Para demostrar la imagen molecular del cáncer de MR con un pequeño péptido agente de contraste de MRI específica a las proteínas plasmáticas coagulados en estroma tumoral en un modelo de cáncer de próstata de ratón dirigido.
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Artículo de método
MR Imagen Molecular del cáncer de próstata con un agente de contraste dirigidos Pequeño Molecular CLT1 Péptido
En este artículo
Resumen
Resumen
Matriz extracelular del tumor tiene abundancia de proteínas relacionadas con el cáncer que se pueden utilizar como biomarcadores para el diagnóstico por imagen molecular del cáncer. En este trabajo, hemos demostrado el cáncer de RM molecular eficaz con un pequeño péptido molecular dirigida Gd-DOTA complejo monoamida como objetivo MRI agente de contraste específico a las proteínas plasmáticas coagulada en el estroma tumoral. Se realizó el experimento de evaluación de la eficacia del agente para la detección no invasiva de tumor de próstata con la RM en un modelo ortotópico de cáncer de próstata PC-3 de ratón. El agente de contraste diana era eficaz para producir la mejora del contraste significativa del tumor a una dosis baja de 0,03 mmol Gd / kg. El péptido agente de contraste de resonancia magnética específica es prometedor para la RM molecular del tumor de próstata.
Introducción
De formación de imágenes eficaz de dianas moleculares relacionados con el cáncer es de gran importancia para mejorar la precisión de la detección del cáncer antes y diagnóstico. La resonancia magnética (MRI) es una poderosa técnica de imagen clínica con alta resolución espacial y no la radiación de ionización 1. Sin embargo, ningún agente de contraste específico está disponible para la imagen molecular del cáncer MR clínica. El diseño innovador y el desarrollo de agentes de contraste de resonancia magnética dirigidos avanzarían en gran medida la aplicación de la imagen molecular del cáncer de MR. Se han hecho esfuerzos significativos para desarrollar agent....
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Protocolo
Protocolo de adaptación de un estudio previo 11.
1. Conjugación de Gd-DOTA para CLT1 Péptido
- Uso de la síntesis de péptidos en fase sólida estándar, sintetizar CLT1 péptido (CGLIIQKNEC) a partir de aminoácidos protegidos con Fmoc en una resina de cloruro de 2-clorotritilo (1,0 mmol).
- Después de la adición de aminoácido final, ciclar el péptido lineal en-resina con talio (III) trifluoroacetato (1,09 g, 2,0 mmoles, 2 equivalentes) en DMF (20 ml) a 0 º C durante 2 h.
- Siguiente, conjugado de PEG y lisina secuencialmente a la N-terminal de CLT1 péptido (1,0 mmoles) en resina haciendo reaccionar secuenc....
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Resultados
La Figura 1 muestra la síntesis del agente de contraste dirigidos CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 y el esquema general del experimento. CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 muestra la capacidad de relajación mucho más alto que el Gd-DOTA clínica (Tabla 1). A 1,5 T, la capacidad de relajación T 1 por gadolinio de CLT1-dl-(Gd-DOTA) 4 en PBS (pH 7,4) es de aproximadamente 3 veces mayor que la de Gd-DOTA 10. Maestro de imagen confirma la fuerte unión específica de Rojo Texas etique.......
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Discusión
Pasos críticos
La selección de biomarcadores adecuada y focalizada en los pequeños Péptido
Para desarrollar con éxito un agente de contraste objetivo con el tamaño pequeño, dos puntos clave deben ser considerados. En primer lugar, es importante seleccionar biomarcadores moleculares adecuados que son abundantemente presente en los tejidos enfermos con poca presencia en los tejidos normales. Nuestro biomarcador relacionado con el cáncer se selecciona,.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Este trabajo es apoyado en parte por la Asociación Americana del Corazón GRA Primavera 09 Postdoctoral Fellowship (09POST2250268) y el NIH R01 CA097465. Apreciamos altamente Dr. Wen Li y el Dr. Vikas Gulani para la prueba de protocolo de la RM y la configuración, y la Sra. Yvonne Parker por su asistencia en la implantación del tumor.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| >Fmoc | EMD Chemicals Inc | ||
| DOTA-tris(t-Bu) | TCI America | ||
| PyBOP, HOBt, HBTU | Nova Biochem | ||
| DIPEA, Trifluoroacetato de talio(III), TIS | Sigma-Aldrich Corp. | ||
| Texas Red, éster succinimidílico, isómero único | Invitrogen | T20175 | |
| EQUIPMENTS | |||
| Agilent 1100 Sistema de HPLC | Agilent | ||
| ZORBAX 300SB-C18 PrepHT columna | Agilent | ||
| ICP-– S Optima 3100XL | Perkin-Elmer | ||
| MALDI-TOF espectrómetro de masas | Bruker | AutoflexTM Speed | |
| Maestro FLEX Sistema de imagen in vivo | Cambridge Research Instrumentation, Inc. | ||
| Escáner de resonancia magnética Biospec 7T | Bruker | ||
Referencias
- Brown, M. A., Semelka, R. C. MRI Basic Principles and Applications. , 3rd, John Wiley & Sons, Inc. Hoboken, New Jersey. (2003).
- Artemov, D. Molecular magnetic resonance imaging with targeted contrast agents. J. Cell. Biochem. 90, 518-524 (2003).
- Kalber, T. L., Kamaly, N., et al.
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Reimpresiones y permisos
