В Vivo и экс Vivo подходы к изучению рака яичников метастатического колонизации Млечного Местная структур в брюшной жировой
Summary
We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Abstract
Высококачественная серозный рак яичников (HGSC), причиной распространенных перитонеального метастазов, по-прежнему имеет чрезвычайно плохой прогноз; меньше, чем 30% женщин живы через 5 лет после постановки диагноза. Сальник является предпочтительным местом формирования HGSC метастазов. Несмотря на клиническое значение этого микросреды, вклад сальника жировой ткани яичников прогрессии рака остается недостаточно изученной. Сальника жировой необычна тем, что она содержит структуры, известные как белесые пятна, которые состоят из B, T, и NK-клеток, макрофагов и клеток-предшественников, окружающих плотные гнезда сосудов. Белесые пятна играют ключевую роль в физиологических функций сальника, которые необходимы для перитонеального гомеостаза. Мы показали, что белесые пятна также способствовать рака яичников метастатического колонизации перитонеального жировой, ключевой шаг в развитии перитонеальных метастазов. Здесь мы опишем подходы мы разработали, чтобы оценить и количественно белесые пятна в заitoneal жировой и изучать их функциональное вклад в яичников клеток рака метастатического колонизации сальника тканей и в естественных условиях и экс естественных условиях. Эти подходы к обобщению дополнительные модели мыши и клеточные линии, что позволяет изучение формирования метастазов рака яичников от первоначального локализации клеток в молочных местная структур к развитию распространенных перитонеального метастазов.
Introduction
В отличие от большинства солидных опухолей, метастазов из высококачественной серозного рака яичников (HGSC) ограничены в брюшную полость 1. Таким образом, эффективные методы лечения перитонеального потенциально может контролировать или искоренить HGSC. В настоящее время стандарт терапевтический подход хирургического циторедукции в комбинации с химиотерапией 1-3. К сожалению, подавляющее большинство пациентов испытывают и поддаваться осложнений рецидива заболевания. Эти мрачные статистические данные показывают, необходимость в улучшении понимания метастатического колонизации, процесс, посредством которого раковые клетки локализуются в, использовать и размножаться в тканях хозяина, чтобы сформировать метастазы 2.
Сальник является предпочтительным рано сайт HGSC метастазов 4-7. В отличие от других перитонеального жировой, сальниковой жировой ткани содержит необычные иммунные структуры, известные как белесые пятна, которые содержат B, T, и NK-клеток и макрофагов, которые играют ключевую роль в перитонеальных homeosТАСИС 8,9. В дополнение к их физиологических функций, мы обнаружили, что белесые пятна играют активную роль в метастатическим раком яичников колонизации 4. В экспериментальных метастазов анализов, SKOV3ip.1, CaOV3 и HeyA8 (человека) и ID8 (мышиного; C57BL / 6) клеток рака яичников быстро домой, чтобы белесые пятна, предполагая, что клетки движутся к секретируемого хемотаксиса фактора. Интересно, что раковые клетки не заселяют перитонеальный жировой хватает белесые пятна (то есть, гонадных и матки жир) 4.
Для того, чтобы определить механизмы, регулирующие молочный пятна колонизации, мы оптимизировали модели ксенотрансплантатов, которые позволяют допрос клеточных и молекулярных событий в течение времени, конечно метастатического колонизации 4. Конкретный преимущество подходов, описанных в настоящем документе, его акцент на архитектуре и функции тканей, что позволяет пользователям проверять гипотезы в полностью интегрирована в естественных условиях и бывших естественных модели мetastatic колонизация 4,10. Сравнивая локализации раковых клеток и рост в перитонеальных жировых депо, которые либо содержат или отсутствие белесые пятна, исследователи могут проверить относительный вклад (ы) адипоцитов и клеток в молочных пятен на жилье и прогрессивного роста клеток рака яичников в физиологически соответствующих тканей.
Protocol
Representative Results
Discussion
Разработка терапии для целевой ячейки, распространяемых требует механическое понимание метастатического колонизации, критический первый шаг в развитии перитонеального болезни. Для решения этих проблем мы фиксировали подходы, которые могут быть использованы для различить,…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Materials
| Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
| Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
| 5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
| DMEM | Corning | 10-013-CV | |
| Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
| PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
| 26 gauge needle | BD | 329652 | |
| BSA | Sigma | A7906 | |
| Collagenase | Worthington | LS004196 | |
| Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
| Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
| ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
| Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
| Cell-Tak | BD | 354240 |
Referencias
- Bast, R. C., Hennessy, B., Mills, G. B. The biology of ovarian cancer: new opportunities for translation. Nature Reviews Cancer. 9 (6), 415-428 (2009).
