Un nuevo uso de la ecografía tridimensional de alta frecuencia para la caracterización de embarazo temprano en el ratón

Resumen

Ratones son ampliamente utilizados para estudiar biología gestacional. Sin embargo, interrupción del embarazo se requiere para este tipo de estudios que impide investigaciones longitudinales y hace necesario el uso de grandes cantidades de animales. Por lo tanto, describimos una técnica no invasiva de la ecografía de alta frecuencia para la detección precoz y seguimiento de eventos tras la implantación en el ratón embarazado.

Resumen

Sonografía de alta frecuencia (HFUS) es un método no invasor, controlar el desarrollo en tiempo real del feto humano en el útero. El ratón se utiliza rutinariamente como un modelo en vivo para el estudio de la implantación del embrión y la progresión del embarazo. Desafortunadamente, estos estudios murinos requieren interrupción del embarazo para permitir el seguimiento análisis fenotípico. Para solucionar este problema, se utilizó la reconstrucción tridimensional (3D) de HFUS imagen de datos para la detección temprana y la caracterización de sitios de implantación de embriones murinos y su progresión en el desarrollo individual en el útero. Combinación de modelado y proyección de imagen de HFUS con reconstrucción 3-d, pudimos con precisión cuantificar número de sitio de implantación de embriones, así como monitorear la progresión del desarrollo en embarazadas ratones C57BL6J/129S de 5,5 días post coito (d.p.c.) a través de d.p.c. 9.5 con el uso de un transductor. Mediciones incluidas: número, ubicación y volumen de sitios de implantación así como espaciamiento entre implantación; se evaluó la viabilidad del embrión mediante el control de la actividad cardiaca. En el período tras el implante inmediato (5.5 a 8.5 d.p.c.), reconstrucción 3D del útero grávido en malla y recubrimiento sólido formato permitió a representación visual de los embarazos en vías de desarrollo dentro de cada cuerno uterino. Como ratones transgénicos se siguen usando para caracterizar fenotipos reproductivos femenino derivados de disfunción uterina, este método ofrece un nuevo enfoque para detectar, cuantificar y caracterizar principios implantación eventos en vivo. Este nuevo uso de la proyección de imagen de 3-d HFUS demuestra la capacidad de detectar, visualizar y caracterizar sitios de implantación del embrión durante el embarazo temprano murino de manera no invasiva con éxito. La tecnología ofrece una mejora significativa sobre los métodos actuales, que se basan en la interrupción de embarazos para tejidos brutos y Caracterización histopatológica. Aquí utilizamos un formato de vídeo y texto para describir cómo realizar con éxito los ultrasonidos del embarazo temprano murino para generar datos fiables y reproducibles con la reconstrucción de la forma uterina en malla y sólidos 3D imágenes.

Introducción

Pérdida recurrente de embarazo temprano es una de las complicaciones más frecuentes después de la concepción y afecta aproximadamente al 1% de las parejas que intentan concebir^1,2. Los mecanismos subyacentes de la pérdida temprana del embarazo son muy variados: desde intrínsecas anormalidades embrionarias y comorbilidades maternas a los defectos en la receptividad endometrial^1,3,4. Debido a su maleabilidad genética, modelos de ratón han sido ampliamente utilizados para las investigaciones de temprana implantación del ....

Protocolo

estos estudios se llevaron a cabo con arreglo a la guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio publicados por los institutos nacionales de salud y protocolos animal aprobados por la institucional cuidado Animal y el Comité uso (IACUC) de Baylor College of Medicine en protocolo número AN-4203.

1. preparación de la embarazada para ultrasonido

1. tiempo de apareamiento
   1. lugar la presa con un macho fértil probada principio noche de ratón después de 1700. Separar presa y el hombre por las 0700 horas (horas), independientemente si existe tapón vaginal, para fechar exacto de embarazo.
      Nota: La mañ....

Resultados

Como se muestra en la figura 1, el ultrasonido de alta frecuencia puede detectar la implantación sitio desarrollo comienza ya en el punto 5.5 del tiempo d.p.c. Usando el encendedor hyperechoic decidualized endometrio como marcador de sitios de implantación en 6.5 d.p.c permite al número de sitios de implantación y el espaciamiento de estos sitios para ser cuantificada. Como el embarazo progresa a 7.5 d.p.c., más oscuro saco gestacional hypoechoic y poste feta.......

Discusión

Este nuevo uso de la proyección de imagen de 3-d HFUS demuestra la capacidad de detectar, visualizar y caracterizar sitios de implantación del embrión durante el embarazo temprano murino de manera no invasiva con éxito. La tecnología ofrece una mejora significativa sobre los métodos actuales, que se basan en la interrupción de embarazos para tejidos brutos y Caracterización histopatológica. Sin embargo cabe señalar que los métodos histológicos aún se consideraría más óptima cuando se desee caracterización de forma más am.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
VisualSonics Vevo 2100 Plataforma/Máquina de Imágenes de Ultrasonido	VisualSonics, inc.	VS-11945
Estación de imágenes Vevo	VisualSonics, inc.	SA-11982
Aquasonic 100 Gel de Transmisión de Ultrasonido	Parker	#SKU PLI 01-08
Isoflurano (IsoThesia) botella de 100mL	Henry Shein	#29404
PuraLubenPomada Oftálmica Animal	Dechra	#12920060