduğu güçlü 2-4 deneysel ve epidemiyolojik kanıtlar 5,6 yoktur. Biz anestezi 7 ve olmayan anestezi altındaki hayvanlarda 8 hem UVR B indüklenmiş katarakt için bir hayvan modeli geliştirdi.
Katarakt için tek çare cerrahidir ancak bu tedavinin herkes için erişilebilir değildir. Bu 10 yıl boyunca katarakt başlangıcı bir gecikme 50% 9 ile katarakt ameliyatı gereksinimini azaltabilir tahmin edilmiştir. Katarakt insidansı geciktirmek için, katarakt oluşumu mekanizmasını anlamak ve etkin önleme stratejilerini bulmak için gereklidiregies. Katarakt gelişimi için mekanizmalar arasında, apoptoz insanlar ve hayvanlar 10 katarakt başlamasında önemli bir rol oynar. Bizim odak son zamanlarda katarakt gelişimi 8,11,12 için mekanizma olarak objektif apoptoz olmuştur. Bu apoptoz yolu üzerinde UVR etkisi daha iyi anlaşılmasını katarakt önlemek için yeni ilaç keşfi için imkanlar sağlayacağı tahmin edilmektedir.
Bu yazıda, deneysel UVR-B vivo maruz kalınmasına neden olabilir nasıl katarakt açıklar. Ayrıca RT-PCR ve immünohistokimyasal araçları UVR-B ile indüklenen katarakt moleküler mekanizmaları çalışmak olarak sunulmaktadır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu kağıt UVR-B ile indüklenen katarakt sırasında meydana gelen moleküler olayları inceleyerek sağlayan yöntemler açıklanır.
Vivo UVR indüklenmiş katarakt kullanılabilir bilgilerin çoğu albino Sprague-Dawley sıçanlara 7, 16, 17, 18, 19, deneylerden türetilen olduğu göz önüne alındığında, biz bu çalışmada albino Sprague-Dawley sıçan kullanmaya karar verdi. Sıçanların Yaş altı hafta eski oldu. Erkeklerde aksine, kad?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
S och Drottning ViktoriaS Frimurarstiftelse: Bu çalışma Karolinska Enstitüsünde KID-finansman, İsveç Radyasyondan Korunma Kurumu, Karolinska Enstitüsünde Göz Araştırma Vakfı, Silah och Bertil Stohnes Stiftelse, St Erik'in Göz Hastanesi Araştırma Vakfı, Ögonfonden, Konung Gustav V tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
| Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
| Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
| Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
| Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
| 3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
| NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
| p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
| Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
| Agarose | Sigma | A5093 | |
| Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
| Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
| 1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
| iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
| 96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
| TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
| MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
| Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
| Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
| Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
| Vectashield | Vector Laboratories | ||
| Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
| Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
| TBE buffer 10x | Promega | V4251 |
Referencias
- Brian, G., Taylor, H. R. Cataract blindness: challenge for the 21 st century. Bulletin of the World Health Organization. 79, 249-256 (2001).
- Jose, J. G., Pitts, D. G. Wavelength dependency of cataracts in albino mice following chronic exposure. Experimental Eye Research. 41, 545-563 (1985).
- Söderberg, P. G. Acute cataract in the rat after exposure to radiation in the 300 nm wavelength region. A study of the macro-, micro- and ultrastructure. Acta Ophthalmol. (Copenh). 66, 141-152 (1988).
- Meyer, L., Dong, X., Wegener, A., Söderberg, P. G. Dose dependent cataractogenesis and Maximum Tolerable Dose (MTD 2.3:16) for UVR – B induced cataract in C57BL/6J mice. Experimental Eye Research. 86, 282-289 (2008).
- McCarty, C., et al. Assessment of lifetime ocular exposure to UV-B: the Melbourne visual impairment project. Developments in Ophthalmology. 27, 9-13 (1997).
- Sasaki, H., et al. Localization of cortical cataract in subjects of diverse races and latitude. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 4210-4214 (2003).
- Söderberg, P. G. Experimental cataract induced by ultraviolet radiation. Acta Ophthalmol. (Copenh. 68, 1-77 (1990).
- Galichanin, K., Löfgren, S., Bergmanson, J., Söderberg, P. Evolution of damage in the lens after in vivo close to threshold exposure to UV-B radiation: cytomorphological study of apoptosis. Exp. Eye Res. 91, 369-377 (2010).
- McCarty, C. A., Taylor, H. R. A review of the epidemiologic evidence linking ultraviolet radiation and cataracts. Dev. Ophthalmol. 35, 21-31 (2002).
- Li, W. C., et al. Lens epithelial cell apoptosis appears to be a common cellular basis for non-congenital cataract development in humans and animals. Journal of Cell Biology. 130, 169-181 (1995).
- Michael, R., Vrensen, G., van Marle, J., Gan, L., Söderberg, P. G. Apoptosis in the rat lens after in vivo threshold dose ultraviolet irradiation. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 13, 2681-2687 (1998).
- Ayala, M. N., Strid, H., Jacobsson, U., Söderberg, P. G. p53 Expression and Apoptosis In The Lens After Ultraviolet Radiation Exposure. Investigative ophthalmology of visual science. 48, 4187-4191 (2007).
- Galichanin, K., Wang, J., Lofgren, S., Soderberg, P. A new universal rat restrainer for ophthalmic research. Acta Ophthalmol. 89 (1), (2011).
- Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. In vivo cataract after repeated exposure to ultraviolet radiation. Experimental Eye Research. 70, 451-456 (2000).
- Söderberg, P. G., et al. Toxicity of ultraviolet radiation exposure to the lens expressed by maximum tolerable dose (MTD). Developments in Ophthalmology. 35, 70-75 (2002).
- Michael, R. Development and repair of cataract induced by ultraviolet radiation. Ophthalmic Research. 32, 1-45 (2000).
- Löfgren, S. . Cataract from ultraviolet radiation. , (2001).
- Ayala, M. N. . Influence of exposure patterns and oxidation in UVR induced Cataract. , (2005).
- Dong, X. . Safety limit estimation for cataract induced by ultraviolet radiation. , (2005).
- Löfgren, S., Michael, R., Söderberg, P. G. Impact of age and sex in ultraviolet radiation cataract in the rat. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 44, 1629-1633 (2003).
- Ayala, M. N., Michael, R., Söderberg, P. G. Influence of exposure time for UV radiation-induced cataract. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 41, 3539-3543 (2000).
