使用FURA - 2上午皮层神经元的钙成像

Summary

钙信号，发挥了关键作用，在许多细胞过程，包括基因表达，存活和分化。在这里，我们将演示如何执行使用FURA – 2的钙成像。钙成像是一种宝贵的的工具来研究细胞内钙离子的实时调控及其信号传导的调控。

Abstract

钙成像是一种常见的的技术，用于测量培养细胞中的钙信号。钙成像技术的优势，这是BAPTA为基础的有机分子，Ca2 +离子结合，改变其光谱特性的钙染料。钙染料分为两大类，如FURA – 2和Indo – 1和单波长染料如荧光4的比例度量的染料。比率度量染料改变他们的激发或发射光谱响应钙，使细胞内钙离子浓度在不同的波长的荧光发射或激发的比例确定。使用单波长探测器的比例度量的染料的主要优势是，信噪比是独立的染料浓度，光照强度，和光路长度，使细胞内钙离子的浓度，以确定这些文物的独立。最常见的钙指标之一是FURA – 2，它已经在505 nm处的发射峰从340 nm处的激发峰，380 nm的钙结合。在这里，我们描述了使用FURA – 2，在神经元和其他可兴奋细胞来衡量细胞内钙升高。

Protocol

细胞培养细胞可以种植使用成熟的技术，但必须在1＃玻璃涂上与蜂窝胶粘剂（如聚赖氨酸，polyornithine或层粘连蛋白），以防止细胞分离或在移动成像实验盖玻片镀。 解决方案可以使用各种生理的解决方案，包括细胞培养基钙成像实验。然而，重要的是，以确保该解决方案是无酚红，这大大增加了荧光背景。我们使用Tyrodes解决方案，这?…

Discussion

在此演示中，我们已经经历了使用FURA – 2上午进行钙成像的所有步骤。我们作为一个模型的皮层神经元，但可用于实时测量多种细胞的细胞内钙离子钙成像。当执行此过程，重要的是用盖玻片代替塑料，因为塑料是经常在荧光紫外线的波长，这使得成像困难。此外，重要的是预涂层与polyornithine和层粘连蛋白的盖玻片，以防止从分离的细胞。最后，重要的是要记住以避免产生气泡的解决方案，通过成像室时灌流。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
New Item	Fura-2 AM	Invitrogen	F1221	Protect from light
New Item	DMSO	EM Science	MX1457-6	Keep in dry place to prevent hydration
New Item	Albumin from bovine serum	Sigma	A8022-100G	Store at 4°
New Item	Imaging Chamber	Warner Instruments	Model RC-20H
New Item	Microscope	Nikon	Eclipse TE2000-U
New Item	Potassium chloride	SIGMA	P9333-500G
New Item	Calibration Kit	Molecular Probes	F6774	Protect from light