Summary

تقنية المشتريات الكبد الخنازير وزرع مثلي باستخدام أحدث بورتو الأجوف التحويلة

Published: May 07, 2015
doi:

Summary

Experimental animal research plays a pivotal role in the development of clinical transplantation practice. The porcine orthotopic liver transplantation model (OLTx) closely resembles human conditions and is frequently used in clinically oriented research. The following protocol contains all information for a reliable porcine OLTx model using an active porto-caval-jugular shunt.

Abstract

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation waiting list die without receiving an organ transplant or are delisted due to disease progression. Even after a successful transplantation, rejection and side effects of immunosuppression remain major concerns for graft survival and patient morbidity.

Experimental animal research has been essential to the success of liver transplantation and still plays a pivotal role in the development of clinical transplantation practice. In particular, the porcine orthotopic liver transplantation model (OLTx) is optimal for clinically oriented research for its close resemblance to human size, anatomy, and physiology.

Decompression of intestinal congestion during the anhepatic phase of porcine OLTx is important to guarantee reliable animal survival. The use of an active porto-caval-jugular shunt achieves excellent intestinal decompression. The system can be used for short-term as well as long-term survival experiments. The following protocol contains all technical information for a stable and reproducible liver transplantation model in pigs including post-operative animal care.

Introduction

زراعة الكبد مثلي (OLTx) هو الخيار الوحيد لعلاج المرضى الذين يعانون من أمراض الكبد في نهاية المرحلة أو سرطان الكبد المتقدم. على مدى السنوات ال 25 الماضية، ازداد عدد المرشحين على قائمة الانتظار تدريجيا، والآن يفوق بكثير عدد الطعوم المتاحة. في معظم مناطق زراعة، 20-30٪ من المرضى على قائمة الانتظار لزرع الكبد يموتون دون تلقي زرع الأعضاء أو شطب بسبب تطور المرض. استراتيجيات لزيادة تجمع المانحين، وبالتالي، فإن عدد الطعوم المتاحة، يطلب من أمس. لا تزال المعايير بمد تخصيص الجهاز، والحفاظ على الكسب غير المشروع لفترات طويلة، وتحريض التحمل المناعي تمثل تحديات السريرية الرئيسية 1-3. وبالتالي، والبحوث OLTx التجريبي محوريا من أجل تحسين الممارسة السريرية OLTx.

الخنازير OLTx هو نموذج تجريبي راسخة يشبه OLTx الإنسان بطرق كثيرة منها لحجم إيفر، وعلم التشريح، علم وظائف الأعضاء و4-6. وهكذا، فقد أصبح المنهج التجريبي القياسية في المجالات البحثية مثل التقنيات الجراحية، علم وظائف الأعضاء، علم المناعة، والحفاظ على وإصابة نقص التروية ضخه. وقد وصفت العديد من التقنيات المشتريات الكسب غير المشروع، استئصال الكبد المتلقي، وعلى وجه الخصوص، وإعادة بناء الأوعية الدموية، في الأدب 5. اختيار التقنية المناسبة يختلف وفقا لتفضيل الباحث والقدرة التقنية.

وعلى النقيض من السيناريو البشري، واحتقان حشوي خلال المرحلة anhepatic يمثل مشكلة هامة في الخنازير OLTx. نقص تروية الأمعاء لاحق وتلف الأوعية الدموية يمكن أن يسبب عدم الاستقرار الاحتقاني الدورة الدموية الشديدة، مما يهدد بقاء خنزير، وبالتالي، فإن نجاح التجربة 7-9. وبالتالي، الضغط الأمعاء كافية إلزامي، خصوصا في إعدادات التجريبية المكرر أقل من الناحية الفنية.

لناجي نشط تحويلة بورتو الأجوف-حبل الوريد لمدة المرحلة anhepatic هو خيار يمكن الاعتماد عليها لتجنب الازدحام الأمعاء. ويمكن استخدام هذا النظام لإجراء التجارب ضخه في وقت مبكر، فضلا عن سيناريوهات البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل. بروتوكول التالية يحتوي على كافة المعلومات عن نموذج الكبد زرع مستقرة وقابلة للتكرار في الخنازير، بما في ذلك المشتريات الكبد المانحة، بما في ذلك عملية المتلقي استئصال الكبد وتقنيات إعادة بناء سفينة نهاية إلى نهاية، والرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية.

