Eine einfache Vorrichtung, um schnell vorbereiten Whole Mounts des Mausdarm
Summary
The use of a simple device to cut and ‘roll’ mouse intestines to rapidly prepare whole mount preparations is described.
Abstract
Herstellung Gesamtpräparate der Maus-Dünndarm und Dickdarm zur nachfolgenden Analyse oder Quantifizierung kann zeitaufwendig und schwierig sein. Wir beschreiben die Verwendung einer einfachen Vorrichtung zu schneiden und zu 'roll' Maus Darm ganze Berg Zubereitungen von Superior und gleichbleibende Qualität zu dem, was von Hand erreicht werden kann schnell vorzubereiten. Die Vorrichtung umfasst eine Basis, die 4 Edelstahlstangen und eine Oberseite, die eine Schneidführung wirkt hält. Die Stäbe werden in das Lumen des Dünndarms [gedrittelt] und den Dickdarm eingelegt. Die Stäbe und die Proben werden dann in einem Stück Filterpapier oder einer Karte in die Halteschlitze in der Basis der Vorrichtung platziert. Die Oberseite des Gerätes wird dann positioniert und dient als Schnittführung. Die beiden Abwinkelungen in der Mitte des Oberteils werden verwendet, um ein Messer oder Skalpell führen und schneiden den Darm in Längsrichtung auf der Oberseite der Stangen. Sobald die Darmabschnitte geschnitten worden sind, wird der Kopf abgetrennt und die Karte, tissue und Stangen leicht aus der Vorrichtung entnommen und auf die Bank gelegt. Die Stäbe werden dann sanft zur Seite gerollt, um zu glätten und kleben die Darmsegmente auf die darunterliegende Stück Filterpapier oder Karte. Die endgültige Präparation kann dann untersucht oder befestigt werden und für eine spätere Analyse gelagert. Die Zubereitungen sind von unschätzbarem Wert für die Untersuchung von Veränderungen der intestinalen normalen oder genetisch modifizierte Mausmodellen. Die Vorbereitungen für die Untersuchung und Quantifizierung der Auswirkungen der Entzündung (Colitis), Schäden, Krebsvorstufen verwendet (anomale Kryptenherden (ACFs) und Mucin erschöpft Brennpunkten (MDF)) und Polypen oder Tumoren.
Introduction
Die Maus und die genetisch veränderte Maus 1-3 sind eine unschätzbare Modell für die Untersuchung von verschiedenen Pathologien, insbesondere Krebs und seine Beziehung zu Entzündungen im Magen-Darm-Trakt. Dies erfordert oft die Herstellung von Gesamtpräparate des Dünndarms und / oder Dickdarm.
Die Herstellung von Gesamtpräparate mit einer Genauigkeit Paar versetzter Schere gemacht werden, aber es kann etwa 20 min pro Maus 4 nehmen. Dies ist nicht sehr praktisch für Vergleichsstudien, die eine erhebliche Menge an Mäusen benötigen (etwa 10 pro Gruppe für die statistische Analyse). Darüber hinaus ist die Länge der Zeit erhöht das Risiko von Gewebeabbau. Ein Versuch, dieses Problem zu lindern führte zu der Studie von verschiedenen Schneidvorbereitung Hilfen. Die erste auf einer Reihe von Metallplatten basiert, mit Schneidhainen, aber die Platten verdeckt das Gewebe und die Schneid war daher schwierig zu kontrollieren.
Ein Konventionel sechseckigen Bleistift schließlich Inspiration zur Verfügung gestellt für die Schneideinrichtung, wie wir könnten dann sehen, wie eine halbe Stiftform wäre eine gute Führung für ein Skalpell (Abbildung 1) zu machen. Dies führte zu einem Design für einen Rahmen mit vier Schneidführungen 5. Die Wirksamkeit dieser Vorrichtung war dramatisch wie die Präparate de Figur 4 veranschaulichen den Unterschied zwischen der Scheren Zubereitung und der Vorrichtung Zubereitung.
Die Oberseiten der Originalgeräte wurde aus mehreren Metallstücke, aber späteren aufgebaut, und das aktuelle Modell wurde aus einem massiven Stück Duraluminium gefertigt. Die Basis wurde von höchster Qualität mit hoher Dichte Harz bearbeitet.
Das Gerät hat sich als von großem Nutzen für die Herstellung von ganzen Bergen von Mausdarm, da es erheblich beschleunigt und verbessert die Qualität und Konsistenz der Präparate, die eine breite Palette von Anwendungen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Das Gerät erheblich beschleunigt den Prozess, so daß zwei Bediener kann vollständig eine Maus Autopsie innerhalb von 6 min. Dazu gehört auch eine Sichtkontrolle auf offensichtliche makroskopischen Veränderungen und einem Gewicht von und zur Festsetzung der wichtigsten Organe. Es ermöglicht auch die Betreiber zu spülen, trocknen und wiegen den Magen, Blinddarm, Dünndarm und Dickdarm und bereiten die gesamte Reittiere. Der abgeflachte Gewebe sehr schnell behoben werden und somit zu vermeiden Abbau Artefakte.
<…Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The evolution of the device started with somewhat different cutting prototype demonstrated at the Imperial Cancer Research Fund (ICRF) mouse club by Bass Hassan, following this there were several discussions with Rob Rudling and Nikki Mandir in the containment facility at ICRF Clare Hall. Jo Kitau of the mechanical workshop at ICRF constructed the initial versions and Andy Lucas designed and perfected the final model in the CRUK workshop in Oxford.
Materials
| Delrin | Ryan Plastics, Earls Barton, UK | N/A | High-density acetal resin similar material would suffice |
| Duralumin plate | Metal Supplies Ltd, Park Road,Dukinfield. SK16 5LP UK | N/A | Aluminium allow dating back to 1909 so alterative suppliers are available |
| Finished device(s) ready for use | Contact Dr Goodlad r.goodlad@imperial.ac.uk | N/A | Contact r.goodlad@imperial.ac.uk for supply details |
Referencias
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