İskemi Reperfüzyon Hasarı Ayarında Metastatik Karaciğer Tümörlerinin Murine Modeli
Summary
Klinik olarak ilgili kolorektal kanser karaciğer metastazları (CRLM) tümör modeli ve karaciğer iskemi reperfüzyonunun (I/R) tümör büyümesi ve metastazdaki etkisini ayrıntılı olarak açıklıyoruz. Bu model daha iyi karaciğer metastatik büyüme cerrahi kaynaklı promosyon altında yatan mekanizmaları anlamak için yardımcı olabilir.
Abstract
Karaciğer iskemi ve reperfüzyon (I / R) yaralanma, ortak bir klinik sorun, birden fazla doku ve organ hasarı neden olduğu gösterilmiştir kaçınılmaz bir patofizyolojik süreç olmaya devam etmektedir. Son gelişmelere ve terapötik yaklaşımlara rağmen, genel morbidite özellikle altta yatan parenkimal anormallikleri olan hastalarda tatmin edici kalmıştır. Agresif kanser büyümesi ve metastaz bağlamında, cerrahi G/R’nin tümör nüksini düzenleyen organizatör olduğundan şüphelenilmektedir. Bu makalede, karaciğer I/R ve kolorektal karaciğer metastazının klinik olarak ilgili bir murine modelini tanımlamayı amaçlamaktadır. Bunu yaparken, karaciğer I/R’nin karaciğer metastazlarını teşvik etme deki etkilerini daha iyi anlamak için rutin araştırma uygulamaları için bu modeli oluşturmada ve mükemmelleştirmede diğer araştırmacılara yardımcı olmayı amaçlıyoruz.
Introduction
Karaciğer metastatik hastalık gelişimi için en yaygın sitelerinden biridir1. Mortalite neredeyse her zaman karaciğerde tümör büyümesi ile ilişkili komplikasyonlar atfedilebilir. Karaciğerde metastatik solid tümörlü hastalarda, cerrahi hastalık kontrolü ve olası bir küratif yaklaşım için önemli bir müdahale olmaya devam etmektedir. Ancak, hastaların büyük çoğunluğu sonuçta tekrarlayan hastalık ile mevcut,ağırlıklı olarak karaciğer2,3. Hepatik cerrahi sırasında intraoperatif kanama yaygındır, genellikle kan transfüzyonu ve kanamakontrolü için vasküler bağlama yöntemleri de dahil olmak üzere farklı teknik yaklaşımlar gerektirir. Ancak bu tür önlemler karaciğer dokusuna hepatik iskemi/reperfüzyona (I/R) neden olur. I/R’nin hepatosellüler fonksiyon üzerindeki yan etkileri iyi belgelenmiştir. Karaciğer I / R hakaret inflamatuar yollar4ile kan akışının restorasyonu sırasında inflamatuar kaskadlar tutuşturur . Sadece karaciğer I / R yaralanma karaciğer yetmezliğine katkıda yok, ama mevcut kanıtlar da I / R yaralanma tümör hücre adezyonu uyarır gösterir, ve metastaz oluşumu ve mevcut mikrometastatik hastalığın büyümesini teşvik5. Biz daha önce cerrahi stres sadece birincil tümörün büyümesine yardımcı olur bağışıklık hücrelerinin aktivasyonu neden olduğunu bildirdin, ama aynı zamanda dolaşım içinde kanser hücrelerini yakalayarak metastaz kolaylaştırır6.
Burada ayrıntılı bir karaciğer metastaz fare tümör modeli kurmak için bir teknik açıklar. Bu modelde, hepatektomiler sırasında klinik olarak mevcut cerrahi strese vekil olarak hareket eden hepatik iskemi reperfüzyon yaralanmasını tetiklemek için bir yöntem de salıyoruz. Kombine kanser enjeksiyonu ve hepatik G/K yöntemleri primer tümör rezeksiyonu geçirmiş hastalarda CRLM gelişimini başarıyla yorumlayabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu el yazmasında açıklanan hayvan modeli iki ana yaklaşıma dayanmaktadır. Birincisi, kanser hücrelerinin karaciğer loblarında lokalize ve çoğalabilir yeteneğini tanımaktır. İkincisi ise tümör büyümesini ve metastazları etkileyen hepatik iskemi reperfüzyon hasarının etkisini incelemektir. Bu model, immünyonidik bir farede sekonder metastaz yokluğunda karaciğer metastazlarının ilgili çalışmasına izin verir. Model metastatik verimlilik sorularını ele yararlıdır, hücre sağkalım ekstrava…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar sara Minemyer ve Alexander Comerci dilsel revizyon için teşekkür ederiz.
Materials
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
Referencias
- Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. Patterns of metastasis in colon and rectal cancer. Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).
- Oki, E., et al. Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis. Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).
- Wolpin, B. M., Mayer, R. J. Systemic treatment of colorectal cancer. Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).
- van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).
- Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations. Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).
- Tohme, S., et al. Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress. Investigación sobre el cáncer. 76 (6), 1367-1380 (2016).
- Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. Orthotopic mouse model of colorectal cancer. Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).
- Elkin, M., Vlodavsky, I. Tail vein assay of cancer metastasis. Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).
- Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).
- Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. e. m. a. u. d. -., Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
- Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
- Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).