Protocol

جميع الحيوانات تلقت الرعاية الإنسانية في الامتثال مع '' مبادئ رعاية الحيوان المعملية '' التي وضعتها الجمعية الوطنية للأبحاث الطبية و'' دليل لرعاية الحيوانات المختبرية '' نشرت من قبل المعاهد الوطنية للصحة، أونتاريو، كندا . وافقت لجنة رعاية الحيوان من معهد بحوث تورونتو العام جميع الدراسات. 1. الجهاز استرجاع بيت الذكور يوركشاير الخنازير بين 30 و 35 كجم في منشأة بحثية ل1 قبل أسبوع من زرع لمنع رد الفعل الناجم عن الاجهاد البدني (والتي يمكن أن تغير النتيجة نضح في 10،11) وللتأقلم الحيوانات لظروف السكن. صيام خنزير مدة لا تقل عن 6 ساعات قبل التخدير. تخدير الخنزير المانحة عن طريق الحقن العضلي (IM) من خليط من الكيتامين (25 ملغ / كلغ)، الأتروبين (0.04 ملغ / كلغ)، وميدازولام (0.15 ملغ / كلغ). </li> قبل التنبيب، وضمان خنزير يتنفس من تلقاء أنفسهم 2 L الأكسجين مداوي مع 5٪ من الأيزوفلورين. في موقف ضعيف، رش الحبال الصوتية مع 2٪ ليدوكائين 2 دقيقة قبل التنبيب لتجنب تشنجات الحبال الصوتية. ل35 كجم خنزير، استخدم 6.5 الأب أنبوب القصبة الهوائية. منع أنبوب القصبة الهوائية مع 3-5 مل من هواء الغرفة. بعد التنبيب، استخدم capnometry لتأكيد التنبيب الصحيح. رصد معدل ضربات القلب وتشبع الأوكسجين من قبل oximetry نبض في ذيل الخنزير. خفض المرذاذ الأيزوفلورين إلى 2٪. ضبط عمق التخدير من الحد الأدنى من تركيز السنخية (MAC) القيم. تهدف ل2-2،5 MAC. تعيين جهاز التنفس الصناعي ل14-16 الأنفاس / دقيقة وحجم المد والجزر من 10-15 مل / كغم من وزن الجسم. وضع G عن طريق الوريد (IV) القسطرة 18 في واحدة من الأوردة الأذن للسماح ضخ اللاكتات حل رينغر (200 مل / ساعة). فرك الخنزير وتغطية ذلك مع الستائر العقيمة. بعد التأكد من ظروف معقمة، وجعل اتباعه خط الوسط البطنتزوج من قبل التمديد الجانبي الأيسر. استخدام منشفة لتغطية الأمعاء الكبيرة والصغيرة قبل نقلها إلى الجانب الأيسر. تقسيم الرباط المنجلي والرباط الثلاثي باستخدام الكي. الافراج عن الكبد من الحجاب الحاجز على الجانب الأيمن باستخدام الكي الكهربائي؛ استخدام مقص للجزء العلوي بين الأجوف والحجاب الحاجز. تشريح الأجوف infrahepatic وصولا الى فرع من الوريد الكظري على الجانب الأيمن والوريد الكلوي على الجانب الأيسر. فصل الأجوف infrahepatic والشريان الأبهر القاصي عن بعضها البعض. ligate فروع الشريان الأبهر في العمود الفقري. عزل والشرايين الكلوية خالية من الأنسجة الملتصقة. تحيط بكل الشريان الكلوي بالتعادل 2-0. الجمجمة إلى الوريد الكلوي الأيسر، تشريح الشريان الأورطي والشريان المساريقي. تحيط الشريان المساريقي بالتعادل 2-0. بعد فتح الجمجمة الصفاق إلى الشريان المساريقي، اتبع بعناية الشريان الأورطي نحو الجذع الاضطرابات الهضمية. تشريح الجذع الاضطرابات الهضمية caudally إلى بوابة هاءفي؛ تحيط الشرايين المعدة الطحال واليسار، اي فرع من الخلف قبالة الجذع الاضطرابات الهضمية. تشريح الجهاز الهضمي الجذع قبالة الوريد البابي. الافراج عن الوريد البابي التي كتبها شق البريتوني بين البنكرياس والوريد البابي. التعادل خارج الأوردة التي تنزح من البنكرياس إلى الوريد البابي. فصل القناة الصفراوية من الرباط الكبدي الإثناعشري وتقسيمه بشكل أقصى بعد ربط. Ligate الأوعية الليمفاوية في الرباط الكبدي الإثناعشري لمنع تسرب اللمفاوي. تقسيم الشريان معدي والشرايين المعدة الصحيحة بين العلاقات. Ligate الأوردة الصغيرة. تشريح الشريان الأورطي وراء الحجاب الحاجز بين الجذع القلب والاضطرابات الهضمية. وضع 2-0 التعادل في جميع أنحاء الجمجمة الشريان الأورطي إلى الجذع الاضطرابات الهضمية. إزالة المرارة ويكوي أي نزيف من السرير المرارة. فتح الحجاب الحاجز. إدارة 1000 وحدة دولية / كجم من وزن المانحة الهيبارين intracardially أو الرابع مجموعة الأيزوفلورين إلى 5٪ (> 2.5 MAC) من أجل تحقيقمستوى مخدر أعمق. للمتبرع بعد وفاة الدورة الدموية (DCD) نموذج، لحث السكتة القلبية عن طريق الحقن intracardial من 40 mval بوكل 3 دقائق بعد تناوله الهيبارين. تعيين السكتة القلبية كنقطة انطلاق لنقص التروية الدافئ. ربط قبالة تعيينها مسبقا العلاقات في جميع أنحاء الكلى، الطحال، المساريقي، والشرايين المعدية اليسرى. ربطة عنق من الشريان الأبهر بشكل أقصى بين الكلوية والحرقفي الشرايين ويقني؛ يدخل القنية الشريان الأورطي مع خط تدفق الجهاز. التعادل خارج الوريد البابي كما قريب ممكن ويقني؛ يدخل القنية مع خط تدفق جهاز آخر. بعد إغلاق التعادل قبل مجموعة حول الأبهر الداني، مسح الكبد مع 2 L من جامعة الباردة ويسكونسن (UW) الحل باستخدام نضح المزدوج عن طريق الشريان الأورطي (كيس الضغط) والوريد البابي (يحركها الجاذبية). استئصال الكبد، وترك جميع السفن المتبقية لفترة طويلة. ترك حافة حجابي السخية حول الأجوف فوق الكبد. وضع الكبد في حقيبة جهاز العقيمة على الجليد. خلال الجدول الخلفي اعداد، CLأمبير في الأجوف فوق الكبد باستخدام المشبك Satinsky ومسح الكبد مرة ثانية مع حوالي 0.5 L من حل UW retrogradely عن طريق الوريد الأجوف السفلي أدنى حتى تدفق الوريد البابي واضح. ربطة عنق من جميع فروع الشرايين في الشريان الأورطي البطني والجذع. إجراء ضغط التروية الشريانية الجدول مرة أخرى مع 0.5 L المتبقية من UW حل 12. مسح القناة الصفراوية باستخدام محلول UW. تقليم التصحيح البطني لحجم لائق. إغلاق كافة الأوردة الحجابية – عادة 3، 1 لكل اليسار واليمين، و1 الخلفي – باستخدام 4-0 غرز حيدة البولي بروبلين. إغلاق حقيبة الجهاز وتخزينها في الكبد على الجليد. 