성인 Zebrafish의의 측면 라인 재생을위한 분석
Summary
신경 및 비 신경 질환의 많은 지브라 피쉬의 모델 성어보다는 배아 / 유생으로 연구되어 있기 때문에, 우리는 성인 zebrafish의 질병 모델에 적용 할 수있는 양적 측면 라인 회생 분석법을 개발 하였다. 분석은 1) neuromast 2) 개별 머리 세포 수준의 해상도를하고있었습니다.
Abstract
때문에 사람의 청각과 균형 장애의 임상 적 중요성에, 같은 제브라 피쉬와 같은 모델 생물은 옆 선 개발과 재생을 연구하는 데 사용되었습니다. 제브라 피쉬는 그것의 빠른 개발 시간과 높은 재생 능력의 이러한 연구에 특히 매력적이다. 지금까지, 옆 선 중생의 제브라 피쉬의 연구는 주로하기 때문에이 단계에서 neuromasts의 낮은 숫자의 배아와 유생 단계의 물고기를 활용했다. 이 측선 재생 /과 또는 이전 개발 단계에서보다 쉽게 개발의 정량 분석을했다. 신경과 비 신경 질환의 많은 제브라 피쉬 모델은 어른 물고기가 아닌 배아 / 유충에서 공부하고 있기 때문에 분석이 가능했던, 그래서 우리는 현재에 적용 할 수있는 성인 제브라 피쉬의 양적 측면 라인 회생 분석 개발에 집중 성인 zebrafish의 질병 모델. 반 TRUM에 의해 이전의 연구에 구축P 등. 17 성인 멕시코 장님 동굴 물고기와 제브라 피쉬 (다니오 rerio)에있는 유모 세포의 제거를위한 절차를 기술 한, 우리의 분석은 제어 및 실험 그룹 사이의 정량적 인 비교를 할 수 있도록 설계되었습니다. 이것은 측선의 규정 된 영역에 모발 세포의 겐타 마이신 유도 된 괴사를 다음 24 시간 기간 동안 neuromast 재현의 퍼센트에 근거 회생 neuromast 표준 곡선을 개발함으로써 달성되었다. 분석은 또한 해상도의 높은 수준이 요구되는 개별 모발 세포 레벨의 분석을 확장 할 수 있도록 설계되었다.
Introduction
옆 선 (LL) 시스템은 청각, 균형, rheotaxis하고 학교와 포식자 회피 1-5으로 중재 행동에 대한 책임이 모두 물고기와 양서류에서 발견 mechanosensory 기관이다. 이는지지 세포에 의해 둘러싸여 유모 세포의 클러스터로 구성되며, 둘 모두는 neuromasts 6 불리는 구조에 배치된다. 이 neuromasts는 일반적으로 물고기의 머리에서 관찰 된 일부 수평 바늘 몸과 꼬리의 길이 방향 축을 따라 (바늘라고 함)의 수직 라인으로 구성되어 있습니다. 성인에서 neuromasts는 배아 또는 애벌레 물고기 6에 비해 바늘 내 번호 상당히 크다. 제브라 피쉬의 생물 의학 연구는 항생제 치료, 소음에 의한 외상, 만성 감염 등의 효과에 초점을 맞추고있다. 유모 세포에 시도에서 7,8 더 나은 인간에 미치는 영향을 이해합니다.
대부분의 척추 동물과는 달리, 테이러한 제브라 피쉬 (다니오 rerio) 등 leosts는 손실 유모 세포를 재생하는 기능이 있습니다. 제브라 피쉬 때문에 자신의 빠른 개발 시간과 높은 재생 능력으로 특히 유용하다. 그러나 현재; 옆 선 개발 및 / 또는 재생에 제브라 피쉬의 연구는 주로 쉽게 계산 및 분석 6,9,10 수 있습니다 옆 선 neuromasts의 감소 번호로 배아 및 애벌레 단계의 물고기를 활용했다.
그러나, 신경과 비 신경 질환 11-16의 많은 제브라 피쉬 모델은 어른 물고기가 아닌 유충에서 공부, 우리는 겐타 마이신을 사용하여 성인 제브라 피쉬의 옆 선 회생 분석 (이전에 zebrafish의 유충에 사용되는 아미노 글리코 사이드 개발에 초점을 맞추고 분석이 가능했던 있도록 최근에) 성인 물고기 (17)에 사용되는 현재의 성인 zebrafish의 질병 모델에 적용 할 수 있습니다. 이전에 반 트럼프 전자에 의해 절차를 발표하면서t AL. 17 성어 헤어 셀 절제를위한 조건을 확립, 그들은 제어와 같은 형질 전환 지브라 피쉬 라인 또는 약리학 적으로 유도 된 질병 상태를 사용할 때와 같은 실험 그룹 간의 정량적 비교를 위해 필요한 neuromast 재생을위한 표준 곡선을 확립하지 않았다 제브라 피쉬 18. 따라서 우리는 제어 및 실험 그룹을 비교할 때 같은 성인 zebrafish의 질병 모델과 마찬가지로 우리의 데이터를 사용할 수 수사관을 가능하게 neuromast 재생의 표준 곡선을 설정하는 머리 세포 제거에 대한 반 트럼프 등. 17의 절차를 따랐지만 자신의 작품에 구축 . 분석은 또한 해상도가 높은 레벨이 요구 될 때 개별 머리카락 세포로 분석의 확장을 허용하도록 설계되었다.
Protocol
Representative Results
Discussion
배아와 애벌레 zebrafish의 8,24,25의 옆 선 (LL) 중생의 분석을 위해 설립 된 문학의 광대 한 몸을 바탕으로, 우리의 연구의 목표는 제브라 피쉬의 옆 선 재생을위한 정량적 분석을 개발하는 것이라고 할 수 최고의 성인 물고기에서 공부하는 질병 모델에 적용 할 수. 우리는 성인 물고기 배아 / 애벌레 물고기를 위해 개발 절차를 적용 할 때 특정 중요한 포인트가 중요하다는 것을 발견했다. 이?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Gentamicin sulfate solution (50mg/ml) | Sigma Aldrich | G1397 | |
| 2 Phenoxyethanol | Sigma Aldrich | P1126 | |
| 4-4-diethylaminostryryl-N-methylpyridinium iodide (4-Di-2-Asp) | Aldrich | D-3418 | 485 nm excitation λ and 603 nm emission λ |
| in methanol | |||
| 6 well plates | Mid Sci | TP92006 | |
| Petri Dishes | Fisher Scientific | 08-757-13 | |
| Glass Bottom Microwell Dishes | Matek Corporation | P35G-1.5-14-C | |
| Sodium Chloride | Sigma Aldrich | S3014 | |
| Dissecting Microscope | Nikon | TMZ-1500 | Any dissecting microscope is fine. |
| Camera for Imaging | Nikon | Q imaging | Any camera is suitable. |
| Image J software | National Institutes of Health | NIH Image | |
| NIS Elements | Nikon | Any imaging software is suitable. | |
| Confocal microscope | Olympus | FV10i | Any high resolution fluorescent microscope is suitable |
| Aquatic System | KG Aquatics ZFS Rack System. | Any aquatic system can be used |
Referencias
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