分析营养补充剂的有益作用于肠上皮屏障功能在实验性结肠炎
Summary
炎症性肠病（IBD）的当前治疗的目的是减轻疾病的症状，但可能会导致严重的副作用。因此，替代战略被动物结肠炎模型研究。在这里，我们介绍如何补充营养的临床体征IBD的有利影响在这样的肠炎模型进行了分析。
Abstract
炎症性肠疾病（IBD），包括克罗恩病和溃疡性结肠炎，是肠内的慢性复发病症。他们造成严重的问题，如腹部绞痛，血性腹泻，体重减轻，在受影响的个人。不幸的是，目前还没有治愈的是，和治疗仅旨在减轻症状。目前的治疗包括抗炎和免疫抑制药物，可能导致严重的副作用。这是值得的替代治疗方案，如营养补充剂，不引起副作用的搜索。他们在临床研究中的应用之前，这种化合物必须进行严格测试在动物模型的有效性和安全性。一个可靠的实验模型是在小鼠葡聚糖硫酸钠（DSS）结肠炎模型，其再现许多的溃疡性结肠炎在人体中的临床症状。我们最近应用该模型以测试含营养补充剂的有益效果维生素C和E，L-精氨酸，和ω3多不饱和脂肪酸（PUFA）。我们分析了各种疾病参数，发现这补充能够改善水肿形成，组织损伤，白细胞浸润，氧化应激和促炎性细胞因子，导致在疾病活动指数的整体改善。在这篇文章中，我们详细使用C57BL / 6小鼠的DSS结肠炎模型的营养补充品的正确使用，以及如何疾病参数，如组织学，氧化应激和炎症进行评估解释。分析不同饮食补充剂的有益效果可接着最终打开的替代治疗策略，减轻IBD的症状和/或延长缓解期的相位，而不会引起严重的副作用的发展新的途径。
Introduction
结肠炎是能引起腹泻和腹痛结肠的炎性病症。结肠炎可以是急性，响应于感染或压力，或者它可以发展为慢性疾病，如溃疡性结肠炎（UC），其属于下组的炎性肠疾病（IBD）的。尽管UC的临床症状得到了很好的描述，发病机制仍然知之甚少1。据专家们承认，UC是多因素疾病，与遗传突变和异常的免疫反应扮演一个重要的角色2。然而，环境因素，如生活和营养的样式，也有助于疾病的发生和发展3。
不幸的是，IBD是不可治愈的，但也有旨在缓解临床症状很多的治疗方案。目前的治疗包括抗炎药，如柳氮磺吡啶和皮质类固醇;免疫抑制剂，如azathioPRINE;单克隆抗体是捕获促炎细胞因子，如肿瘤坏死因子α（TNF-α），或嵌段粘附分子，如整，以降低白细胞募集过度;并针对触发促炎症途径，如Janus激酶（JAK）4激酶抑制剂。并非所有的患者对所有治疗，这样的治疗策略必须个体化5。此外，大多数的这些治疗药物干扰了代谢和免疫反应，常常引起严重的副作用。出于这个原因，替代治疗方案进行了研究。
替代治疗包括益生菌和营养补充剂，已在动物模型和临床试验中成功6,7-不同程度的应用。我们最近发现，不同的单营养补充剂，作为抗氧化维生素或ω3-多不饱和脂肪酸，例如应用（PUFAS），不如这种补充剂的组合在减轻结肠炎和心血管疾病的症状8,9中的应用。这些研究在小鼠中进行，因此，临床研究必须在人类中进行，以确定这些结果是否也将是适用于人类。临床研究开始之前，新的治疗方案的有效性和安全性，必须在动物模型中进行评估。
对于IBD的葡聚糖硫酸钠（DSS）的模式已被广泛用于研究疾病发展的机制以及药物和营养补充剂6,10的有益效果。在大多数研究中，只有一种急性疾病超过七天被诱导的时间段;然而，在这些动物中观察到的临床症状密切类似于那些在IBD患者中观察到（ 即，血性腹泻，体重减轻，上皮功能障碍，和免疫细胞浸润）10。 DSS诱导糜烂在粘膜，导致屏障功能障碍和增加肠道上皮通透性11。确切机制尚不清楚。然而，研究表明，DSS与中链长度的脂肪酸的相互作用形成的纳米lipocomplexes是能够进入上皮细胞和诱导炎症信号传导途径12。在本文中，我们详细描述如何结肠炎是引起并在小鼠中，补充剂如何营养通过管饲法应用到确保在每个动物的恒定剂量分析，以及如何进行检查各种结肠炎症状例如补充剂的效果。
Protocol
Representative Results
Discussion
为了使用在临床研究中的营养补充品，所述的这类补充剂的安全必须小心地在动物研究中体内评价。在结肠炎的情况下，类似于IBD的临床征兆若干适当的动物模型已经建立，包括使用的DSS，TNBS，或乙酸化学模型;敲除（KO）等车型IL10-KO;和使用过继T细胞转移19-21免疫细胞介导的结肠炎。结肠炎的DSS模型是诱导结肠炎类似于人类IBD的许多疾病的症状和在研究调查结肠炎22?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由来自墨西哥议会科学与技术（国家科学技术委员会，207268和233395迈克尔·施诺尔）资助。 KFCO是国家科学技术委员会津贴（396260）的获得者，获得硕士学位。
Materials
| 0.3% of gelatin | Bioxon | 158 | |