2. مستلم استئصال الكبد تخدير الخنازير المتلقي عن طريق الحقن بالعضل من خليط من الكيتامين (25 ملغ / كلغ)، الأتروبين (0.04 ملغ / كلغ)، وميدازولام (0.15 ملغ / كلغ). وضع الخنزير في موقف ضعيف على طاولة العمليات الجراحية على رأس حصيرة التدفئة. تغطية واي الخنازيرث بطانية المنتشرة الحرارة. قبل التنبيب، وضمان خنزير يتنفس من تلقاء أنفسهم 2 L الأكسجين مداوي مع 5٪ من الأيزوفلورين. رش الحبال الصوتية مع 2٪ ليدوكائين 2 دقيقة قبل التنبيب لتجنب تشنجات الحبال الصوتية. ل35 كجم خنزير، استخدم 6.5 الأب أنبوب القصبة الهوائية. منع أنبوب القصبة الهوائية مع 3-5 مل من هواء الغرفة. بعد التنبيب، استخدم capnometry لتأكيد التنبيب الصحيح. رصد معدل ضربات القلب وتشبع الأوكسجين من قبل oximetry نبض في ذيل الخنزير. مكان وإصلاح التحقيق في درجة الحرارة إلى خطم الخنزير. خفض المرذاذ الأيزوفلورين إلى 2٪ (تهدف ل2-2،5 MAC). تعيين جهاز التنفس الصناعي ل14-16 الأنفاس / دقيقة وحجم المد والجزر من 10-15 مل / كجم من وزن الجسم. استخدام مرهم على العينين لمنع جفاف بينما تحت التخدير. استخدام تقنية سيلدينغر 13 إلى إدراج محفز غمد (8.5 الاب) في الوريد الوداجي الخارجي الأيسر. استخدام هذا قسطرة في وقت لاحق لتجاوز بوابة الأجوف-الوداجي النشط. استخدام سيلدينغر التقنيهه لإدراج التغذية الوريدية (TPN) القسطرة (9.5 الأب) إلى الحق حبل الوريد الخارجي. تحت ظروف معقمة، تشريح الشريان السباتي الأيمن وادخال قسطرة البولي بروبلين (18 G) للالغازية مراقبة ضغط الشرياني. تحيط الشريان بالتعادل 2-0 الحرير للسماح ربط الطوارئ. رفض المرذاذ الأيزوفلورين إلى 1٪ (1،5-2 MAC) وإضافة البروبوفول (5-8 ملغ / كغ / ساعة د) للحفاظ على عمق التخدير. لتسكين الألم، استخدم المستمر ضخ الرابع من الفنتانيل سترات (الأكثر تفضيلا، 2 ميكروجرام / كجم / ساعة) أو الريميفنتانيل (الخيار الثاني، 15 ميكروغرام / كغ / ساعة). قبل شق الجلد، وإعطاء 1000 ملغ من سيفوروكسيم و 500 ملغ من ميترونيدازول د. انشاء مضخة التسريب باستخدام اللاكتات قارع الأجراس مع 5٪ جلوكوز في 150 مل / ساعة. وضع بطانية المنتشرة الحرارة على منطقة الرأس والرقبة. فرك الخنزير وتغطية ذلك مع الستائر العقيمة. تحت ظروف معقمة، وجعل البطن خط الوسط. إدراج ص البطنetractor للوصول كافية لالربع العلوي الأيمن. تقسيم الرباط المنجلي والرباط الثلاثي باستخدام الكي. في خطوات متعددة، وتقسيم الرباط الكبدي الإثناعشري على مقربة من الكبد بين العلاقات. تحديد وتقسيم، وبمناسبة فروع الشريان الكبدي والقناة الصفراوية. تشريح الشريان الكبدي إلى الوراء حتى تقسيم الشريان معدي. ضمان المشبك البلدغ يلتف حول المشترك الشريان الكبدي الأقرب إلى الشريان معدي للقط في وقت لاحق. تحرير الوريد البابي من الأنسجة الملتصقة. تعبئة الوريد الأجوف من خلف البريتوان على الجانب الأيمن باستخدام الكي الكهربائي. استخدام مقص للجزء العلوي بين الأجوف والحجاب الحاجز. تشريح الأجوف infrahepatic وصولا الى فرع من الوريد الكظري على الجانب الأيمن والوريد الكلوي على الجانب الأيسر. فضح نقير الطحال. في منتصف المسافة تقريبا على طول طول الطحال واضحة بعناية منو الشريان والوريد الطحال من طبقات البريتوني الالتزام. تحيط كل من الشريان والوريد الطحال مع 4 2-0 العلاقات الحرير. إدراج 8.5 الأب غمد محفز مع 2 ثقوب إضافية في طرف القسطرة لفي الوريد الطحال، مشيرا بشكل أقصى نحو الوريد البابي. إصلاح القسطرة بشكل أقصى للالإدراج مع واحدة من العلاقات 2-0 وإغلاق الداني الوريد إلى الإدراج مع 2-0 التعادل أخرى. ترك العلاقات 2 أخرى مفتوحة. سحب الدم من القسطرة، مسح هذا مع 10 مل من المياه المالحة، وإغلاق المشبك القسطرة. ملء المياه المالحة إلى تجاوز يتألف من رئيس الطرد المركزي مضخة، أنبوب الوداجي (16/03 ")، وتدفق من كل فرع المدخل (3/16") وفرع الأجوف (1/4 "، موصل لور قفل على الداني فتح). وضع المشبك أنابيب إلى نهاية القريبة من الأنبوب الأجوف. ربط المدخل وفتح الوداجي من تجاوز على حد سواء القسطرة غمد التعريف (الشكل 1) وختم connection مع عصابة المشبك خرطوم مياه معدنية. وضع رئيس مضخة الطرد المركزي في الموقف مضخة لها. تعطي 1000 ملغ من حمض الترانيكساميك و 10،000 وحدة دولية من الهيبارين 3 دقائق الرابع قبل عبر لقط. خفض معدل ضخ البروبوفول إلى 2 ملغ / كغ / ساعة في هذا الوقت من المرحلة anhepatic. ضبط تركيز الأيزوفلورين إلى الضغط الشرياني للتفاعل الخنزير. فتح المشابك كل من غمد القسطرة التعريف وعبر المشبك الوريد البابي. تأكد من أن الدم يمر عبر تجاوز سلبية. بدء تشغيل مضخة طرد مركزي في حوالي 1500 طلقة / دقيقة. تواصل عبر لقط إذا أ) الخنازير مستقر cardiovascularly وب) الالتفافية يعمل في حوالي 500 مل / دقيقة. إذا لم الخنزير يتسامح للتحامل الصليب، حجم البديل (بلورانيات أو الغروية) وكلاء مقويات التقلص العضلي (بافراز في بولي الصغيرة). عبر المشبك الوريد الأجوف infrahepatic فقط الجمجمة إلى الأوردة الكلوية باستخدام المشبك دي Bakey بيك. الضغط الثابت على TISS الكبدرق للضغط على جزء من الدم بقايا. عبر المشبك الوريد الأجوف فوق الكبد بما في ذلك حافة حجابي باستخدام المشبك Satinsky بينما يتراجع الكبد caudally. قطع الوريد الأجوف فوق الكبد مباشرة في حدودها إلى أنسجة الكبد. المقبل، وقطع الوريد البابي الكبدي بالقرب من نقير. حوالي 4 سم الجمجمة من المشبك infrahepatic الأجوف، وقطع حفرة في الجدار الأمامي من الوريد الأجوف. في هذه الحفرة، ضع رابط لفتح شرايين 'الأجوفية مع قفل لور تواجه الأمامية. تأمين الموصل في الأجوف infrahepatic مع 1-0 العلاقات الحرير. ثم افتح المشبك أنابيب فرع الأجوف من الالتفافية. وأخيرا، فتح الأجوف المشبك infrahepatic السماح لتجاوز الأجوف-حبل الوريد بالإضافة إلى تجاوز بورتو الوداجي القائمة. زيادة سرعة المضخة إلى حوالي 2500 طلقة / دقيقة مثل أن تدفق الالتفافية على الجانب الوداجي ما بين 900 – 1100 مل / دقيقة. استئصال الكبد في ج المتبقيةonnection الجمجمة إلى موصل تجاوز infrahepatic، وضمان أن العلاقات تأمين الاتصال الالتفافية لا قطع. وضع الالتفافية أنابيب بعناية لتجنب مجعد. إعطاء 500 ملغ من ميثيل تهيئة المناعة. 