快速，灵敏的胶体考马斯亮G - 250染色蛋白聚丙烯酰胺凝胶
Summary
该视频应普及胶体考马斯亮蓝G – 250染色协议，根据康<em>等。</em平均4凝胶吴蛋白质检测。染色完成后2小时内，没有任何努力。我们经常使用凝胶为基础的蛋白质组学分析的目的在康有为的协议。
Abstract
考马斯亮蓝（CBB）是常用的SDS – PAGE分离蛋白的可视化，提供一个简单的染色程序和高定量的染料。此外，它是完全兼容与质谱蛋白质鉴定。但尽管有这些优势，CBB被认为是比银或荧光染色法和较不敏感，因此很少用于分析凝胶为基础的蛋白质组学方法检测蛋白质。
已作出了一些改进原来的考马斯协议 1增加CBB灵敏度。两个重大修改，以提高转换成胶体粒子的染料分子的低丰度蛋白质的检测：在1988年，Neuhoff和他的同事们应用到的CBB G – 250基于染色溶液2 20％甲醇和硫酸铵的浓度较高，和2004年Candiano等。建立了蓝银在硫酸铵和甲醇 3在场的CBB G – 250使用磷酸。然而，所有这些修改，只允许约10毫微克蛋白质的检测。一个广泛琐细的协议，胶体考马斯染色康有为等人在2002年发表了他们关于修改Neuhoff胶体CBB染色协议的络合物质。取而代之的硫酸铵，他们用硫酸铝和甲醇毒性较低的乙醇 4取代。的新型铝为基础的染色，在康有为的研究中表现出卓越的灵敏度，可检测低为1毫微克/乐队（磷酸二）与灵敏度变化不大，对蛋白质而定。
在这里，我们展示了康有为的快速和敏感的胶体考马斯亮蓝染色分析目的蛋白的协议的应用程序。我们将说明使用二维凝胶经常在我们的工作小组进行快速和容易的协议。
Protocol
Discussion
创新或只是另一种考马斯亮协议？
目前存在与考马斯亮蓝染色程序的多个协议。他们大多导致轻微或重大修改Neuhoff和同事2最常用的协议之一。康有为的协议的基础上Neuhoff的公式。但它真的蛋白质组学研究的一个替代的考马斯染色的方法吗？我们将图片的两个主要问题，检测限和可用性，证据表明，它绝对是一个有益的染色协议相比其他考马斯亮协议，甚至银色和荧…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢为准备和染色1 – D凝胶Nicola博士Wiethölter。
这项工作是由来自德意志研究联合会（GRK 1089/project 5 ND和SM）的资助，由来自于尔根Manchot的研究奖学金基金会于Nd支持。
Materials
| Name of product | Company | Catalogue No. | Comments |
| For IEF and SDS-PAGE: | |||
| Immobiline DryStrip gels | GE Healthcare | 17-6001-94 | Can even be used 2 years after expire date. |
| Immobiline DryStrip Reswelling Tray | GE Healthcare | 80-6371-84 | Do not clean with organic solvents. Designed for 7-18 cm IPG-strips. |
| Immobiline DryStrip Kit | GE Healthcare | 18-1004-30 | Includes a tray, electrode holder, anode and cathode electrodes, aligner and sample cup bar and sample cups. |
| EPS 3501 XL Power Supply | GE Healthcare | 18-1130-05 | Supplies voltage up to 3500 V. |
| Multiphor II Electrophoresis Unit | GE Healthcare | 18-1018-06 | Movable electrodes enable IEF in IPG strips of all length (7-24 cm IPG strips) |
| PerfectBlue gel system Twin S | Peqlab | 45-1010-C | SDS-PAGE in 10×10 cm mini-gel format. Gel chamber includes a cooling system. |
| For colloidal Coomassie G-250 staining: | |||
| staining dishes with lids | VWR | 216-3412 | Fits for mini-gels. Stackable on shaker. |
| aluminium sulfate-18-hydrate | Merck | 1.01102.5000 | We made best experience with Merck. Just available in 5 kg package. |
| orthophosphoric acid | Prolabo | 20 624.295 | Sold in glass bottles. |
References
- Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips. Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).
- Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250. Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).
- Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).
- Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).
- Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels. Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).
