Hochauflösendes Video Tracking von Locomotion in Adult Drosophila melanogaster
Summary
Die Untersuchung der komplexen Bewegungsapparat Verhalten in<em> Drosophila melanogaster</em> Ist abhängig von der Fähigkeit, Veränderungen in einem bestimmten Fliege Bewegung zu quantifizieren. Dieser Artikel zeigt, wie Sie dies tun mit einer hochauflösenden Tracking-System.
Abstract
Fliegen ein wichtiges Modell für die Untersuchung komplexer Verhalten aufgrund der Vielzahl von genetischen Werkzeugen zur Verfügung, um Forscher in diesem Bereich. Studieren Bewegungsapparates Verhalten in<em> Drosophila melanogaster</em> Beruht auf der Fähigkeit der Lage sein, Veränderungen in der Bewegung während oder in Reaktion auf eine bestimmte Aufgabe zu quantifizieren. Aus diesem Grund ist eine hochauflösende Video-Tracking-System, wie die, die wir beschreiben, in diesem Papier, ein wertvolles Werkzeug zur Messung der Fortbewegung in Echtzeit. Unser Protokoll beinhaltet die Verwendung einer ersten Luftimpuls, um die Fliegen Impulse, die von 1 / 32 Drehzeit in einer quadratischen Kammer folgte brechen. Ein Tracking-Programm wird dann verwendet, um die momentane Geschwindigkeit der einzelnen fliegen innerhalb der Kammer in 10 ms-Schritten berechnen. Analyse-Software kompiliert dann diese Daten und gibt eine Vielzahl von Parametern wie Durchschnittsgeschwindigkeit, Höchstgeschwindigkeit, die Zeit in Bewegung verbracht, Beschleunigung, etc. Dieses Protokoll wird richtige Fütterung und Management von Fliegen für Verhaltenstherapie Aufgaben zu besprechen, die Handhabung Fliegen ohne Betäubung oder Immobilisierung , die Einrichtung einer kontrollierten Umgebung, und läuft der Test von Anfang bis Ende.
Protocol
Discussion
In unserer Einrichtung, ein mäßig starkes Luftimpuls vorübergehend stoppt fliegen Bewegung. Wenn die Luft Impuls endet, werden die Fliegen von diesem stationären Zustand und Fortbewegung in der Regel frei, wie in Abbildung 2 dargestellt. Da diese Luft-Impuls effektiv synchronisiert Fortbewegung der Bevölkerung, verwenden wir sie in den Prozess zu beginnen, so dass wir auch studieren können, das Einsetzen der Bewegung nach einem Momentum-breaking Reiz. Der Test kann jedoch ohne Luftimpuls getan werden, da Bewegungs…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health Grants R01 GM54408 verliehen LC Griffith unterstützt. Wir möchten Fred Wolf für seine Hilfe bei der Gestaltung unserer quadratischen Kammer und der Einrichtung unseres Tests, Frank Mello an der Brandeis University Werkstatt für den Aufbau unserer Kammer, und Dan Valente und Tim Lebestky für hilfreiche Gespräche über Analyse Fragen danken.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Square Chamber | Tool | Machine Shop | N/A | Design from Wolf et al. 20021 |
| Digital Camera | Camera | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| Flowmeter | Tool | Cole Parmer | SY-32003-12 | |
| Light Box | Tool | DNASTAR, Inc. | Seq-Easy | |
| Charcoal Filter | Tool | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | Software | Soll technologies | N/A | www.solltechnologies.com |
References
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International review of cytology. 163, 43-104 (1995).
- Martin, J. R., Ollo, R. A new Drosophila Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase (Caki) is localized in the central nervous system and implicated in walking speed. The EMBO journal. 15 (8), 1865-1876 (1996).
- Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B. Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster. Science. 298, 2010-2012 (2002).