3. السفينة التعمير باستخدام 4-0 حيدة خيوط البولي بروبلين، أغلق كافة 3 الحجابي فوهات الوريد على الجانب المتلقي في فتحة الأجوف فوق الكبد و. غرزة 4-0 حيدة خيوط البولي بروبلين مزدوجة مسلحين داخل-خارج في كل ركن من أركان الأجوف فوق الكبد في الجانب المتلقي. إزالة كيس المزروع من مربع الجليد. فتح حقيبة الجهاز، وإزالة الكبد المانحة، ووضعه داخل تجويف البطن. لمفاغرة نهاية إلى نهاية الأجوف فوق الكبد، وتقليم المانحة الوريد الأجوف فوق الكبد لتناسب الجانب المتلقي. باستخدام الإبر الداخلية للغرز الزاوية الجانب المتلقي، القيام غرزة الزاوية من الداخل إلى الخارج على كل من الجانبين من suprahالأجوف المانحة epatic. التسديدة طرفي الخيط الصحيح معا. تقريب كلا ثغرات المتلقي والأجوف المانحة، ثم ربط كل من النهايات للخياطة اليسرى. أطلق النار على نهاية أقصر والقيام غرزة الخارجي من الداخل من الأجوف المتلقي الجدار الخلفي بجانب التعادل. دهس الجدار الخلفي، مشنفة مثالي الجدران الأجوف. إضافة 2-3 غرز الجدار الأمامي بنفس خياطة مرة واحدة وقد تم التوصل إلى الجانب الأيمن، ثم أطلقوا النار هذا الخيط النهاية. دهس الجدار الأمامي باستخدام خياطة المتبقية من الزاوية اليسرى. تعادل معا على حد سواء الغرز المستخدمة في الجزء الخلفي والجدران الأمامية. ربط الأخريين النهايات خياطة في الزاوية اليمنى. بعد التشذيب الوريد البابي المانحة إلى طول مناسب، إجراء الوريد البابي مفاغرة نهاية إلى نهاية بنفس الطريقة، وذلك باستخدام خيوط البولي بروبلين 6-0 حيدة. قبل أن ينهي مع الجدار الأمامي قريبا، أنبوبا لمعة من الأجوف infrahepatic مع خط دافق آخر وطرد الحل UW مع 1 لتر من المياه المالحةفي RT عن طريق الوريد cavaportal infrahepatic. استكمال مفاغرة وربط الخيوط الجراحية، وترك حوالي 0.5 سم من عامل النمو. وضع آخر دي Bakey- بيك المشبك على الأجوف infrahepatic المانحة. فتح الأجوف المشبك فوق الكبد والتحقق من وجود نزيف. ثم، reperfuse الكبد عن طريق فتح المشبك البوابة. استخدام 6-0 حيدة خيوط البولي بروبلين للغرز مرقئ. تقليل سرعة المضخة تجاوز إلى حوالي 1500 طلقة / دقيقة، وإغلاق المشبك البوابة غمد التعريف القسطرة. Reclamp الجانب المستفيد من الوريد الأجوف infrahepatic ووضع المشبك أنابيب على الجزء الأجوف من الالتفافية. إيقاف مضخة طرد مركزي. قطع العلاقات الموصل الأجوف وإزالته. عودة الدم المتبقي من الالتفافية الخنزير عن طريق القسطرة الوداجي. إغلاق المشبك للقسطرة الوريد وفصل الالتفافية. إعطاء 100 ملغ من كبريتات بروتامين استعداء الهيبارين. العناية الخاصة للبيديناميكا الدم ز خلال هذه الخطوات. استخدام الكاتيكولامين للحصول على الدعم والضغط بديلة بيكربونات الصوديوم لالحماض الأيضي. إجراء مفاغرة نهاية إلى نهاية الأجوف infrahepatic مرة أخرى بالطريقة المذكورة أعلاه، وذلك باستخدام خيوط 5-0 حيدة البولي بروبلين. Reperfuse السفلي الأجوف infrahepatic عن طريق الإفراج عن كل من المشابك. تقليم التصحيح أبهري حول الاضطرابات الهضمية جذع المتبرع. التعادل خارج الشريان معدي المتلقي بالقرب من الشريان الكبدي المشترك. وضع المشبك البلدغ على الشريان الكبدي مشترك قريب من تقاطع الشريان معدي. تقليم رقعة الشرايين الصغيرة مع مقص بوتس، وذلك باستخدام الأنسجة الوعائية حول تقاطع. تدفق الشريان الكبدي المانحة مع 10 مل من المياه المالحة heparinized ووضع بلدغ آخر المشبك مزيد بشكل أقصى لتجنب العودة النزيف. يفاغر ونهاية إلى نهاية الفتحات الشريانية في تقنية المظلة تشغيل، وذلك باستخدام 6-0 حيدة البولي بروبلين خياطة. Reperfuse من قبل مكتب مستشار رئيس الوزراء الأولنينغ القاصي وثم المشابك البلدغ القريبة. يفاغر في القناة الصفراوية نهاية إلى نهاية مع 2 6-0 خيوط حيدة البولي بروبلين باستخدام تقنية تشغيل المذكورة أعلاه. تأكد من أن أجزاء كبيرة من الأنسجة peribiliary مدرجة لأن القناة الصفراوية الخنازير لا يزال هشا للغاية والدموع بسهولة. بعد التحقق من الارقاء، وإزالة القسطرة غمد التعريف من الوريد الطحال. إغلاق الغايات القريبة والبعيدة مع الروابط 2 المتبقية. إغلاق جدار البطن مع حجم 1 حيدة خياطة للامتصاص. إغلاق الجلد إما مع دباسة الجلد أو أي تشغيل 2-0 خياطة. المرحلة 4. بعد العملية استخدام وسادة التدفئة وتعميم الحرارة بطانية للحفاظ على الحارة الخنازير. غازات الدم عينة ساعة. ضبط الجفاف عن طريق زيادة معدل الحقن في الوريد. فطم التخدير. تهوية الخنزير لمدة 2 ساعة أخرى. إزالة القسطرة غمد التعريف من حبل الوريد الأيسر هاءفي. اضغط بقوة لبضع دقائق لمنع النزيف. نفق القسطرة تحت الجلد TPN إلى جانب رقبة الخنزير. ثبته مع 2-0 الغرز. إزالة السطر الشرايين بعد 2 ساعة إذا كان الخنزير هو مستقر الدورة الدموية دون دعم الكاتيكولامين. تأكد من أن الجانب ثقب لا ينزف. خلاف ذلك، وجعل 6-0 محفظة سلسلة غرزة حول الثقب الشرياني دون إغلاق الشريان. إغلاق موقع شق. وقف التهوية بمجرد أن الخنزير هو قادرة على التنفس بشكل مستقل. فصل أنابيب التهوية من الأنبوب الرغامي. تحقق مرارا وتكرارا إذا الخنزير يتنفس بما فيه الكفاية. وضع خنزير في وضعية الرقود في ركلة جزاء حيوان واحد المقدمة مع مصباح التدفئة. ينزع الأنبوب مرة واحدة الخنزير غير قادرة على استيعاب ما يصل رأسه بشكل مستقل. لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه أنه كاف للحفاظ على الاستلقاء القصية. بيت الخنزير على حدة للفترة اللاحقة للعمليات الجراحية بأكملها. تزودألم الرابع كافية الدواء بعد العملية (على سبيل المثال، البوبرينورفين 0،01-0،05 ملغ / كغ كل 6 ساعات). إذا لا يشرب الخنزير بشكل مستقل، بديلا كافيا المجلد الرابع تواصل ميثيل كما كبت المناعة (250 ملغ يوميا بعد العمليات الجراحية (POD) 1 الصباح، ثم 125 ملغ كل صباح). بدء السيفالوسبورين 2 ملغ / كغ بو مرتين في اليوم من POD2 جرا. إدارة 500 ملغ من ميترونيدازول و 1،000 ملغ من cefazoline مرتين يوميا، فضلا عن 20 ملغ من بانتوبرازول مرة واحدة يوميا حتى POD3. رصد الخنازير عن كثب. لا تتردد في التضحية أنه إذا كان يظهر علامات على معاناة (على سبيل المثال، الخمول، والدم للدوران للشرب، والحماض مستمر أو نقص السكر في الدم، أو علامات نزف أو التهاب الصفاق). للقتل الرحيم، يستنزف الخنزير تحت التخدير العميق الأيزوفلورين (5٪،> 2.5 MAC) عن طريق قطع الوريد فوق الكبد.

