Impressão microcontact de Proteínas de Biologia Celular
Summary
Microcontact impressão é usado extensivamente às proteínas padrão e outras moléculas nas superfícies de materiais. Demonstramos as etapas básicas desse processo, carimbar padrões de fibronectina em vidro.
Abstract
A capacidade de proteínas e outras biomoléculas padrão sobre substratos é importante para captar a complexidade espacial do ambiente extracelular. Desenvolvimento da impressão microcontact pelo grupo Whitesides (<a href="http://gmwgroup.harvard.edu/"> Http://gmwgroup.harvard.edu/</a>), Em meados da década de 1990 revolutionalized neste campo, fazendo microeletrônica / técnicas de microfabricação acessível a laboratórios focados em ciências da vida. Implementações iniciais deste método utilizado PDMS (polidimetilsiloxano) selos para criar padrões de produtos químicos nas superfícies de materiais funcionalizados<sup> 1</sup>. Desde então, uma série de abordagens inovadoras foram desenvolvidos para moléculas de outro padrão, incluindo proteínas<sup> 2</sup>. Este vídeo demonstra o processo básico de criação de selos de PDMS e as utiliza para proteínas padrão, como estes passos são difíceis de expressar em palavras com precisão. Nós nos concentramos em padronização da proteína fibronectina da matriz extracelular sobre lamínulas de vidro como um exemplo específico de padronização. Um componente importante do processo de impressão microcontact é um mestre topológico, a partir do qual os selos são lançados; as regiões levantados e abaixados do mestre são espelhados no selo e definir o padrão final. Tipicamente, um mestre consiste em um wafer de silício revestido com fotorresiste e depois modelado por fotolitografia como é feito aqui. Criação de mestres contendo um padrão específico requer equipamento especializado, e é melhor abordado em consulta com um centro de fabricação ou instalação. No entanto, quase todos os suportes com a topologia pode ser usado como um mestre, como redes de difração de plástico (ver Reagentes para um exemplo), e tais mestres serendipitous fornecer prontamente disponíveis, os padrões simples. Este protocolo começa no ponto de ter um mestre na mão.
Protocol
Discussion
O processo de impressão microcontact é conceitualmente simples e muito robusto, tendo sido aplicada a padronização uma ampla gama de moléculas em uma variedade de substratos. No entanto, este processo continua a ser algo de uma arte. A geometria específica do padrão a ser criada, a proteína a ser modelada, peso aplicado, e revestimento / condições stamping afetam a qualidade de estamparia. Por exemplo, muito pouco de peso, aplicada a características de grande porte, muitas vezes resulta em falhas no padrão de como pode ser visto…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Plasma Cleaner | Harrick Scientific Products, Inc. | PDC-32G | ||
| Desiccator | Nalgene | 5315-0150 | ||
| PBS | Reagent | Invitrogen | 10010-072 | |
| Protein labeling kit | Reagent | Invitrogen | A30006 | |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F2006 | |
| Staining rack | Reagent | Thomas Scientific | 8542E40 | |
| Coverslips | Reagent | Fisher Scientific | 12-544-12 | |
| Sylgard 184 | Reagent | Ellsworth Adhesives | 184 Sil Elast Kit | |
| Diffraction Grating | Reagent | Edmund Scientific | 3040267 |
References
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- Kumar, A., Whitesides, G. M. Features of Gold Having Micrometer to Centimeter Dimensions can be Formed Through a Combination of Stamping with an Elastomeric Stamp and an Alkanethiol “Ink” Followed by Chemical Etching. Applied Physics Letters. 63, 4-4 (1993).
- St. John, P. M. Preferential Glial Cell Attachment to Microcontact-printed Surfaces. Journal of Neuroscience Methods. 75, 171-171 (1997).
- Kam, L., Boxer, S. G. Cell adhesion to protein-micropatterned-supported lipid bilayer membranes. Journal of Biomedical Materials Research. 55, 487-487 (2001).
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