체외 세포 이동 및 내습 분석 실험에서
Summary
일반적으로 사용되는 체외에서 세포의 이동 및 침윤을 조사하기위한 고도의 접근 방법이 설명되어 있습니다. 첫 번째 방법은 세포 운동성을 측정하는 세포 상처 폐쇄 분석이다. 두 번째 방법은 화성과 세포의 침략적인 능력을 평가하는 트랜스 웰 마이그레이션 및 침입 분석이다.
Abstract
Migration is a key property of live cells and critical for normal development, immune response, and disease processes such as cancer metastasis and inflammation. Methods to examine cell migration are very useful and important for a wide range of biomedical research such as cancer biology, immunology, vascular biology, cell biology and developmental biology. Here we use tumor cell migration and invasion as an example and describe two related assays to illustrate the commonly used, easily accessible methods to measure these processes. The first method is the cell culture wound closure assay in which a scratch is generated on a confluent cell monolayer. The speed of wound closure and cell migration can be quantified by taking snapshot pictures with a regular inverted microscope at several time intervals. More detailed cell migratory behavior can be documented using the time-lapse microscopy system. The second method described in this paper is the transwell cell migration and invasion assay that measures the capacity of cell motility and invasiveness toward a chemo-attractant gradient. It is our goal to describe these methods in a highly accessible manner so that the procedures can be successfully performed in research laboratories even just with basic cell biology setup.
Introduction
운동성 생균의 필수적인 특징이다. 세포 이동은 생활, 배아 발달, 면역 반응 및 암의 전이와 염증 1-9 많은 병적 인 프로세스의 개념에 참여하고있다. 따라서, 세포 이동성 행동을 연구하는 방법은 생명 과학, 생물학, 생명 공학 및 관련 분야의 분야의 광범위한 매우 유용한 연구 도구입니다.
암 환자에서 사망의 주원인은 전이 진행과 관련 될 때 암 연구에서 세포 이동의 연구는 특히 중요하다. 몸 전체에 확산 보급하는 암에 대한 위해, 암 세포가 이주해야하고 intravasate 혈액 순환에, 세포 외 기질 (ECM)을 통해 침입, 먼 사이트에 연결하고, 마지막으로 먼 초점 1,10-12을 형성하는 extravasate. 각종 생물학적 방법에서는 이러한 이벤트를 연구하는데 이용 될 수있다. 세포 배양 상처 폐쇄D 트랜스 웰 마이그레이션 및 침입 분석 널리 과학계 1,10에 사용됩니다. 이 테스트는 특정 세포 유형이 자발적으로 마이그레이션 또는 화학 – 유인에 반응하고 방향성을 향해 마이그레이션 할 수 있습니다 얼마나 잘 이해를 허용 할 수 있습니다 필요한 데이터를 제공 할 수 있습니다. 여러 철새 표현형은 설명 하였다. 세포는 중간 엽 또는 아메바 같은 운동이나 13 스트리밍 집단 이주 또는 셀을 표시 다세포 움직임으로 볼과 같은 단일 셀 형태로 마이그레이션 할 수 있습니다. 운동성 전지에 사용 운동의 방법은 쉽게 세포 배양 상처 봉합 분석을 이용하여 관찰 될 수있다.
세포의 이동을 연구하는 여러 가지 방법 중, 세포 상처 봉합 분석은 간단한 중 하나입니다. 이 방법은 전체 세포 덩어리의 이동 능력을 결정하는 데 유용합니다. 한 단계 더 촬영하면 이주 14시 개별 세포의 형태 학적 특징을 관찰 할 수 있습니다. 상처 봉합의 분석을 다음과 같은 여러 표현형은 공개 할 수있다. 컨트롤에 비교할 때 시간이 지남에 따라 폐쇄 된 거리를 측정하는 것은 특정 마이그레이션 변경 또는 이전에 알려지지 않은 장애인 철새 표현형을 보여줄 수 있습니다. 또한, 단일 세포 lamellipodium 형성, 꼬리 후퇴 및 방향 움직임은 관심 (14)의 세포에 손상 또는 향상 될 수 있습니다 무엇에 대한 단서를 제공 할 수 있습니다.
트랜스 웰 이주 및 침윤 분석법은 방향성 그들이 케모카인, 성장 인자, 지질, 또는 뉴클레오티드 4,5,8,15,16 여부 여러가지 항암 화학 유인 제에 응답하는 단일 세포의 능력을 분석하기 위해 사용될 수있다. 또한 인해 1,14 수용체의 과발현으로 차동 이동성 능력을 평가할 수있다. 이러한 분석은 또한 작은 GTPases 2 RHO 가족 같은 세포 이동의 주요 레귤레이터를 식별하고 특성화하기 위해 사용될 수있다. 액세서 쉽게이 짧고 다음sible 검사, 세포 이동의 모드와 3-D 행렬로 침입하는 세포의 능력이 또한 결정될 수있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
세포 이동은 암 연구에 연구하는 중요한 측면이며, 또한, 면역 발달 및 상처 치유의 연구에 적용될 수있다. 세포 배양은 폐쇄 분석 상처와 트랜스 웰의 세포 이동 및 침윤 분석 세포 이동성 행동의 자세한 정보를 공개하고 세포 이동 1,2,10,14의 분자 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 우리의 연구는 B16F10 흑색 종 세포주의 이동 속도 및 침윤 능력을 결정하기 위하여 이러한 세포 ?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors thank Mike Myles, Sam Saunders, and C.W. Elton at the ECU Multimedia & Technology Services for providing assistance in video production. We acknowledge the grant support from North Carolina Biotechnology Center, Golfers against Cancer, Brody Brothers Endowment Fund, American Heart Association, and ECU/Vidant Cancer Research and Education Fund (L.V.Y. and M.J.R.).
Materials
| Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Gibco | 11995-073 | |
| Fetal bovine serum (FBS) | Gemini | 100106 | |
| Bovine serum albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A4503-50G | |
| Trypsin EDTA 0.25% | Gibco | 25200-056 | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline (DPBS) | Gibco | 14190-250 | |
| Crystal violet | Sigma | C0775-100G | Dissolved in water at 0.2% |
| Cell disassociation buffer | Gibco | 13151-014 | |
| Cell culture incubator | Thermo Fisher Scientific | Model # 3145 | |
| SterilGARD biosafety hood | The Baker Company, Inc. | Model # VBM-600 | |
| EVOS Fl inverted microscope | Thermo Fisher Scientific | Model # AMF-4302-US | |
| Tissue culture plate | Becton Dickinson | 353046 | Catalog number varies depending on the type of culture plate |
| Corning Transwell insert | Fisher | 07-200-150 | Catalog number varies depending on the pore size of the membrane |
Referencias
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