Representative Results

في الدراسة الأولى زرع، وهذا نموذج المانحين القلب النابض (HBD، ن = 5) وبالمقارنة مع نموذج DCD (ن = 10) تتعرض ل45 دقيقة من نقص التروية الدافئ في الموقع. في كلا المجموعتين، والحفاظ على الطعوم على الجليد لمدة 10 ساعة بعد الشراء. في المجموعة HBD، نجا 100٪ من الخنازير المتلقي حتى نهاية المتابعة في يوم 5 بعد الزرع. في المجموعة DCD، 50٪ فقط من الخنازير المتلقي على قيد الحياة لمدة 5 أيام بسبب قضايا تجلط الدم أو المعاوضة التمثيل الغذائي، نتيجة لانخفاض وظائف الكبد بعد الجراحة. وقد تم جمع جميع عينات الدم من القسطرة الوريدية المركزية. بعد الطرد المركزي، تم الحصول على عينات من مصل الدم وتحليلها لإصابة الخلايا الكبدية (ناقلة أمين الأسبارتات، AST)، وظيفة الصفراوية (البيليروبين الكلي والفوسفاتيز القلوية)، وظائف الكبد (INR). يظهر بالطبع الوقت من كل علامة في أرقام 2-5. <p class="jove_content" وصلت إلى مستويات> AST ذروتها بعد 24 ساعة (1414 ± 538 U / L في المجموعة HBD و2296 ± 1313 U / L في المجموعة DCD، ص = 0.13)، وعادت إلى القيم الطبيعية تقريبا بعد 5 أيام. وبالمثل، فقد ارتفع بشكل ملحوظ القيم الفوسفاتيز القلوية بعد 36 ساعة في المجموعة DCD (224 ± 111 U / L) بالمقارنة مع مجموعة HBD (162 ± 54 U / L، P = 0.27). في حين بلغ مجموع البيليروبين مستقر في المجموعة HBD (≤ 10 ميكرومول / L طوال)، فقد ارتفع تدريجيا في المجموعة DCD حتى يوم 5 (23 ± 31 ميكرومول / L، P = 0.43). الانحراف المعياري كبير في قيم البيليروبين في المجموعة DCD يظهر التجانس إصابة المرارية غريبة في هذه المجموعة. أظهر INR كعلامة من وظائف الكبد اتجاها مماثلا للقيم AST. بلغت ذروتها القيم في 24 ساعة وأعيدت إلى القيم الطبيعية تقريبا بعد 5 أيام. وكان الفريق HBD انخفاض قيم وبلغت ذروتها في 1.47 ± 0.34 بالمقارنة مع المجموعة DCD (1.70 ± 0.36 الذروة، ص = 0.32). <p class="jove_content" fo:keep-together. في غضون صفحة = "دائما"> الشكل 1. مخطط تحويلة بورتو الأجوف-الوداجي. وتجاوز مليء حل أفرز اللبن قارع الأجراس. ثم فرضت الجزء الأجوف مع المشبك الأنابيب، وترتبط الأجزاء الوداجي والطحال إلى القسطرة محددة مسبقا، يتم فتح الالتفافية، ويتم تشغيل مضخة طرد مركزي بعد لقط الوريدي البابي. بعد استئصال الكبد، يتم إدخال الجزء الأجوف من الالتفافية وتأمينها في infrahepatic الوريد الأجوف جدعة، الجمجمة إلى الأوردة الكلوية. يتم تحريرها المشبك أنابيب للسماح الضغط الأجوف، بالإضافة إلى الضغط البوابة. الشكل 2. الأسبارتات الألانين (AST) (HBD ن = 5، DCD ن = 10). AST هو علامة الحساسة الإصابة الكبدية. من الخلف الذروةإيه 24 ساعة أقل في HBD من في المجموعة DCD، مما يشير إلى إصابة ضخه أقل الكبدية. الانحراف المعياري أصغر يظهر نتائج أكثر تجانسا في المجموعة HBD. الشكل 3. مجموع البيليروبين (HBD ن = 5، DCD ن = 10). مجموع البيليروبين، كعلامة إزالة المرارة والصفراء سلامة لاصق، يظهر اتجاها مستقرا ومتجانسا مع القيم أقل من 10 ميكرومول / L في المجموعة HBD. منحنى البيليروبين في المجموعة DCD يزيد تدريجيا مع مرور الوقت ويظهر الانحراف المعياري عالية، مما يشير إلى إصابة المرارية في جزء فقط من المجموعة التجريبية. الرقم 4. الفوسفاتيز القلوية (HBD ن = 5، DCD ن = 10). الفوسفاتيز القلوية طق مؤشرا على الإصابة الصفراوية. القيم لمجموعة HBD أقل من ذلك من مجموعة DCD، وهو ما يعني أقل إصابة الصفراوية. الرقم 5. INR (HBD ن = 5، DCD ن = 10). قيمة INR عالية تشير إلى وظيفة الخلايا الكبدية تقلص بسبب انخفاض الإفراج عن عوامل التخثر. في كل HBD وDCD مجموعات، قيم INR العودة إلى القيم الطبيعية بعد 5 أيام زرع، مما يشير إلى استعادة وظيفة الكبد. ويبدو أن القيم لمجموعة HBD أقل.

