網膜の水平スライス標本
Summary
伝統的に垂直方向のスライスと網膜のホールマウントの準備は、網膜回路の機能を研究するために使用されている。ここで、我々は、無傷の網膜神経細胞の樹枝状形態を維持する方法をスライス小説を説明します。
Abstract
伝統的に垂直方向のスライスと網膜のホールマウントの準備は、網膜回路の機能を研究するために使用されている。しかし、このようなアマクリン細胞など網膜の神経細胞の多くは、細胞の形態が著しく垂直スライスに破損することになっているように、水平にそれらの樹状突起を展開します。ホールマウントの準備では、特にパッチクランプ記録のために、中間層の網膜神経細胞が原因でグリア細胞（ミュラー細胞）■endfeetsの広範な範囲に簡単にアクセスできません。ここで、我々は、無傷の網膜神経細胞の樹枝状形態を維持する方法をスライス小説を説明します。網膜は、低温融解アガロースゲル内に埋め込まれた後に、スライスはビブラトームスライサーを用いて網膜の内側の層で水平に行われました。網膜のこの水平方向のスライス標本では、我々はパッチクランプ記録、カルシウムのイメージング技術、免疫細胞化学、および単一細胞RT – PCRを使用することにより、その形態と比較して網膜神経細胞の機能を調べた。
Protocol
Discussion
網膜の水平スライス標本のいくつ重要利点があります。
最初、などアマクリン細胞や水平細胞として水平デンドライトを拡大細胞、、のモフォロジーは保持さ。それが生理プロパティとともに細胞の形態を比較するかなり重要であるよう、網膜におけるアマクリン細胞の20種類（マクニールおよびマスランド、1998）以上あることが示された。
秒、全体-マウント網膜で、グリア細胞秒endfeetsの広範…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は、博士に感謝する。網膜の水平スライスの準備の手順を確立するために、貴重なアドバイスや提案を与えるためのリチャードH.マスランドと明道金子。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
References
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
