Monitoraggio ad alta risoluzione video di locomozione per adulti in Drosophila melanogaster
Summary
Lo studio del comportamento motorio complesso in<em> Drosophila melanogaster</em> Dipende dalla capacità di quantificare i cambiamenti in movimento una mosca dato. Questo articolo viene illustrato come eseguire questa operazione utilizzando ad alta risoluzione sistema di tracciamento.
Abstract
Vola fornire un importante modello per lo studio del comportamento complesso a causa della pletora di strumenti genetici a disposizione dei ricercatori in questo campo. Studiare il comportamento motorio in<em> Drosophila melanogaster</em> Si basa sulla capacità di essere in grado di quantificare i cambiamenti in atto durante o in risposta a un determinato compito. Per questo motivo, ad alta risoluzione sistema di monitoraggio video, come quello descritto in questo articolo, è un valido strumento per la misurazione locomozione in tempo reale. Il nostro protocollo prevede l'utilizzo di un impulso d'aria iniziale per rompere il momento vola, seguito da un periodo di trenta riprese secondo in una camera quadrata. Un programma di monitoraggio viene poi utilizzato per calcolare la velocità istantanea di ogni volo all'interno della camera con incrementi di 10 msec. Il software di analisi compila questi dati, e le uscite una serie di parametri quali la velocità media, velocità massima, il tempo trascorso in movimento, accelerazione, ecc Questo protocollo discuterà corretta alimentazione e gestione delle mosche per le attività comportamentale, la gestione vola senza anestesia o immobilizzazione , la creazione di un ambiente controllato e l'esecuzione del test, dall'inizio alla fine.
Protocol
Discussion
Nella nostra impostazione, un impulso di aria moderatamente forte movimento si arresta temporaneamente volare. Quando l'aria pulsata termina, le mosche vengono rilasciati da questo stato stazionario e locomote normalmente, come mostrato in figura 2. Perché questo impulso di aria sincronizza in modo efficace locomozione della popolazione, lo usiamo per cominciare il processo in modo da poter anche studiare l'insorgenza del movimento a seguito di un momento di rottura stimolo. Il test può comunque essere fatto s…
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto dal National Institutes of Health di Grant R01 GM54408 assegnato a LC Griffith. Vorremmo ringraziare Fred Wolf per il suo aiuto nel progettare la nostra camera di piazza e la creazione di nostri test, Frank Mello alla macchina negozio Brandeis University per costruire la nostra camera, e Dan Valente e Tim Lebestky per le conversazioni utili per quanto riguarda questioni di analisi.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Square Chamber | Tool | Machine Shop | N/A | Design from Wolf et al. 20021 |
| Digital Camera | Camera | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| Flowmeter | Tool | Cole Parmer | SY-32003-12 | |
| Light Box | Tool | DNASTAR, Inc. | Seq-Easy | |
| Charcoal Filter | Tool | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | Software | Soll technologies | N/A | www.solltechnologies.com |
References
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International review of cytology. 163, 43-104 (1995).
- Martin, J. R., Ollo, R. A new Drosophila Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase (Caki) is localized in the central nervous system and implicated in walking speed. The EMBO journal. 15 (8), 1865-1876 (1996).
- Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B. Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster. Science. 298, 2010-2012 (2002).