Discussion

التجريبية الخنازير OLTx هو إجراء صعبة لإعداد البحوث دون موارد الرعاية المركزة لسيناريو السريري. وتشمل المضاعفات المحتملة عدم الاستقرار الدورة الدموية، ونزيف، نقص تروية الأعضاء، انخفاض حرارة الجسم، والتمثيل الغذائي، وكذلك الجهاز التنفسي والمعاوضة. لأي مجموعة الأبحاث والتدريب الإجرائي كافية من تقنية جراحية 5 وكذلك 14،15 التخدير خنزير إلزامي من أجل تحقيق نتائج تمثيلية وقابلة للتكرار.

وقد وصفت العديد من الخفايا الفنية في الأدب، وخاصة فيما يتعلق مرحلة إعادة الإعمار الأوعية الدموية 5. بروتوكول OLTx المذكورة أعلاه يوفر المعلومات المطلوبة للحصول على نموذج استبدال الأجوف تشبه OLTx الإنسان. النتائج المقدمة تثبت بقاء الحيوان موثوق بها والانتعاش الكسب غير المشروع في كل من HBD وDCD النماذج. بروتوكول ينطبق في سيناريوهات البقاء على قيد الحياة على المدى القصير المستخدمة في الكسب غير المشروع ضخه بةriments، على سبيل المثال، وكذلك في نماذج البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل مثل دراسات التسامح.

واحد عقبة كبيرة من الخنازير OLTx هو التسامح فقيرة نسبيا من الأجوف والوريد البابي عبر لقط. الازدحام حشوي خلال المرحلة anhepatic يسبب ارتفاع ضغط الدم الوريدي وأذية الأوعية الدموية يمكن أن يؤدي إلى نقص تروية الأمعاء كبير وعدم الاستقرار الدورة الدموية إلى وجهة صدمة لا رجعة فيه حتى بعد الجهاز ضخه 7. منذ الوريد الأجوف هو جزء لا يتجزأ تماما في حمة الكبد، وهو إجراء أصبع ظهر الحفاظ الأجوف ليس ممكنا. الانسداد الكلي للالوريد الأجوف خلال مرحلة إعادة الإعمار الأجوف يضعف استقرار الدورة الدموية من الخنزير. على الرغم من أن تظهر بعض التقارير أن الخنازير OLTx يمكن إنجازه خلال مجموع الأجوف والوريد البابي انسداد أقل من 25 دقيقة 16،17، وهي تقنية تجاوز بورتو الأجوف-الوداجي في هذا الوقت من إعادة بناء الأوعية الدموية هي خيار أكثر أمانا وأكثر عملية 7- 9،18. في التجربة الكتاب الإلكتروني "، وهي السلبي بورتو الوداجي الالتفافية ليس الأمثل للحفاظ على الدورة الدموية الخنازير مستقرة خلال المرحلة anhepatic. نموذج الالتفافية، بما في ذلك الضغط الفعال على حد سواء الأجوف infrahepatic والوريد البابي، ويسمح في مرحلة إعادة الإعمار هادئة من anastomoses الأجوف والمداخل فوق الكبد حتى مع طول المدة لقط بسبب مضاعفات غير متوقعة. وخلافا لتقارير سابقة وهو استئصال الطحال ليس إلزاميا عند إزالة القسطرة البوابة الالتفافية. كل من الشريان والوريد الطحال مغلقة في منتصف المسافة تقريبا على طول طول الطحال وترك النصف الداني perfused لبالقدر الكافي. المضاعفات مثل النزيف أو انسداد الهواء بسبب تجاوز انقطاع يمكن تجنبها عن طريق ضمان أن يتم وضع الالتفافية بعناية وتأمينها بشكل صحيح.

في البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل OLTx التجارب، ويعتبر مفاغرة القناة الصفراوية نقطة ضعف بسبب ارتفاع نسبة المضاعفات في 19. الأنسجة الصفراوية هي هشة للغاية وشمال شرقرعاية خاصة محرران عندما يجري التعامل معها. وقد وصفت العديد من التقنيات المختلفة مفاغرة 5،19. ومفاغرة نهاية إلى نهاية سهلة من الناحية الفنية والمرتبطة مع الحد الأدنى من مضاعفات 19. A خياطة مستمرة مع إبرة عدم القطع، بما في ذلك قطاعات كبيرة من النسيج الضام peribiliary يبدو أن تتفوق على لخياطة توقف. يتم وضع القناة الصفراوية تحت توتر غير ضروري عندما يتم معقود غرز واحدة من خياطة توقف. وهذا قد يؤدي في البكاء الأنسجة وتسرب الصفراء متتالية. المواد خياطة – امتصاص أو غير قابل للامتصاص – هي عادة ليست مهمة، نظرا لبقائه محدود حتى يتم إنهاء الخنزير. لنماذج البقاء على قيد الحياة على المدى الطويل على مدى عدة أشهر، الغرز للامتصاص – كما هو الحال في OLTx الإنسان – هي الأفضل.

