Proporcionamos un protocolo detallado para un ensayo de longitud de trayectoria de forrajeo de Drosophila melanogaster. Discutimos la preparación y el manejo de los animales de prueba, cómo realizar el ensayo y analizar los datos.
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Artículo de método
Forrajeo Protocolo Ruta de longitud de
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Resumen
Resumen
El melanogaster larvas fenotipo longitud del recorrido de Drosophila es una medida establecida usada para estudiar las contribuciones genéticas y ambientales a la variación del comportamiento. El ensayo de la longitud del recorrido de las larvas fue desarrollado para medir las diferencias individuales en el comportamiento de alimentación que más tarde fueron ligado al gen de forrajeo. Larval la longitud del recorrido es un rasgo marcado un gol que facilita la recogida de muestras de gran tamaño, a un costo mínimo, para las pantallas genéticos. A continuación se realiza una descripción detallada del protocolo actual para el ensayo de la longitud del recorrido de larvas utilizado por primera vez por Sokolowski. El protocolo se detalla cómo manejar de forma reproducible animales de prueba, realice el ensayo de conducta y analizar los datos. Un ejemplo de cómo el ensayo puede ser usado para medir la plasticidad de comportamiento en respuesta al cambio del medio ambiente, mediante la manipulación de la alimentación de medio ambiente antes de realizar el ensayo, también se proporciona. Por último, el diseño de prueba adecuado, así como los factores ambientales que pueden modificarSe discuten las larvas de longitudes de trayecto como la calidad de los alimentos, la edad de desarrollo y efectos de los días.
Introducción
Desde el descubrimiento del gen blanco en el laboratorio de Thomas Hunt Morgan en 1910, la mosca de la fruta, Drosophila melanogaster (D. melanogaster), se ha utilizado como modelo para el estudio de las bases moleculares y fisiológicas de diversos procesos biológicos. La popularidad de D. melanogaster se deriva en gran medida de la cantidad considerable y la variedad de herramientas genéticas. El tamaño pequeño de Drosophila, relativa facilidad de manipulación y generación de corto tiempo de procesamiento es un modelo ideal para estudios de genética. Igualmente importante es la capacidad de ....
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Protocolo
1. Preparar placas de uva y botellas de celebración para la recolección de larvas
- Para hacer botellas de celebración, cortar agujeros en un lado de las botellas de cultivo de 6 oz mosca, lo suficientemente grande para encajar un tapón vial mosca de suministro de aire (Fig. 1D).
- Para hacer las placas de uva, preparar 250 ml de medio de zumo de uva (1,8% de agar, el jugo de uva 45%, ácido acético 2,5%, 2,5% de etanol) hirviendo el agar, zumo de uva y la mayor parte del agua, enfríe a 70 ºC ( revuelva mientras se enfría), a continuación, añadir el ácido acético y etanol y llevar al volumen con agua.
- Usar una jeringa (sin a....
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Resultados
Las diferencias en la longitud del recorrido del vehículo y niñera para las cepas y el efecto de la privación de alimentos en la longitud del recorrido se ilustran en la Fig. . 3 Los datos recogidos durante tres días consecutivos de las pruebas mostraron un efecto significativo de tracción (F (1,421) = 351,89, p <2.20 x 10 -16; Fig. 3A), con exploradores que viajan más lejos que los canguros. Ademá.......
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Discusión
El ensayo de la longitud del recorrido descrito aquí ofrece una medida robusta y sencilla de comportamiento de alimentación de las larvas de Drosophila. El protocolo sigue la metodología general descrita en Sokolowski 2, pero desde entonces se ha mejorado en lo que respecta a la eficiencia y controles experimentales. A lo mejor de nuestro conocimiento, este método es el único método disponible para la medición de la longitud del recorrido de las larvas. La versión original del protocolo 2, 3, 15.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Los autores reconocen que el Consejo de Ciencias Naturales e Ingeniería de Canadá (NSERC) sigue financiando a MBS.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| 6 onzas botellas de cultivo de mosca | Fisher Scientific | AS355 | |
| Tapones para viales | Droso-Plugs | 59-201 | |
| 35 x 10 mm Placas de Petri | Falcon | 351008 | |
| placas de Petri de 100 x 15 mm | Fisher | 875712 | |
| 60 x 15 mm Placas de Petri | VWR | 25384-168 | |
| Sondas de disección | Almedic | 2325-58-5300 | |
| Laboratorio de levadura | científico | FLY-8040-20F |
Referencias
- Behavioral Genetics of the Fly (Drosophila melanogaster). Dubnau, J. , Cambridge University Press. New York. 173(2014).
- Sokolowski, M. B. Foraging strategies of Drosophila melanogaster: a chromosomal analysis. Behav Genet. 10, 291-302 (1980).
- de Belle, J. S., Hilliker, A. J., Sokolowski, M. B.
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Reimpresiones y permisos
