Zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-reperfusion
Summary
Ein Maus-Modell der zerebralen Ischämie-Reperfusion wird gegründet, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu untersuchen. Wir nach distal verbinden rechts mittlere zerebrale Arterie und rechts gemeinsame Halsschlagader und Blutfluss nach 10 oder 40 min der Ischämie wiederherstellen.
Abstract
In dieser Studie wird eine mittlere zerebrale Arterie (MCA) Okklusion Mausmodell eingesetzt, um zerebrale Ischämie-Reperfusion zu studieren. Eine reproduzierbare und zuverlässige Maus-Modell eignet sich zur Untersuchung der Pathophysiologie der zerebralen Ischämie-Reperfusion und mögliche therapeutische Strategien für Patienten mit Schlaganfall zu ermitteln. Variationen in der Anatomie des Kreises von Willis C57BL/6 Mäusen beeinflusst ihr Infarkt-Volumen nach zerebraler Ischämie-induzierte Verletzung. Studien haben gezeigt, dass distale MCA-Verschluss (MCAO) kann dieses Problem überwinden und eine stabile Infarkt-Größe. In dieser Studie stellen wir ein zwei-Schiff Okklusion Mausmodell der zerebralen Ischämie-Reperfusion durch die Unterbrechung des Blutflusses zu den richtigen MCA. Wir verbinden die richtige MCA und rechts gemeinsame Halsschlagader (CCA) nach distal und Wiederherstellung der Durchblutung nach einer gewissen Zeit der Ischämie. Diese Ischämie-Reperfusion Verletzungen induziert ein Infarkt stabile Größe und ein Verhaltens Defizit. Peripheren Immunzellen infiltrieren die ischämische Gehirn Infiltration innerhalb von 24 h. Darüber hinaus ist der neuronale Verlust im kortikalen Bereich weniger für eine längere Dauer der Reperfusion. Daher eignet sich dieses zwei-Schiff Okklusion-Modell für die Untersuchung der Immunantwort und neuronale Erholung im Bezugszeitraum nach zerebraler Ischämie Reperfusion.
Introduction
Der zerebralen Ischämie-Reperfusion-Maus-Modell ist eines der am weitesten verbreitete experimentelle Ansätze zur Untersuchung der Pathophysiologie der Ischämie-induzierte Gehirn Verletzungen1. Da zerebraler Ischämie-Reperfusion der peripheren Immunsystem aktiviert, peripheren Immunzellen in das ischämische Gehirn zu infiltrieren und verursachen neuronale Schäden2. Daher ist eine zuverlässige und reproduzierbare Mausmodell, die zerebrale Ischämie-Reperfusion imitiert erforderlich, um die Pathophysiologie des Schlaganfalls zu verstehen.
C57BL/6J (B6) Mäuse sind die am häufigsten verwendeten Dehnung in Schlaganfall-Experimente, weil sie genetisch leicht manipuliert werden können. Stehen zwei gemeinsame Modelle von MCAO/Reperfusion, die den Zustand der zerebralen Ischämie-Reperfusion zu imitieren. Das erste ist das Intraluminal Filament Modell des proximalen MCAO, wo ein Silikon-beschichtete Faden eingesetzt wird, um den Blutfluss in die MCA intravascularly verdecken; die verschließenden Filament wird anschließend entfernt, um Blut fließen3wiederherzustellen. Eine kurze Okklusion Dauer führt zu einer Läsion der subkortikalen Region, während eine längere Dauer der Okklusion Infarkte in den kortikalen und subkortikalen Bereichen verursacht. Das zweite Modell ist die Ligatur-Modell der distalen MCAO, einhergehende extravascular Ligatur der MCA und CCA, den Blutfluss durch die MCA zu reduzieren, nach der Blutfluss durch die Entfernung des Nahtmaterials und Aneurysmen Clip4wiederhergestellt wird. In diesem Modell ein Infarkt wird in den kortikalen Bereichen verursacht, und die Sterblichkeit ist gering. Da die Ligatur der MCAO/Reperfusion Modell Kraniektomien Ortsbild des distalen MCA aussetzen erfordert, kann die Website leicht bestätigt werden, und prüfen, ob die Durchblutung in den distalen MCA während des Verfahrens unterbrochen wird ist einfach.
B6-Mäuse zeigen erhebliche Unterschiede in der Anatomie der Kreis von Willis; Dies beeinträchtigt das Infarkt-Volumen nach zerebraler Ischämie-Reperfusion5,6,7. Derzeit kann dieses Problem durch Unterbindung der distalen MCA8überwunden werden. In dieser Studie stellen wir eine Methode für die MCA-Durchblutung zubeißt und damit nach einer vorgegebenen Zeitspanne Ischämie Reperfusion. Zwei-Schiff-Okklusion des zerebralen Ischämie-Reperfusion Modells induziert transiente Ischämie des Gebietes der MCA durch Unterbindung des rechten distalen MCA und richtige CCA mit Blutfluss wiederhergestellt nach einer gewissen Zeit der Ischämie. Dieses Modell MCAO/Reperfusion induziert ein Infarkt stabile Größe, ein Großteil der Gehirn-infiltrieren Immunzellen im ischämischen Gehirn und einem Verhaltens Defizit nach zerebraler Ischämie-Reperfusion4.
Protocol
Representative Results
Discussion
Die MCAO/Reperfusion-Maus-Modell ist ein Tiermodell häufig eingesetzt, um transiente Ischämie bei Menschen zu imitieren. Dieses Tiermodell kann auf transgenen und Knockout-Mäusen Stämme zu untersuchen, die Pathophysiologie des Schlaganfalls angewendet werden. Besonders kritisch sind mehrere Schritte im Protokoll. (1) die Microdrill muss vorsichtig verwendet werden, wenn Sie ein Loch in den Schädel, mit unangemessene Handlung leicht verursachen Blutungen aus der MCA erstellen. (2) die MCA dürfen nicht beschädigt, u…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch das Ministerium für Wissenschaft und Technologie, Taiwan (am meisten 106-2320-B-038-024, die meisten 105-2221-E-038-007-MY3 und die meisten 104-2320-B-424-001) und Taipei Medical University Hospital (107TMUH-SP-01) unterstützt. Dieses Manuskript wurde von Wallace wissenschaftliche Bearbeitung bearbeitet.
Materials
| Bone rongeur | Diener | Friedman | |
| Buprenorphine | Sigma | B-044 | |
| Cefazolin | Sigma | 1097603 | |
| Chloral hydrate | Sigma | C8383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-745 | |
| Electric clippers | Petpro | ||
| 10% formalin | Sigma | F5304 | |
| Germinator dry bead sterilizer | Braintree Scientific | ||
| Iris Forceps | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Iris Scissors | Diener | 9 cm | |
| Iris Scissors STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Micro-scissors-Vannas | HEISS | H-4240 | blade 7mm, 8 cm |
| Mouse brain matrix | World Precision Instruments | ||
| Non-invasive blood pressure system | Muromachi | MK-2000ST | |
| Operating Scissors STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Physiological Monitoring System | Harvard Apparatus | ||
| Razor blades | Ever-Ready | ||
| Stoelting Rodent Warmers | Stoelting | 53810 | Heating pad |
| Suture clip | Stoelting | ||
| Tweezers | IDEALTEK | No.3 | |
| Vetbond | 3M | 15672 | Surgical glue |
| 10-0 suture | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | Sigma | T8877 |
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