Beziehen Blutzellen aus dem hawaiianischen Bobtail Squid Euprymna scolopes Und die Beobachtung ihrer Einhaltung Symbiotic und Non-symbiotischen Bakterien
Summary
Dieses Video wird zeigen, wie Blutzellen (Blutkörperchen) aus dem hawaiianischen Bobtail Squid zu erreichen,<em> Euprymna scolopes</em> Für den Einsatz in zellbiologischen und bakterielle Adhäsion Assays. Blutzellen wird mit einem Fluoreszenzfarbstoff angefärbt werden und ausgesetzt GFP-markierten Bakterien.
Abstract
Studien über die Rolle des Immunsystems bei der Vermittlung von molekularen Signale zwischen nützlichen Bakterien und ihren Wirten haben, in den letzten Jahren bedeutende Beiträge zu unserem Verständnis der Ko-Evolution von Eukaryonten mit ihrer Mikroflora. Die symbiotische Beziehung zwischen den Hawaii-Bobtail Tintenfisch,<em> Euprymna scolopes</em> Und die Biolumineszenz Bakterium<em> Vibrio fischeri</em> Hat als Modellsystem für das Verständnis der Auswirkungen von nützlichen Bakterien auf tierische Entwicklung genutzt. Jüngste Studien haben gezeigt, dass Makrophagen-ähnliche Blutzellen, die einzige zelluläre Komponente des Tintenfisches Host angeborenen Immunsystems, die wahrscheinlich eine wichtige Rolle spielen bei der Vermittlung der Einrichtung und Unterhaltung des Vereins. Dieses Protokoll wird zeigen, wie Blutzellen erhalten Sie bei<em> E. scolopes</em> Und verwenden Sie dann diese Zellen in bakteriellen Bindungsassays. Adult Tintenfische sind zunächst betäubt, bevor Hämolymphe wird mit einer Spritze von der Hauptstraße cephalica Blutgefäß gesammelt. Der Gastgeber Blutzellen, in der extrahierten Hämolymphe enthalten sind, zu chambered Deckgläser aufgeklebt und dann auf grün fluoreszierende Protein-markierten symbiotische ausgesetzt<em> Vibrio fischeri</em> Und nicht-symbiotische<em> Vibrio harveyi</em>. Die Blutzellen werden mit einem fluoreszierenden Farbstoff (Cell Tracker Orange, Invitrogen) gegengefärbt und anschließend visualisiert Fluoreszenz-Mikroskopie.
Protocol
Discussion
Studien über die Rolle des Immunsystems bei der Vermittlung von molekularen Signale zwischen nützlichen Bakterien und ihren Wirten haben, in den letzten Jahren bedeutende Beiträge zu unserem Verständnis der Ko-Evolution von Eukaryonten mit ihrer Mikroflora. Der squid / vibrio System hat sich als gefügig Modellsystem, um grundsätzliche Fragen in diesem Bereich 2,3,5,6,8 beantworten bewährt. Das Licht-Orgel des Tintenfisches Euprymna scolopes erlaubt Kolonisierung ausschließlich durch die leuch…
Acknowledgements
Finanzierungsquellen: University of Connecticut Research Foundation und dem Department of Molecular and Cell Biology an SVN, Sigma Xi Grant-in-Aid-Forschung und Antonio H. und R. Majorie
Romano Graduate Education Fellowship zu AJC
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Lab-Tek chambered #1.0 borosilicate coverglass system (8-chambers) | Thermo-Fisher Scientific | 155411 | ||
| 26.5 G 1ml latex-free insulin syringe | Becton, Dickinson and Company | C34551 | ||
| Cell Tracker Orange | Invitrogen | C34551 | ||
| SteREO Discovery V20 Microscope | Zeiss | |||
| SP2 Confocal Microscope | Leica |
References
- Koropatnick, T. A., Kimbell, J. R., McFall-Ngai, M. J. Responses of host hemocytes during the initiation of the squid-Vibrio symbiosis. Biol. Bull. 212, 29-39 (2007).
- McFall-Ngai, M. J. Unseen forces: the influence of bacteria on animal development. Dev. Biol. 242, 1-14 (2002).
- McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism. Science. 254, 1491-1494 (1991).
- Nyholm, S. V., Stewart, J. J., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Recognition between symbiotic Vibrio fischeri and the haemocytes of Euprymna scolopes. Environ. Microbiol. 11, 483-493 (2009).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis. Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).
- Nyholm, S. V., Stabb, E. V., Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. Establishment of an animal-bacterial association: recruiting symbiotic Vibrios from the environment. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 10231-10235 (2000).
- Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. Sampling the light-organ microenvironment of Euprymna scolopes: description of a population of host cells in association with the bacterial symbiont Vibrio fischeri. Biol Bull. 195, 89-97 (1998).
- Visick, K. L., Ruby, E. G. Vibrio fischeri and its host: it takes two to tango. Curr. Opin. Microbiol. 9, 632-638 (2006).
