Denatüre Üre Poliakrilamid Jel Elektroforez (Üre SAYFA)
Summary
Denatüre üre poliakrilamid jel elektroforezi ayrı tek iplikli DNA veya RNA 500 nükleotidlerin bir sınıra kadar kullanılır. Üre, ısı denatüre örnekleri ve yapılandırılmamış tek iplikçikler ile birlikte moleküler ağırlığına göre jel matriks içinde göç ederler.
Abstract
Üre SAYFA veya üre poliakrilamid jel elektroforezi denatüre ikincil DNA veya RNA yapıları yıkılır ve molekül ağırlığı dayalı bir poliakrilamid jel matris ayrılması için kullanılan 6-8 M üre, istihdam etmektedir. 2 ila 500 üsleri arasında parçaları, bir tek nükleotid gibi küçük uzunluğu farklılıklar, bu yöntemi kullanarak 1 ayrılabilir. Örnek göç seçilen akrilamid konsantrasyonuna bağlıdır. Poliakrilamid bir daha yüksek oranda düşük molekül ağırlıklı parçaları giderir. Kombinasyonu üre ve sıcaklıklar 45-55 ° C jel çalışması sırasında yapılandırılmamış DNA veya RNA molekülleri birbirinden ayrılması için izin verir.
Genel olarak bu yöntem, tek iplikli DNA veya RNA parçaları, enzimatik parçalanma reaksiyonlarını sentezlenmiş veya etiketli oligonükleotidler veya ürünlerin analiz veya arındırmak için gereklidir.
Bu video makalede denatüre üre poliakrilamid jeller hazırlamak ve çalıştırmak için nasıl göstermektedir. Orijinal protokol 1,2 ek olarak, teknik ipuçları yer almaktadır.
Protocol
Discussion
- Grubun keskinlik, çeşitli faktörlere bağlıdır. Yani ideal 1-5 ul arasında keskin bantları için yüklenen örnek hacmi, mümkün olduğunca küçük olmalıdır. Ancak, 15'e kadar ul hala kabul edilebilir bir çözüm sağlar yüklenebilir. Keskin bantları daha az örnek hacmi sonuçları.
- Bant kalitesi de jel kalınlığına bağlıdır. 0,75 mm gibi Tiner jeller, 1.5 mm kalınlığında jeller daha iyi sonuçlar göstermektedir.
- Bantların şekli de örnek jel cebine eşit uygulanabilir değilse jel y…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Singapur Akademik araştırma konseyi (ARC) [hibe sayısı 90/07] tarafından desteklenmiştir. Biz, destek için Radiodurans teşekkür ederiz.
References
- Maniatis, T., Jeffrey, A., van deSande, H. Chain length determination of small double- and single-stranded DNA molecules by polyacrylamide gel electrophoresis. Biochimie. 14, 3787-3794 (1975).
- Albright, L. M., Slatko, B. E. Denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Curr Protoc Nucleic Acid Chem. , (2001).
- . . PROTEAN II xi Cell and PROTEAN II xi 2-D Cell Instruction Manual. , (2001).