يجب توخي الحذر محددة مع ما بعد الجراحة المتابعة. التغذية الكافية وإمدادات السوائل، وبروتوكول تخفيف الآلام موثوق بها، وكبت المناعة السليمنظام إلزامية. لإجراء التجارب على المدى الطويل، يظهر المناعة أهمية خاصة. بالمقارنة مع الثدييات الأخرى، تظهر الخنازير لانخفاض مفاجئ نسبة الرفض المناعي بعد OLTx 20،21. تسلل خلية المستديرة القصوى خلال الأسبوع الثاني بعد الزرع وتقلل من تلقاء أنفسهم حتى من دون كبت المناعة. رفض نادرا ما يكون سبب الوفاة بعد الخنازير OLTx 22. ولكن، حتى مع بروتوكول المناعة تنطوي إدارة المنشطات الرابع ومثبطات الكالسينيورين بو المذكورة هنا، يشار إلى رفض الكسب غير المشروع عن طريق زيادة معتدلة من الترانساميناسات ابتداء من الساعة حوالي 4 أيام بعد OLTx وأكدته واضح الحقل بوابة تسلل خلية وإيابا. يمكن إعطاء مثبطات الكالسينيورين إما ص 23،24 أو 25،26 د. كلتا الطريقتين لها عيوب. حتى مع المساعدات التطبيق عن طريق الفم، والمبلغ الفعلي الوصول إلى القناة الهضمية لا يزال بعيد المنال. من ناحية أخرى، ضخ الرابع المستمر فيالقلم خنزير مع حيوان نشط أمر صعب. وبالتالي، يجب إجراء تطبيق الرابع باعتباره البلعة، مما يؤدي إلى قمم تركيز الدواء عالية جنبا إلى جنب مع الآثار السامة المحتملة. ومع ذلك، يبدو أن كلا طرق التطبيق للسماح للبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل.

على غرار عملية إعداد سريرية، فمن المستحسن بعد العمليات الجراحية قرحة الضغط الوقاية. النزيف بعد العمليات الجراحية من القرحة الهضمية هي مشكلة متكررة ويمكن أن تكون ذات صلة إلى وظائف الكبد ضعاف 27. بعد عدد قليل من حالات نزيف الجهاز الهضمي في كلا المجموعتين OLTx، بدأت المؤلفين الوقاية منتظمة مع بانتوبرازول ولم تشهد أي نزيف الجهاز الهضمي منذ ذلك الحين.

صيانة صارمة من ظروف معقمة اثناء العمليات القيصرية، مقارنة مع الظروف في غرفة العمليات السريرية، والعلاج الوقائي للمضادات الحيوية يترتب على ذلك، ويقلل من خطر حدوث مضاعفات معدية.

في الختام، هذه المادة صrovides المعلومات العملية لوضع برنامج OLTx الخنازير في إعداد البحوث. التفاني كافية، والممارسة، والعمل الجماعي مهم من أجل تقليل فترة التعلم، وتحقيق نتائج يمكن الاعتماد عليها، والحد من التكاليف وعدد من حيوانات التجارب.

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The study was supported by research grants from the Roche Organ Transplant Research Foundation (ROTRF) and Astellas. Markus Selzner was supported by an ASTS Career Development Award. Matthias Knaak was supported by the Astellas Research Scholarship. We thank Uwe Mummenhoff and the Birmingham family for their generous support.

Materials

Atropine Sulphate 15mg/30mL Rafter 8 Products 238481
Buprenorphine 0.3mg/mL RB Pharmaceuticals LDT N/A
Cefazolin 1g Pharmaceutical Partners of Canada Inc. 2237138
Cyclosporin Oral Solution 5000mg/50mL Novartis Pharmaceuticals Canada Inc. 2150697
Fentanyl Citrate 0.25mg/5mL Sandoz Canada Inc. 2240434
Heparin 10,000iU/10mL Leo Pharma A/S 453811
Isoflurane 99.9%, 250mL Pharmaceutical Partners of Canada Inc. 2231929
Ketamine Hydrochloride  5000mg/50mL Bimeda-MTC Animal Health Inc. 612316
Lactated Ringer’s + 5% Dextrose, 0.5L Baxter Corporation 61131
Lacteted Ringer’s, 1L Baxter Corporation 61085
Metronidazole 500mg/100mL Baxter Corporation 870420
Midazolame 50mg/10mL Pharmaceutical Partners of Canada Inc. 2242905
Pantoprazole 40mg Sandoz Canada Inc. 2306727
Potassium Chloride 40mEq/20mL Hospira Healthcare Corporation 37869
Propofol 1000mg/100mL Pharmascience Inc. 2244379
Protamine Sulfate 50mg/5mL Pharmaceutical Partners of Canada Inc. 2139537
Saline 0.9%, 1L Baxter Corporation 60208
Sodium Bicarbonate 50 mEq/50mL Hospira Healthcare Corporation 261998
Solu-Medrol 500mg Pfizer Canada Inc. 2367963
Tranexamic Acid 1000mg/10mL Pfizer Canada Inc. 2064413
University of Wisconsin Solution, SPS-1 Organ Recovery Systms SPS-1
Xylocaine Endotracheal 10mg/50mL AstraZeneca 2003767
Appose ULC 35W skin stapler Covidien Canada 803712
Maxon, 1 Covidien Canada 606173
Sofsilk, 0 Covidien Canada S606
Sofsilk, 2-0 Covidien Canada S405
Sofsilk, 3-0 Covidien Canada S404
Surgipro II, 4-0 Covidien Canada VP581X
Surgipro II, 5-0 Covidien Canada VP725X
Surgipro II, 6-0 Covidien Canada VP733X
Catheter i.v, 18 G BD Canada 381147
Cook TPN catheter, 9.5Fr Cook Medical Company C-TPNS-9.5-90
PSI Kit for sheath catheter, 8.5Fr Arrow International ASK-09803-UHN
Infusion Pump Line Smith Medical ASD Inc. 21-0442-25
Liver Admin Set (flush line) CardioMed Supplies Inc 17175
Mallinckrodt, Tracheal Tube, 6.5mm Covidien Canada 86449
Med-Rx Suction Connecting Tube Benlan Inc. 70-8120
Organ Bag CardioMed Supplies Inc 2990
Suction Tip Tyco Healthcare Group LP 8888501023
Valleylab, Cautery Pencil Covidien Canada E2515H
Valleylab, Patient Return Electrode Covidien Canada E7507
Bypass Connector 3/8” x 1/4“ Raumedic AG 955083-001
Bypass Connector 3/8” x 3/8” Luer Lock Raumedic AG 955163-001
Bypass Connector Y 3/8” x 3/8” x 1/4” Raumedic AG 961360-002
Bypass Tubing 1/4” x 1/16” Raumedic AG 039505-010
Bypass Tubing 3/8” x 3/32” Raumedic AG 039535-005
Rotaflow Cenrtifugal Pump Maquet-Dynamed HC 2821
Stainless Steel Hose Clamp Ring, 5mm Oetiker 16700007
Abdominal Retractor Medite GmbH N/A
De Bakey – Beck, Infrahepatic Cava Clamp Aesculap Inc. FB519R
Diethrich, Atraumaitc Clamp (Portal Vein) Aesculap Inc. FB525R
Gregory Bull Dog Clamp, curved Aesculap Inc. FB382R
Gregory Bull Dog Clamp, straight Aesculap Inc. FB381R
Potts – De Martel, Scissors Aesculap Inc. BC648R
Satinsky, Suprahepatic Cava Clamp Aesculap Inc. FB605R
Symetrical Tubing Clamp Codman Instruments 198010
Anesthesia Machine, Optimax Moduflex Anesthesia Equipment SN5180
Bypass Flow meter, HT 110 Transonic Systems Inc. HT110B11106
Flow meter probe, H6XL Transonic Systems Inc. H6Xl689
Heat Therapy Pump, T/Pump Gaymar Industries Inc TP500-G89D19
Infusion Pump 3000 SIMS Graseby LTD. SN300050447
Isoflurane Vapor 19.1 Draeger Medical Canada Inc. N/A
Monitor, Datex AS 3 Instrumentarium Corp./ Hitachi D-VHC14-23-02
Rotaflow Centrifugal Drive Unit Marquet-Dynamed 952301
Rotaflow Console Marquet-Dynamed 706035
Temperature Therapy Pad Gaymar Industries Inc TP26E
Valleylab Force Tx Valleylab Inc. 216151480
Ventilator, AV 800 DRE Medical Equipment 40800AVV
Warm Touch, Patient Warming System Nellcor/ Covidien Canada 5015300A