- Bowtell, D. D. L. The genesis and evolution of high-grade serous ovarian cancer. Nature Reviews Cancer. 10 (11), 803-808 (2010).
- Colgan, T. J., Chang, M. C. Chapter 18 Familial Cancer and Prophylactic Surgery. Diagnostic Pathology of Ovarian Tumors. , 277-288 (2011).
- Clark, R., et al. Milky Spots Promote Ovarian Cancer Metastatic Colonization of Peritoneal Adipose in Experimental Models. The American Journal of Pathology. 183 (2), 576-591 (2013).
- Platell, C., Cooper, D., Papadimitriou, J. M., Hall, J. C. The omentum. World Journal Of Gastroenterology: WJG. 6 (2), 169-176 (2000).
- Hagiwara, A., et al. Milky spots as the implantation site for malignant cells in peritoneal dissemination in mice. Investigación sobre el cáncer. 53 (3), 687-692 (1993).
- Gerber, S. A., et al. Preferential Attachment of Peritoneal Tumor Metastases to Omental Immune Aggregates and Possible Role of a Unique Vascular Microenvironment in Metastatic Survival and Growth. The American Journal of Pathology. 169 (5), 1739-1752 (2010).
- Liebermann-Meffert, D. The greater omentum. Anatomy, embryology, and surgical applications. The Surgical Clinics of North America. 80 (1), 275-293 (2000).
- Collins, D., Hogan, A. M., O’Shea, D., Winter, D. C. The Omentum: Anatomical, Metabolic, and Surgical Aspects. Journal of Gastrointestinal Surgery. 13 (6), 1138-1146 (2009).
- Khan, S. M., et al. In vitro metastatic colonization of human ovarian cancer cells to the omentum. Clinical, & Experimental Metastasis. 27 (3), 185-196 (2010).
- Shimizu, S., Hans, H. Routes of Administration. The Laboratory Mouse. , 527-542 (2004).
- Vang, R., Shih, I. -. M., Kurman, R. J. Fallopian tube precursors of ovarian low- and high-grade serous neoplasms. Histopathology. 62 (1), 44-58 (2012).
- Folkins, A. K., Jarboe, E. A., Roh, M. H., Crum, C. P. Precursors to pelvic serous carcinoma and their clinical implications. Gynecologic Oncology. 113 (3), 391-396 (2009).
- Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis. Journal of Hematology, & Oncology. 5 (1), 8 (2012).
- Kurman, R. J., Shih, I. -. M. The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory. The American Journal Of Surgical Pathology. 34 (3), 433-443 (2010).
- Crum, C. P., et al. The distal fallopian tube: a new model for pelvic serous carcinogenesis. Current Opinion In Obstetrics, & Gynecology. 19 (1), 3-9 (2007).
- Crum, C. P., et al. Lessons from BRCA: The Tubal Fimbria Emerges as an Origin for Pelvic Serous Cancer. Clinical Medicine, & Research. 5 (1), 35-44 (2007).
- Foulkes, W. D., Narod, S. A. Ovarian cancer risk and family history. The Lancet. 349, 878 (1997).
- Antoniou, A., et al. Average Risks of Breast and Ovarian Cancer Associated with BRCA1 or BRCA2 Mutations Detected in Case Series Unselected for Family History: A Combined Analysis of 22 Studies. The American Journal of Human Genetics. 72 (5), 1117-1130 (2003).
- King, M. -. C., Marks, J. H., Mandell, J. B. New York Breast Cancer Study Group Breast and ovarian cancer risks due to inherited mutations in BRCA1 and BRCA2. Science. 302 (5645), 643-646 (2003).
- Kjær Krüger, S., Gayther, S. Ovarian cancer and genetic susceptibility in relation to the BRCA1 and BRCA2 genes. Occurrence, clinical importance and intervention. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 85 (1), 93-105 (2006).
- Easton, D. F., Ford, D., Bishop, D. T. Breast and ovarian cancer incidence in BRCA1-mutation carriers. Breast Cancer Linkage Consortium. American Journal of Human Genetics. 56 (1), 265-271 (1995).
- Rebbeck, T. R., et al. Prophylactic Oophorectomy in Carriers of BRCA1or BRCA2Mutations. New England Journal of Medicine. 346 (21), 1616-1622 (2002).
- Olivier, R. I., et al. Clinical outcome of prophylactic oophorectomy in BRCA1/BRCA2 mutation carriers and events during follow-up. British Journal Of Cancer. 90 (8), 1492-1497 (2004).
