Uso de ovocitos de ratón para evaluar la función humana del Gene durante la Meiosis I

Diego Marin; Alexandra L. Nguyen; Richard T. Scott, Jr.; Karen Schindler

doi:10.3791/57442

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Artículo de método

Uso de ovocitos de ratón para evaluar la función humana del Gene durante la Meiosis I

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DOI:

10.3791/57442

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10 de abril de 2018

Diego Marin^*¹^,² , Alexandra L. Nguyen^*³ , Richard T. Scott, Jr.¹^,² , Karen Schindler³

¹IVI-RMA New Jersey, ²Jefferson College of Biomedical Sciences, Thomas Jefferson University, ³Department of Genetics, Rutgers, The State University of New Jersey

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Como las variantes genéticas asociadas con enfermedades humanas empiezan a ser descubierto, se está convirtiendo en cada vez más importante para el desarrollo de sistemas con los que evaluar rápidamente la importancia biológica de las variantes identificadas. Este protocolo describe los métodos para evaluar la función del gen humano durante la meiosis femenina utilizando ovocitos de ratón.

Resumen

Aneuploidía embrionaria es la principal causa genética de la infertilidad en los seres humanos. La mayoría de estos eventos se origina durante la meiosis femenina, y aunque se correlacionó positivamente con la edad materna, edad sola no siempre es predictivo del riesgo de generar un embrión aneuploide. Por lo tanto, variantes genéticas podrían explicar la segregación incorrecta de cromosomas durante la ovogénesis. Dado que el acceso a ovocitos humanos es limitado para fines de investigación, se desarrollaron una serie de ensayos para estudiar la función del gen humano durante meiosis utilizando ovocitos de ratón. En primer lugar, el ARN mensajero (ARNm) del gen y la variante del gen de interés son microinyectados en ovocitos de ratón arresté a profase. Después de permitir tiempo para la expresión, ovocitos son liberados sincrónicamente en maduración meiótica para completar la meiosis I. Por marcado el ARNm con una secuencia de un reportero fluorescente, como la proteína verde fluorescente (Gfp), la localización de la proteína humana puede ser evaluada además de las alteraciones fenotípicas. Por ejemplo, ganancia o pérdida de función puede investigarse mediante el establecimiento de las condiciones experimentales que el producto génico para corregir errores meiotic. Aunque este sistema es ventajoso en la investigación de la función de la proteína humana durante la Oogénesis, adecuada interpretación de los resultados debe realizarse teniendo en cuenta que no es expresión de la proteína en los niveles endógenos y, a menos que controla (es decir, golpeado hacia fuera o hacia abajo), murinos homólogos también están presentes en el sistema.

Introducción

La infertilidad es una condición que afecta a 10-15% de la población humana de la edad reproductiva ¹, de los cuales casi la mitad busca tratamiento médico ². Aunque la etiología de la infertilidad es diversa y en muchos casos multifactoriales, la anormalidad genética más común en los seres humanos es aneuploidía embrionaria ³. Aneuploidía se define como la desviación (ganancia o pérdida) del número correcto de cromosomas en una célula. El fenómeno de la aneuploidía de los embriones humanos es común y aumenta con la edad maternal avanzada ⁴^,⁵