וידאו זה מציג את התהליך של כל תא מהדק הקלטות מתח הפרוסה הרשתית של נמר מימיים סלמנדרה. אנו מדגימים את הכנת הפרוסה וכן כיצד לבצע הקלטות מהדק תיקון במהלך גירוי ויזואלי של הרשתית.
Abstract
אנו משתמשים כל תא מהדק טכניקה טלאי ללמוד את המעגלים הסינפטי שבבסיס עיבוד המידע החזותי ברשתית. בסרטון הזה, אנו נדריך אותך בתהליך של ביצוע כל תא הקלטות של זרמים מעוררים אור של תאים בודדים בהכנת פרוסה הרשתית. אנו משתמשים נמר מימיים כמו סלמנדרה במודל חיה. נתחיל בתיאור דיסקציה של העין ולהראות כמה פרוסות מורכבים עבור הקלטות אלקטרו. לאחר פרוסה ממוקמת בחדר ההקלטה, אנו מדגימים כיצד לבצע כל תא מהדק הקלטות מתח. לאחר מכן, אנו הפרויקט גירויים חזותיים על photoreceptors של הפרוסה לעורר אור עורר תגובות הנוכחי. במהלך ההקלטה אנו perfuse את הפרוסה עם סוכני תרופתי, לפיה מערכת ערוץ 8-זלוף מאפשר לנו לעבור במהירות בין סוכנים שונים. הכנה פרוסה רשתית נעשה שימוש נרחב הרשתית עבור הקלטות מהדק תיקון, בפרט ללמוד amacrine או תאים דו קוטבית, אשר אינם נגישים בהכנת כל הר.
Protocol
פתרונות פתרון תאיים בתאי הגנגליון (מ"מ): 100-K-gluconate, 8 KCl, 1 MgCl 2, 1 EGTA, 10 HEPES, 4 ATP, GTP 0.5, 90 מיקרומטר Sulforhodamine B (עבור כתמים), מותאם pH = 7.4 עם KOH פתרון תאיים עבור תאים דו קוטבית (מ"מ): 90 K-gluconate, 8 KCl, 1 Mg…
Discussion
יתרונות:
כל סוגי תאים נגישים
זיהוי קל של סוגי תאים, בפרט אם פלורסנט לצבוע מתווסף פתרון האלקטרודה
סוכני תרופתי יכול בקלות להגיע תאים היעד
<li style=";text-align:right;direction:rtl…
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Multiclamp 700A
Patch Clamp Amplifier
Molecular Devices
SZX9
Dissection Micropscope
Olympus
BX50WI
Upright Microscope
Olympus
Equipped with 40x, 10x water immersion objective, fluorescent filters and mercury lamp
Werner, B., Cook, P. B., Passaglia, C. L. Whole-cell Recordings of Light Evoked Excitatory Synaptic Currents in the Retinal Slice. J. Vis. Exp. (17), e771, doi:10.3791/771 (2008).