大人のウサギの網膜の器官培養
Summary
この記事では、ウサギの網膜とGFPまたは網膜神経節細胞への細胞内マーカーの様々なコードするプラスミドの粒子による遺伝子導入の解剖とインキュベーションを示しています。
Abstract
機能的な神経組織の器官培養系は、神経生物学的研究において重要なツールです。理想的には、そのようなシステムは、イメージング技術、遺伝子操作、および電気生理学的記録と互換性があります。ここでは特殊な装置とほとんどメンテナンスを必要としない成人ウサギの網膜のためのシンプルな相間の組織培養系を提示する。我々は、ウサギの網膜とGFPまたは網膜神経節細胞への細胞内マーカーの様々なコードするプラスミドの粒子による遺伝子導入の解剖とインキュベーションを示す。ウサギの網膜は、この方法では、最大ほとんど全体的な解剖学的構造の変化や個々の形態、神経節およびアマクリン細胞で6日まで存続し続けることができる培養。
Protocol
作る遺伝子銃の弾丸（GOLD） 100％EtOH中で100X PVP（0.5mg/ml）を作る。 BioRad社1.6ミクロンのマイクロキャリアの金の30mgのを秤量し、1.5mlのエッペンドルフチューブに入れてください。 0.5から3μgのプラスミド/ mgの金の濃度を与えるために必要なプラスミドの量を計算し、金のマイクロキャリアとチューブにプラスミドを置きます。必要に応じていくつかのプラスミドを?…
Discussion
1。私はこの方法で何ができる？
- 明らかに細胞形態を参照してください。
- そこから記録するためにラベルの細胞。
- PSD95のような過剰発現するタンパク質、、だけでなく、細胞の応答を調節する他のタンパク質、例えばイオンチャネル、受容体。
- 抑制性RNAを発現する。
2。どのくらい私は大人の網膜を保つことができますか？
- 4日間は大人のウサギも問題あり…
References
- Landreth, . B. W., Agranoff, N. R., Smalheiser, S. M., Crain, M. B., Bornstein, R., Adler, P. J., Magistretti, A. G., Hyndman, W. J., Shoemaker, H., Rehm, T., Schafer, H., Betz, S. U., Kim, H., Takahashi, A. R., Caffe, A., Soderpalm, T., van Veen, H. C., Wong, S., Thompson, D. Y., Yu, S. J., Cringle, V. A., Alder, S. J., Taylor, G. M., Seigel, A. R., Caffe, P., Ahuja, B., Holmqvist, S., Azadi, J., Forsell, I., Holmqvist, J., Hatakeyama, R., Kageyama, S. S., Zhang, X. Y., Fu, C. J., Barnstable, S. W., Wang, X., Mu, W. J., Bowers, W. H., Klein, T., Inoue, M., Hojo, Y., Bessho, Y., Tano, J., Lee, R., Kageyama, A., Kretz, S. H., Hermening , S., Isenmann , I., Liljekvist-Larsson, K., Johansson, B., Reidel, W., Orisme, T., Goldmann, W. C., Smith, U., Wolfrum, H., Xin, J. A., Yannazzo, R. S., Duncan, E. V., Gregg, M., Singh, P., Koulen, S. A., Johnston, D. C., Tang, D. C., Lo, A. K., McAllister, K. a. t. z., LC, L. E., Rajagopalan, J. S., Malter, A. K., McAllister, W. -. B., Gan, J., Grutzendler, W., Wong, R., Wong, J., Lichtman, H., Sato, S., Hattori, S., Kawamoto, I., Kudoh, A., Hayashi, I., Yamamoto, G., Zhang, M. E., Selzer, R. L., Sohn, M. T., Murray, K., Schwarz, J., Nyitray, P., Purray, A. P., Franko, J. A., O’Brien, M., Holt, G., Whiteside, S. C., Lummis, M. H., Hastings, L., Klimaschewski, W., Nindl, M., Pimpl, P., Waltinger, K., Pfaller, P., Kettunen, J., Demas, C., Lohmann, N., Kasthuri, Y., Gong, R. O., Wong, N., Gamper, M. S., Shapiro, M. J., Wirth, P., Wahle, J., O’Brien, S. C., Lummis, A. M., Benediktsson, S. J., Schachtele, S. H., Green, M. E., Dailey, L., Chow, E. M., Levine, T. A., Reh, R. L., Rockhill, F. J., Daly, M. A., MacNeil, S. P., Brown, R. H., Masland, W., Sun, N., Li, S., He, W., Sun, N., Li, S., He, R. C., Stacy, R. O., Wong, E., Strettoi, V., Pignatelli, C., Rossi, V., Porciatti, B., Falsini, V., Pignatelli, E., Strettoi, V. P., Connaughton, D., Graham, R., Nelson, P. H., Edqvist, F., Hallbook, T. C., Jakobs, R. T., Libby, Y., Ben, S. W., John, R. H., Masland, Y., Qin, G., Xu, W., Wang, R., Roizenblatt, J. D., Weiland, S., Carcieri, G., Qiu, M., Behrend, M. S., Humayun, A., Koizumi, G., Zeck, Y., Ben, R. H., Masland, T. C., Jakobs, Explant culture of adult goldfish retina: a model for the study of CNS regeneration. Brain Res. 161, 39-55 (1979).
Citer Cet Article
Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).