Referencias

  1. Mehrabi, A., Fonouni, H., Muller, S. A., Schmidt, J. Current concepts in transplant surgery: liver transplantation today. Langenbecks Arch. Surg. 393 (3), 245-260 (2008).
  2. Qiu, J., Ozawa, M., Terasaki, P. I. Liver transplantation in the United States. Clin. Transpl. , 17-28 (2005).
  3. Chalstrey, L. J. Technique of orthotopic liver transplantation in the pig. Br. J. Surg. 58 (3), 585-588 (1971).
  4. Esmaeilzadeh, M. Technical guidelines for porcine liver allo-transplantation: a review of literature. Ann. Transplant. 17 (2), 101-110 (2012).
  5. Calne, R. Y. Observations of orthotopic liver transplantation in the pig. Br. Med. J. 2 (5550), 478-480 (1967).
  6. Memsic, L., Quinones-Baldrich, W., Kaufman, R., Rasool, I., Busuttil, R. W. A comparison of porcine orthotopic liver transplantation using a venous-venous bypass with and without a nonpulsatile perfusion pump. J. Surg. Res. 41, 33-40 (1986).
  7. Torres, O. J. Hemodynamic alterations during orthotopic liver experimental transplantation in pigs. Acta. Cir. Bras. 23 (2), 135-139 (2008).
  8. Battersby, C., Hickman, R., Saunders, S. J., Terblanche, J. Liver function in the pig. 1. The effects of 30 minutes’ normothermic ischaemia. Br. J. Surg. 61 (1), 27-32 (1974).
  9. Smith, A. C., Swindle, M. M. Preparation of swine for the laboratory. Ilar. J. 47 (4), 358-363 (2006).
  10. Swindle, M. M., Smith, A. C. Best practices for performing experimental surgery in swine. J. Invest. Surg. 26 (2), 63-71 (2013).
  11. Moench, C., Moench, K., Lohse, A. W., Thies, J., Otto, G. Prevention of ischemic-type biliary lesions by arterial back-table pressure perfusion. Liver Transpl. 9 (3), 285-289 (2003).
  12. Koski, E. M., Suhonen, M., Mattila, M. A. Ultrasound-facilitated central venous cannulation. Crit. Care Med. 20 (3), 424-426 (1992).
  13. Lange, J. J., Hoitsma, H. F., Meijer, S. Anaesthetic management in experimental orthotopic liver transplantation in the pig. Eur. Surg. Res. 16 (6), 360-365 (1984).
  14. Kaiser, G. M., Heuer, M. M., Fruhauf, N. R., Kuhne, C. A., Broelsch, C. E. General handling and anesthesia for experimental surgery in pigs. J. Surg. Res. 130 (1), 73-79 (2006).
  15. Heuer, M. Liver transplantation in swine without venovenous bypass. Eur. Surg. Res. 45 (1), 20-25 (2010).
  16. Gruttadauria, S. Porcine orthotopic liver autotransplantation: facilitated technique. J. Invest. Surg. 14 (2), 79-82 (2001).
  17. Falcini, F. Veno-venous bypass in experimental liver transplantation: portal-jugular versus caval-portal-jugular. G. Chir. 11 (4), 206-210 (1990).
  18. Filipponi, F., Benassai, C., Falcini, F., Martini, E., Cataliotti, L. Biliary tract complications in orthotopic liver transplantation: an experimental study in the pig. Ital. J. Surg. Sci. 19 (2), 131-136 (1989).
  19. Terblanche, J. Orthotopic liver homotransplantation: an experimental study in the unmodified pig. S. Afr. Med. J. 42 (20), 486-497 (1968).
  20. Calne, R. Y. Prolonged survival of liver transplants in the pig. Br. Med. J. 4 (5580), 645-648 (1967).
  21. Battersby, C., Egerton, W. S., Balderson, G., Kerr, J. F., Burnett, W. Another look at rejection in pig liver homografts. Surgery. 76 (4), 617-623 (1974).
  22. Net, M. The effect of normothermic recirculation is mediated by ischemic preconditioning in NHBD liver transplantation. Am. J. Transplant. 5 (10), 2385-2392 (2005).
  23. Guarrera, J. V. Hypothermic machine perfusion of liver grafts for transplantation: technical development in human discard and miniature swine models. Transplant Proc. 37 (1), 323-325 (2005).
  24. Minor, T. Hypothermic reconditioning by gaseous oxygen improves survival after liver transplantation in the pig. Am. J. Transplant. 11 (12), 2627-2634 (2011).
  25. Kelly, D. M. Porcine partial liver transplantation: a novel model of the ‘small-for-size’ liver graft. Liver Transpl. 10 (2), 253-263 (2004).
  26. Meijer, S., Hoitsma, H. F., Visser, J. J., de Lange, J. J. Long term survival following orthotopic liver transplantation in pigs; with special reference to gastric ulcer complications. Neth. J. Surg. 36 (6), 168-171 (1984).

Play Video

Citar este artículo
Spetzler, V. N., Goldaracena, N., Knaak, J. M., Louis, K. S., Selzner, N., Selzner, M. Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt. J. Vis. Exp. (99), e52055, doi:10.3791/52055 (2015).

View Video