| 10% formaldehyde | J.T. Baker | 2106-03 | |
| 96-well plate with flat bottom | Corning | 3368 | |
| Absolute ethanol | J.T. Baker | 9000-03 | |
| Absolute xylene | J.T. Baker | 9490-03 | |
| ABTS | Sigma Aldrich | H5882 | |
| Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | 9048-46-8 | |
| ColoScreen | Helena Laboratories | 5072 | |
| Corabion (Kindly provided by Merck, Naucalpan, Mexico) | Merck | ||
| Dextran Sulfate Sodium Salt | Affymetrix | 9011-18-1 | (M.W. 40,000-50,000) |
| Dihydroethidium | Life Technology | D11347 | |
| Eosin-Y | J.T. Baker | L087-03 | |
| Evans blue | Sigma-Aldrich | 314-13-6 | |
| Feeding needle | Cadence Science Inc. | 9921 | |
| Glass slide rack with handle | Electron Microscopy | 70312-16 | |
| Glass Slides | Corning | 2947 | |
| Harris hematoxylin | Sigma-Aldrich | H3136 | |
| Hexadecyltrimethyammonium (HTAB) | Sigma Aldrich | H6269 | |
| Histosette (Embedding cassette) | Simport | M498.2 | |
| Hydrochloric acid 1 M | J.T. Baker | 9535-62 | |
| Hydrogen peroxide | Sigma Aldrich | H3410 | |
| Ketamine | PiSA Agropecuaria | Q-7833-028 | |
| Liquid paraffin | Paraplast | 39501-006 | |
| Lithium carbonate | Sigma-Aldrich | 2362 | |
| N,N-dimethylformamide | J.T. Baker | 68-12-2 | |
| N-acetylcysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
| Plastic cubes | Electron Microscopy | 70181 | |
| Poly-L-Lysine Solution | Sigma-Aldrich | 25988-63-0 | |
| Prism 5 statistical software | GraphPad Software | Prism 5 | |
| Saline Solution 0.9% NaCl | CS PiSA | Q-7833-009 | |
| Sodium citrate | Sigma-Aldrich | W302600 | |
| Synthetic resin | Poly Mont | 7987 | |
| Taq DNA polymerase | Invitrogen | 11615-010 | |
| Tissue-tek. O.C.T Compound | Sakura Finetek | 4583 | |
| Tuberculine Syringe | BD Plastipak | 305945 | |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | 9005-64-5 | |
| VECTASHIELD Antifade Mounting Medium with DAPI | Vector Laboratories | H-1200 | |
| Xylazine | PiSA Agropecuaria | Q-7833-099 |
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