Denaturing यूरिया polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन (यूरिया पृष्ठ)
Summary
Denaturing यूरिया polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन एकल असहाय डीएनए को अलग करने या 500 nucleotides के एक सीमा के लिए शाही सेना के लिए प्रयोग किया जाता है. गर्मी denatures नमूने और असंरचित एकल किस्में के साथ संयोजन में यूरिया उनके आणविक वजन के अनुसार जेल मैट्रिक्स के भीतर विस्थापित.
Abstract
यूरिया पन्ना या यूरिया polyacrylamide जेल वैद्युतकणसंचलन denaturing 6-8 एम यूरिया, जो माध्यमिक डीएनए या शाही सेना संरचनाओं denatures और एक polyacrylamide जेल आणविक भार के आधार पर मैट्रिक्स में उनकी जुदाई के लिए प्रयोग किया जाता है रोजगार. 2 से 500 अड्डों के बीच टुकड़े, लंबाई के रूप में एक एकल nucleotide के रूप में छोटे मतभेदों के साथ, इस विधि 1 का उपयोग कर अलग किया जा सकता है. नमूने के प्रवास चुना acrylamide एकाग्रता पर निर्भर है. Polyacrylamide की एक उच्च प्रतिशत कम आणविक वजन टुकड़े का निराकरण करता है. ° सी जेल चलाने के दौरान यूरिया और 45-55 के तापमान के संयोजन असंरचित डीएनए या शाही सेना अणु की जुदाई के लिए अनुमति देता है.
सामान्य में इस विधि का विश्लेषण करने के लिए या एकल असहाय डीएनए या शाही सेना के टुकड़े, जैसे संश्लेषित या लेबल oligonucleotides या उत्पादों एंजाइमी दरार प्रतिक्रियाओं से शुद्ध की आवश्यकता है.
हम इस वीडियो लेख में बताते हैं कैसे तैयार करने और denaturing यूरिया polyacrylamide जैल चला. तकनीकी सुझावों, मूल प्रोटोकॉल 1,2 करने के लिए इसके अलावा में शामिल हैं.
Protocol
Discussion
- बैंड तीखेपन कई कारकों पर निर्भर करता है. नमूना तेज बैंड के लिए लोड की मात्रा के रूप में संभव के रूप में छोटे यानी 1-5 μl के बीच आदर्श होना चाहिए. हालांकि, ऊपर से 15 μl लोड किया जा सकता है जो अभी भी स्वीकार्य संकल्प सुनि…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम सिंगापुर शैक्षिक अनुसंधान (एआरसी) [अनुदान संख्या 90/07] कौंसिल द्वारा समर्थित किया गया. हम समर्थन के लिए Radiodurans धन्यवाद.
References
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