Futter suchen Pfad-Länge-Protokoll für<em> Drosophila melanogaster</em> Larvae
Summary
We provide a detailed protocol for a Drosophila melanogaster foraging path-length assay. We discuss the preparation and handling of test animals, how to perform the assay and analyze the data.
Abstract
Die Drosophila melanogaster Larven Weglängen-Phänotyp ist ein etabliertes Maß verwendet , um die genetischen und Umwelt Beiträge zur Verhaltensänderung zu studieren. Die Larven Weglängen-Assay wurde individuelle Unterschiede in der Nahrungssuchverhalten zu messen entwickelt , die später auf die Nahrungssuche Gen verknüpft wurden. Larval Pfad-Länge ist ein leicht erzielte Merkmal, das die Sammlung von großen Probengrößen bei minimalen Kosten, für die genetische Bildschirme erleichtert. Hier bieten wir eine detaillierte Beschreibung des aktuellen Protokolls für die Larven- Weglänge Assay zuerst von Sokolowski verwendet. Das Protokoll beschreibt, wie reproduzierbar Testtiere behandeln, die Verhaltenstest durchführen und die Daten zu analysieren. Ein Beispiel, wie kann der Assay verwendet werden Verhaltensplastizität in Reaktion auf Umweltveränderungen zu messen, die von Umgebungs Manipulieren Einspeisen vor dem Test durchgeführt wird, ist ebenfalls vorgesehen. Schließlich entsprechende Test-Design sowie Umweltfaktoren, die ändern könnenLarven Weg Länge wie Lebensmittelqualität, sind Entwicklungsalter und Tag Effekte diskutiert.
Introduction
Seit der Entdeckung des weißen Gens in Thomas Hunt Morgan Labor im Jahre 1910, die Fruchtfliege, Drosophila melanogaster (D. melanogaster), wurde als Modell für die Untersuchung der molekularen und physiologischen Grundlagen der verschiedenen biologischen Prozessen eingesetzt. Die Popularität von D. melanogaster resultiert im Wesentlichen aus der großen Menge und Vielfalt an genetischen Werkzeugen. Drosophila geringe Größe, relativ einfache Handhabung und kurze Generationszeit machen es zu einem idealen Modell für Genetik Studien. Ebenso wichtig ist die Fähigkeit der Drosophila viele der Phänotypen von komplexeren Organismen einschließlich Säugetieren ausgedrückt zu demonstrieren. Dazu gehören komplexe Phänotypen wie Verhalten, das an der Schnittstelle zwischen dem Organismus und seiner Umwelt stehen. Als solche haben wesentlich zu unserem Verständnis, wie Gene und Umwelt vermitteln Verhalten Verhaltensstudien an der Fruchtfliege beigetragen1.
Eine der ersten Studien von D. melanogaster Larven Verhalten untersucht individuelle Unterschiede in der Larvennahrungssuche Strategien durch die Weglängen von Larven 2 Messung während der Fütterung. Pfadlänge wurde als die Gesamtdistanz von einer einzigen Larve auf Hefe, innerhalb eines Zeitraums von fünf Minuten gereist definiert. Beide Laborstämme und Fliegen aus einer natürlichen Population in Toronto variiert in ihrer Nahrungssuche Verhaltensweisen und es gab eine genetische Komponente der individuellen Unterschiede in der Pfadlänge. Zwei Larvennahrungssuche Morphs wurden aus den quantitativen Pfadlängenverteilungen beschrieben und sie wurden Rover und Sitter genannt. Rovers zeigen längere Weglängen, während eine größere Fläche, während auf einem Lebensmittelsubstrat als Sitter durchquert. Mit diesem Weg langen Test de Belle et al. 3 abgebildet , die Nahrungssuche (für) Gen diese individuellen Verhaltensunterschiede zu einem diskreten Ort auf Chromosomen- 2 (24A3-24C5) zugrunde liegen. Die D. melanogaster für Gen wurde später 4 kloniert und ergab 6 eine cGMP – abhängige Proteinkinase 5, ein Modulator der Physiologie und Verhalten in Drosophila und anderen Organismen zu sein.
Hier beschreiben wir die aktuelle Protokoll für die Larven- Weglängen-Assay ursprünglich in Sokolowski 2 entwickelt. Obwohl sich einige Aspekte des Tests im Laufe der Jahre verändert haben, hat das Konzept hinter dem Design nicht. Wir stellen auch Daten der Test das Potenzial zu beurteilen , genetischen und Umwelt Beiträge zur individuellen Unterschiede in der Nahrungssuchverhalten von Drosophila – Larven zu illustrieren. Die Larven Weglängen-Test ist einfach, effizient und doch robust. Eine einzelne Person kann in vier Stunden mit Leichtigkeit zu 500 Larven testen und Ergebnisse können mit einem hohen Maß an Reproduzierbarkeit erhalten werden. Ursprünglich entwickelt für zu lokalisieren, kann es in genetischen Screens verwendet werden, quantitative trait locus mapping, und in Studienvon Gen-für-Umgebung (GXE) Wechselwirkungen. Darüber hinaus machen die Einfachheit und Reproduzierbarkeit es eine große Ressource für Bachelor-Unterricht.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die Pfadlänge Test hier skizzierte bietet eine robuste und einfache Maßnahme der Nahrungssuchverhalten von Drosophila – Larven. Das Protokoll folgt der allgemeinen Methodik in Sokolowski 2 beschrieben, jedoch wurde in Bezug auf Effizienz und experimentelle Kontrollen da verbessert. Nach bestem Wissen ist diese Methode die einzige verfügbare Methode zur Larven Pfad-Länge. Die ursprüngliche Version des Pfadlänge Protokoll 2, 3, 15, 16 getestet Larven auf Petrischalen mit einer dünnen …
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
The authors acknowledge continued funding the Natural Sciences and Engineering Council of Canada (NSERC) to MBS.
Materials
| 6 oz fly culture bottles | Fisher Scientific | AS355 | |
| Fly vial plugs | Droso-Plugs | 59-201 | |
| 35X10mm Petri dishes | Falcon | 351008 | |
| 100X15 mm Petri dishes | Fisher | 875712 | |
| 60x15mm Petri dishes | VWR | 25384-168 | |
| Dissecting probes | Almedic | 2325-58-5300 | |
| Yeast | Lab Scientific | FLY-8040-20F |
Referencias
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