रेटिना की क्षैतिज स्लाइस तैयार
Summary
परंपरागत रूप से ऊर्ध्वाधर टुकड़ा और रेटिना की तैयारी पूरी माउंट रेटिना सर्किट के समारोह का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. यहाँ, हम उपन्यास विधि टुकड़ा करने की क्रिया रेटिना बरकरार न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान आकारिकी की रक्षा का वर्णन.
Abstract
परंपरागत रूप से ऊर्ध्वाधर टुकड़ा और रेटिना की तैयारी पूरी माउंट रेटिना सर्किट के समारोह का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, amacrine कोशिकाओं के रूप में रेटिना न्यूरॉन्स के कई उनके dendrites क्षैतिज विस्तार, ताकि कक्षों की आकारिकी ऊर्ध्वाधर स्लाइसें में बुरी तरह क्षतिग्रस्त हो माना जाता है. पूरे माउंट तैयारी में, विशेष रूप से पैच – दबाना रिकॉर्डिंग के लिए, मध्यम परत में रेटिना न्यूरॉन्स आसानी से glial सेल (म्यूएलर सेल) endfeets के व्यापक कवरेज के कारण सुलभ नहीं हैं. यहाँ, हम उपन्यास विधि टुकड़ा करने की क्रिया रेटिना बरकरार न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान आकारिकी की रक्षा का वर्णन. टुकड़ा क्षैतिज vibratome slicer का उपयोग रेटिना की भीतरी परत में बनाया गया था के बाद रेटिना कम तापमान के पिघलने agarose जेल में एम्बेडेड था. रेटिना के इस क्षैतिज टुकड़ा तैयार करने में, हम उनके आकारिकी साथ तुलना में पैच दबाना रिकॉर्डिंग, कैल्शियम इमेजिंग तकनीक, immunocytochemistry, और RT-पीसीआर एकल कक्ष का उपयोग करके रेटिना न्यूरॉन्स के समारोह का अध्ययन किया.
Protocol
Discussion
रेटिना के क्षैतिज टुकड़ा तैयारी के कई महत्वपूर्ण लाभ कर रहे हैं.
सबसे पहले, कोशिकाओं है कि dendrites क्षैतिज amacrine कोशिकाओं और क्षैतिज कोशिकाओं के रूप में, विस्तार की आकारिकी, संरक्षित है. यह दिखाया गया है कि रेटिना ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम डीआरएस धन्यवाद. रिचर्ड एच. Masland और हमारे मूल्यवान सलाह और सुझाव देने के रेटिना के क्षैतिज टुकड़ा तैयारी की प्रक्रिया स्थापित करने के लिए Akimichi Kaneko.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
References
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
