Este protocolo describe un procedimiento quirúrgico para crear un modelo de hipertensión arterial pulmonar (HAP) inducida por flujo en ratas y los procedimientos para analizar los principales criterios de valoración hemodinámicos e histológicos en este modelo.
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Artículo de método
La cirugía de derivación, un cateterismo derecho, y Vascular Morfometría en un modelo de rata de flujo inducido por la hipertensión arterial pulmonar
En este artículo
Resumen
Resumen
En este protocolo, la HAP se induce combinando una inyección de monocrotalina (MCT) de 60 mg/kg con un aumento del flujo sanguíneo pulmonar a través de una derivación aorto-cava (MCT+Flow). La derivación se crea insertando una aguja de 18-G desde la aorta abdominal hasta la vena cava adyacente. Se ha demostrado que el aumento del flujo pulmonar es un desencadenante esencial de una forma grave de HAP con distintas fases de progresión de la enfermedad, caracterizada por hipertrofia medial temprana seguida de lesiones neointimales y oclusión progresiva de los pequeños vasos pulmonares. Para medir la hemodinámica cardíaca y pulmonar derecha en este modelo, el cateterismo cardíaco derecho se realiza mediante la inserción de una cánula rígida que contiene un catéter flexible de punta esférica a través de la vena yugular derecha hasta el ventrículo derecho. A continuación, el catéter se introduce en las arterias pulmonares principales y más distales. La histopatología de la vasculatura pulmonar se evalúa cualitativamente, puntuando los vasos pre e intraacinares en función del grado de musculatura y la presencia de neoíntima, y cuantitativamente, midiendo el grosor de la pared, la relación pared-luz y la puntuación de oclusión.
Introducción
El objetivo de este método es para crear un modelo reproducible para la hipertensión arterial pulmonar grave, inducida por el flujo en ratas y para medir su principio hemodinámica y puntos finales histopatológicos.
La hipertensión arterial pulmonar (HAP) es un síndrome clínico que abarca un aumento progresivo de la resistencia vascular pulmonar que lleva a insuficiencia ventricular derecha y la muerte. Dentro del espectro de la enfermedad de orden superior de las enfermedades hipertensivas pulmonar (HP), HAP es la forma más grave y uno que se queda sin una cura 1. La arteriopatía subyacente en la HAP se caracteriza....
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Protocolo
Los procedimientos que implican sujetos animales han sido aprobados por el Comité Central de Holanda para la Experimentación Animal y el Comité de Cuidado de Animales de la Universidad del Centro Médico de Groningen (Países Bajos). Se utilizaron ratas Wistar y ambos Lewis con pesos entre 180 y 300 g.
1. Vivienda y aclimatación
- Después de la llegada a la instalación central de los animales, las ratas de las casas en grupos de 5 por jaula. Durante un período de aclimatación de 7 días, las ratas acostumbrar a la manipulación humana, pero no realice ningún procedimiento experimental.
2. Preparación ....
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Resultados
Los resultados representativos se presentan en la Figura 4. Los resultados presentados muestran características de MCT + FLOW en ratas Lewis en los siguientes grupos: control (n = 3), mf8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), y MF-RVF ( n = 10). Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el ANOVA de una vía con corrección de Bonferroni.
60 mg / kg MCT y aumentó la ventaja del flujo sanguíneo pulmonar a .......
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Discusión
Este método describe el procedimiento quirúrgico de una derivación aorto-cava en ratas pre-tratados con MCT para crear PAH inducida por el flujo y las técnicas para evaluar el principio hemodinámica y puntos finales histopatológicos que caracterizan PAH y este modelo.
Los pasos críticos dentro del Protocolo y solución de problemas
La cirugía y posterior a la cirugía. Durante la cirugía de derivación aorto-cava, el paso más crítico es la disección de la aorta y la ve.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Este estudio fue apoyado por la Iniciativa de Investigación Cardiovascular de los Países Bajos, la Fundación Holandesa del Corazón, la Federación Holandesa de Centros Médicos Universitarios, la Organización Holandesa para la Investigación y el Desarrollo de la Salud y la Real Academia de Ciencias de los Países Bajos (CVON nr. 2012-08, PHAEDRA, The Sebald fund, Stichting Hartekind).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Shunt Surgery | |||
| Guantes | |||
| Duratears Ungüento oftálmico | Alcon | 10380 | |
| Cloruro-Hexidina | |||
| Bastoncillos | |||
| Pegamento histoacrílico para tejidos | B. Braun Medical 1050052 | ||
| Silkam 5-0 suturas negras no reabsorbibles | B. Braun Medical | F1134027 | |
| Safil 4-0 suturas violeta reabsorbible | B. Braun Medical | ||
| 18 G aguja | Luer | NN1838R BD | punta doblada en 45 grados orificio hacia el exterior |
| Gasas 10 x 10 cm | Paul Hartmann | 407825 | |
| Temgesic Buprenorfina | RB Pharmaceuticals | 5429 | subcutánea inyección |
| Cloruro de sodio 0.9% | |||
| Máscara de ventilación Hoja | |||
| Abrazadera Biemer 18 mm, apertura de 5 mm | AgnTho | 64-562 | |
| Estera | |||
| Kocher Clamp | |||
| afeitar | |||
| Microscopio | Leica | ||
| RightHeart Catheterization | |||
| Guantes | quirúrgicos estériles | ||
| Pomada para los ojos | Duratears | ||
| Cloruro-Hexidina | |||
| Bastoncillos de | |||
| Gasas 10 x 10 cm | Paul Hartmann | 407825 | |
| Silkam 5-0 suturas negras no reabsorbibles | B. Braun Medical | F1134027 | |
| Aguja 20 G | Luer | Punta ligeramente doblada hacia el interior | |
| Cánula 20 G | Luer | para introducir catéter, punta preformada en 20 grados | |
| Catéter Silastic 15 cm de largo | Bola de 0,5 mm a 2 mm de la punta | ||
| Transductor de presión | Ailtech | ||
| Monitor de cabecera Cardiocap/5 | Datex-Ohmeda | ||
| Afeitadora | |||
| 10 mL Jeringa | |||
| Cloruro de sodio 0.9% | para lavado | ||
| Morfología vascular | |||
| 50 mL Jeringa | |||
| 4% Formaldehído | |||
| Kit de tinción Verhoef | Sigma-Aldrich | HT254 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en®ion=US |
| Escáner digital de portaobjetos | Hamamatsu | C9600 | |
| ImageJ | |||
| Elastic (Tinción de tejido conectivo) | Abcam | ab150667 | http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(sitio web).pdf |
Referencias
- Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).
- Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit ....
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Reimpresiones y permisos
