تغيير طبيعة جل بولي أكريلاميد الكهربائي اليوريا (PAGE اليوريا)
Summary
تغيير طبيعة استخدام هلام بولي أكريلاميد الكهربائي لفصل واحد اليوريا الذين تقطعت بهم السبل الحمض النووي الريبي أو تصل إلى حد 500 النيوكليوتيدات. اليوريا في تركيبة مع عينات يبدل طبيعة الحرارة وضيق واحد غير منظمة الهجرة داخل المصفوفة هلام وفقا لوزنها الجزيئي.
Abstract
PAGE اليوريا أو تغيير طبيعة الكهربائي اليوريا هلام بولي أكريلاميد توظف 6-8 اليوريا M ، الذي يبدل طبيعة الحمض النووي الريبي الثانوية أو هياكل ، ويستخدم لانفصالهما في المصفوفة هلام بولي أكريلاميد على أساس الوزن الجزيئي. شظايا بين 2-500 القواعد ، مع وجود اختلافات طول صغيرة مثل النوكليوتيدات واحد ، يمكن فصلها باستخدام هذا الأسلوب 1. الهجرة من العينة يعتمد على تركيز مادة الأكريلاميد المختار. نسبة مئوية أعلى من بولي أكريلاميد يحل شظايا الوزن الجزيئي أقل. مزيج من اليوريا ودرجات الحرارة من 45-55 درجة مئوية خلال تشغيل هلام يسمح لفصل الحمض النووي غير منظم أو جزيئات الحمض النووي الريبي.
عموما مطلوب هذا الأسلوب لتحليل الحمض النووي الذين تقطعت بهم السبل أو تنقية واحد أو شظايا الحمض النووي الريبي ، مثل [أليغنوكليوتيد] توليفها أو المسمى أو المنتجات من ردود الفعل الأنزيمية الانقسام.
في هذه المقالة الفيديو نظهر كيفية إعداد وتشغيل بولي أكريلاميد اليوريا تغيير طبيعة المواد الهلامية. نصائح يتم تضمين التقنية ، بالإضافة إلى 1،2 البروتوكول الأصلي.
Protocol
Discussion
- الحدة الفرقة تعتمد على عدة عوامل. وينبغي أن حجم العينة لتحميل أشرطة حادة تكون صغيرة قدر الإمكان ، من الناحية المثالية أي بين 1-5 ميكرولتر. ومع ذلك ، يمكن تحميل ما يصل إلى 15 ميكرولتر التي تضمن القرار ما زالت مقبولة. حجم العينة أقل من النتائج أكثر وضوحا في الع…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل مجلس سنغافورة البحوث الأكاديمية (ARC) [منح عدد 90/07]. نشكر Radiodurans للدعم.
References
- Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Biochimie. 14, 3787-3794 (1975).
- Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).
- . . PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).
