Un modelo de ratón Hyperandrogenic para estudiar el síndrome de ovario poliquístico

Summary

Describimos el desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro con dihidrotestosterona pelotilla para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como SOP.

Abstract

Hyperandrogenemia juega un papel fundamental en la función reproductiva y metabólica en las hembras y es el sello distintivo del síndrome de ovario poliquístico. Desarrollo de un modelo de ratón de SOP-como magro que imita a las mujeres con SOP es clínicamente significativo. En este protocolo, se describe dicho modelo. Mediante la inserción de una longitud de 4 mm de pastilla de polvo de cristal DHT (dihidrotestosterona) (longitud total de la pelotilla es 8 m m), y reemplazarlo cada mes, que son capaces de producir un modelo de ratón de SOP-like con doblez de 2 los niveles DHT suero mayor que los ratones no implantados con DHT (no-DHT). Se observó disfunción reproductiva y metabólica sin cambiar el peso corporal y composición corporal. Mientras que exhibe un alto grado de infertilidad, un pequeño subconjunto de estos ratones hembra SOP-como puede quedar embarazado y sus hijos muestran retraso de la pubertad y aumento de la testosterona como adultos. Este modelo de ratón magro como PCOS es una herramienta útil para el estudio de la fisiopatología del SOP y la descendencia de estas presas como PCOS.

Introduction

Hiperandrogenismo es el síndrome de ovario poliquístico (SOP) según los criterios del NIH y del exceso de andrógenos y SOP (AE-SOP) la sociedad. Las mujeres con SOP tienen dificultad para quedar embarazadas y han aumentado el riesgo de embarazo complicaciones¹. Incluso si consiguen embarazadas, su descendencia femenina tiene una de^2,de los resultados adversos para la salud³. Se han desarrollado modelos animales usando varias estrategias^4,5,6,7,

Protocol

Aquí, presentamos protocolos detallados para la inserción y preparación de pellets DHT y para la prueba metabólica y reproductiva. Los ratones utilizados en este estudio fueron un fondo mixto (C57/B6, CD1, 129Sv) y se mantuvieron con alimento y agua ad libitum en un ciclo de luz/oscuridad de 14/10 h a 24 ° C en las instalaciones de edificio de Broadway de investigación animal en la Facultad de Universidad de Johns Hopkins de Medicina. Todos los procedimientos fueron aprobados por la Comisión de uso y de Johns Hopkins Universidad Animal Care.

1. crear el modelo de ratón de síndrome-como

1. Preparación de pellets DHT<....

Results

Niveles de DHT y prueba de tolerancia a la glucosa

Niveles de DHT se midieron de suero recolectado por tanto ELISA y por LC-MS según protocolo 1.24, 1.25 y 2.9, 3.0. Los valores absolutos DHT son diferentes entre espectrometría de masas y ELISA, sin embargo, el repliegue relativo (aproximadamente 2 veces) de vs DHT DHT no es similar de ambos ensayos y a través de experimentos de^15,

Discussion

Hiperandrogenismo es una característica clave de PCOS. Los niveles séricos DHT (dos veces más en ratones DHT que en ratones no-DHT) utilizados en este protocolo son inferiores a los reportados por otros investigadores en estudios previos y están calibrados para imitar proporcionalmente las mujeres con SOP^{5,19, 20,21}. A diferencia de otros modelos, este modelo DHT 2 veces no altera el peso corp.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Polvo cristalino de 5α-DHT	Sigma-Aldrich	A8380-1G
Dow Corning Tubo Silastic	Fisher Scientific	11-189-15D	0,04 pulgadas/1 mm de diámetro interior x0,085 pulgadas/2,15 mm de diámetro exterior
Adhesivo médico de silicona	Factor II, InC.	A-100
Gafas, batas de laboratorio, guantes y mascarillas.
10 y micro; Puntas de pipeta L sin filtro	Portaobjetos de	11113700
frotis	Fisher Scientific	12-550-003
Diff Quik para tinción de células	Fisher Scientific
Lanceta	Fisher Scientific NC9416572
Jeringa de 3 mL	Becton, Dickinson and Company (BD),	30985
aguja adjunta: 20 G	BD	305176
Regla: cualquier longitud superior a 10 cm con escala milimétrica.
Xilacina	Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise	NDC13985-704-10	100 mg/mL
Clorhidrato de ketamina	Hospira, Inc	NDC 0409-2051-05	100 mg/mL
Grapa quirúrgica	AutoClip® Sistema, Fine Science Tool	12020-00
Jeringa de insulina	BD	329461	1/2 CC, dosis baja Jeringa de insulina U-100
Trocar	Innovative Research of America	MP-182
Microscopio	Carl Zeiss Primo Star	415500-0010-001	Alemania
Puñetazo de oreja	Fisher Scientific	13-812-201
Testosterona rata/ratón ELISA kit	IBL	B79174
DHT kit ELISA	Alpha Diagnostic International	1940
ultra glucómetro de un toque	Life Scan, Inc.
Tiras reactivas ultra de un toque Life	Scan, Inc.
Tubo Eppendorf	Fisher Scientific	05-402-18
Hoja de afeitar	Fisher Scientific	12-640
Clidox
	Fisher Scientific 50587953		Fabricante: Andwin Scientific 56616018
Betadine Solución Antiséptica Walgreens
3M Vetbond (cianoacrilato de n-butilo)	3M Science. Aplicado a la vida