Describimos el desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro con dihidrotestosterona pelotilla para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como SOP.
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Artículo de método
Un modelo de ratón Hyperandrogenic para estudiar el síndrome de ovario poliquístico
En este artículo
Resumen
Resumen
Hyperandrogenemia juega un papel fundamental en la función reproductiva y metabólica en las hembras y es el sello distintivo del síndrome de ovario poliquístico. Desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro que imita a las mujeres con SOP es clínicamente significativo. En este protocolo, se describe dicho modelo. Mediante la inserción de una longitud de 4 mm de pastilla de polvo de cristal DHT (dihidrotestosterona) (longitud total de la pelotilla es 8 m m), y reemplazarlo cada mes, que son capaces de producir un modelo de ratón de SOP-like con doblez de 2 los niveles DHT suero mayor que los ratones no implantados con DHT (no-DHT). Se observó disfunción reproductiva y metabólica sin cambiar el peso corporal y composición corporal. Mientras que exhibe un alto grado de infertilidad, un pequeño subconjunto de estos ratones hembra SOP-como puede quedar embarazado y sus hijos muestran retraso de la pubertad y aumento de la testosterona como adultos. Este modelo de ratón magro como PCOS es una herramienta útil para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como PCOS.
Introducción
Hiperandrogenismo es el síndrome de ovario poliquístico (SOP) según los criterios del NIH y del exceso de andrógenos y SOP (AE-SOP) la sociedad. Las mujeres con SOP tienen dificultad para quedar embarazadas y han aumentado el riesgo de embarazo complicaciones1. Incluso si consiguen embarazadas, su descendencia femenina tiene una de2,de los resultados adversos para la salud3. Se han desarrollado modelos animales usando varias estrategias4,5,6,7,
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Protocolo
Aquí, presentamos protocolos detallados para la inserción y preparación de pellets DHT y para la prueba metabólica y reproductiva. Los ratones utilizados en este estudio fueron un fondo mixto (C57/B6, CD1, 129Sv) y se mantuvieron con alimento y agua ad libitum en un ciclo de luz/oscuridad de 14/10 h a 24 ° C en las instalaciones de edificio de Broadway de investigación animal en la Facultad de Universidad de Johns Hopkins de Medicina. Todos los procedimientos fueron aprobados por la Comisión de uso y de Johns Hopkins Universidad Animal Care.
1. crear el modelo de ratón de síndrome-como
- Preparación de pellets DHT<....
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Resultados
Niveles de DHT y prueba de tolerancia a la glucosa
Niveles de DHT se midieron de suero recolectado por tanto ELISA y por LC-MS según protocolo 1.24, 1.25 y 2.9, 3.0. Los valores absolutos DHT son diferentes entre espectrometría de masas y ELISA, sin embargo, el repliegue relativo (aproximadamente 2 veces) de vs DHT DHT no es similar de ambos ensayos y a través de experimentos de15,
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Discusión
Hiperandrogenismo es una característica clave de PCOS. Los niveles séricos DHT (dos veces más en ratones DHT que en ratones no-DHT) utilizados en este protocolo son inferiores a los reportados por otros investigadores en estudios previos y están calibrados para imitar proporcionalmente las mujeres con SOP5,19, 20,21. A diferencia de otros modelos, este modelo DHT 2 veces no altera el peso corp.......
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Divulgaciones
Nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue financiado por los institutos nacionales de salud (subvenciones R00-HD068130 a S.W.) y el centro de investigación de Diabetes de Baltimore: pilotos y viabilidad subsidio (S.W.).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Polvo cristalino de 5α-DHT | Sigma-Aldrich | A8380-1G | |
| Dow Corning Tubo Silastic | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0,04 pulgadas/1 mm de diámetro interior x0,085 pulgadas/2,15 mm de diámetro exterior |
| Adhesivo médico de silicona | Factor II, InC. | A-100 | |
| Gafas, batas de laboratorio, guantes y mascarillas. | |||
| 10 y micro; Puntas de pipeta L sin filtro | Portaobjetos de | 11113700 | |
| frotis | Fisher Scientific | 12-550-003 | |
| Diff Quik para tinción de células | Fisher Scientific | ||
| Lanceta | Fisher Scientific NC9416572 | ||
| Jeringa de 3 mL | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | |
| aguja adjunta: 20 G | BD | 305176 | |
| Regla: cualquier longitud superior a 10 cm con escala milimétrica. | |||
| Xilacina | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100 mg/mL |
| Clorhidrato de ketamina | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100 mg/mL |
| Grapa quirúrgica | AutoClip® Sistema, Fine Science Tool | 12020-00 | |
| Jeringa de insulina | BD | 329461 | 1/2 CC, dosis baja Jeringa de insulina U-100 |
| Trocar | Innovative Research of America | MP-182 | |
| Microscopio | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Alemania |
| Puñetazo de oreja | Fisher Scientific | 13-812-201 | |
| Testosterona rata/ratón ELISA kit | IBL | B79174 | |
| DHT kit ELISA | Alpha Diagnostic International | 1940 | |
| ultra glucómetro de un toque | Life Scan, Inc. | ||
| Tiras reactivas ultra de un toque Life | Scan, Inc. | ||
| Tubo Eppendorf | Fisher Scientific | 05-402-18 | |
| Hoja de afeitar | Fisher Scientific | 12-640 | |
| Clidox | |||
| Fisher Scientific 50587953 | Fabricante: Andwin Scientific 56616018 | ||
| Betadine Solución Antiséptica Walgreens | |||
| 3M Vetbond (cianoacrilato de n-butilo) | 3M Science. Aplicado a la vida |
Referencias
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....
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Reimpresiones y permisos
Etiquetas
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